KIN17在28例肺癌標(biāo)本中的表達(dá)分析＊

曾 濤，陸光明（.廣東醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，廣東東莞 53808；.廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，廣東廣州 5060）

明確腫瘤發(fā)病機(jī)制與分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)理想的早期篩查指標(biāo)與治療靶標(biāo)對(duì)腫瘤診斷及治療極為重要。肺癌細(xì)胞具有持續(xù)的DNA復(fù)制潛能和蓄積的DNA損傷，而KIN17蛋白與DNA復(fù)制及修復(fù)有關(guān)［1－2］，因此考慮KIN17可能與肺癌細(xì)胞功能有關(guān)。本文通過免疫組化技術(shù)分析KIN17在肺癌組織中的表達(dá)情況，以期為深入探討KIN17在肺癌發(fā)病機(jī)制與治療中的作用奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科于2010年1月至2012年7月經(jīng)手術(shù)切除并病理確診的肺癌標(biāo)本28例，每例標(biāo)本同時(shí)包括腫瘤組織與癌旁組織，石蠟包埋封存；腺癌7例，鱗癌9例，大細(xì)胞癌5例，小細(xì)胞癌7例。

1.2 試劑 鼠抗人KIN17單抗（美國Santa Cruz），ChemMateTMEnVision鼠兔通用型免疫組化檢測(cè)試劑盒（日本Dako），其他試劑均為國產(chǎn)或進(jìn)口分析純。

1.3 方法 所有石蠟切片均行免疫組化染色，陰性對(duì)照以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗。石蠟切片脫蠟至水后，3%H2O2孵育10min，0.01mol／L檸檬酸緩沖液修復(fù)抗原；加入KIN17一抗（1∶100稀釋），4℃過夜；加ChemMateTMEnVision二抗室溫孵育1h，PBS洗凈；DAB工作液顯色，蘇木素復(fù)染，脫水透明，中性樹脂封存。全部切片由兩位病理醫(yī)生采用雙盲法根據(jù)染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)分，≤100分判為低表達(dá)，＞100分判為高表達(dá)［3］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α＝0.05，P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

陰性對(duì)照均無特異性染色；肺癌癌組織標(biāo)本染色較強(qiáng)，92.9%（26／28）肺癌組織為KIN17高表達(dá)，且基本為核定位（圖1）；3.6%（1／28）肺癌癌旁組織為KIN17高表達(dá)，染色普遍較淺；癌組織與癌旁組織KIN17表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 KIN17在肺癌組織中的陽性表達(dá)（標(biāo)尺為30μm）

3 討 論

KIN17蛋白在物種進(jìn)化過程中較為保守，說明其很可能在細(xì)胞中具有“管家功能”［4］。KIN17蛋白與DNA復(fù)制有關(guān)，是多種蛋白DNA復(fù)制復(fù)合物的成分之一。以KIN17抗體作用細(xì)胞，可抑制DNA復(fù)制［1］。紫外線或離子輻射可誘導(dǎo)KIN17蛋白表達(dá)上調(diào)及定位改變。KIN17作為DNA維持蛋白，參與晚期DNA修復(fù)，可對(duì)尚未修復(fù)的DNA損傷進(jìn)行再次修復(fù)，使未修復(fù)病灶組織細(xì)胞DNA得以復(fù)制［2］。

有研究顯示KIN17在各種正常組織中普遍低表達(dá)［4］。本課題組也曾證實(shí)KIN17在乳腺正常上皮細(xì)胞Hs－578Bst中表達(dá)極低，而在乳腺癌細(xì)胞系與腫瘤組織中明顯高表達(dá)［5］。沉默KIN17表達(dá)能抑制乳腺癌細(xì)胞DNA復(fù)制，加劇DNA損傷，抑制腫瘤細(xì)胞增殖與克隆形成，而KIN17表達(dá)上調(diào)可維持腫瘤細(xì)胞DNA復(fù)制及DNA損傷修復(fù)功能，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖；沉默KIN17表達(dá)也可增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。因此，KIN17很可能是潛在的腫瘤治療靶點(diǎn)［5］。本研究顯示，肺癌組織KIN17表達(dá)強(qiáng)度明顯高于癌旁組織，為進(jìn)一步探討該蛋白在肺癌細(xì)胞中的功能及分子調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

［1］ Miccoli L，F(xiàn)rouin I，Novac O，et al.The human stress－activated protein kin17belongs to the multiprotein DNA replication complex and associates in vivo with mammalian replication origins［J］.Mol Cell Biol，2005，25（9）：3814－3830.

［2］ Biard DS，Saintigny Y，Maratrat M，et al.Enhanced expression of the Kin17protein immediately after low doses of ionizing radiation［J］.Radiat Res，1997，147（4）：442－450.

［3］ Merritt WM，Lin YG，Han LY，et al.Dicer，Drosha，and outcomes in patients with ovarian cancer［J］.N Engl J Med，2008，359（25）：2641－2650.

［4］ Kannouche P，Mauffrey P，Pinon－Lataillade G，et al.Molecular cloning and characterization of the human KIN17 cDNA encoding a component of the UVC response that is conserved among metazoans［J］.Carcinogenesis，2000，21（9）：1701－1710.

［5］Zeng T，Gao H，Yu P，et al.Up－regulation of kin17is es－sential for proliferation of breast cancer［J／OL］.PLoS One，2011－09－29［2013－01－12］，http：／／www.ncbi.nlm.nih.gov／pmc／articles／PMC3183049／.