蛋氨酸對(duì)鹵蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化

■蘇琳 黃權(quán)

(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130118)

鹵蟲(chóng)是重要的生物餌料，廣泛的應(yīng)用在水產(chǎn)魚(yú)蝦蟹的幼苗培育過(guò)程中，所謂營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化就是利用鹵蟲(chóng)的非選擇濾食性作為活載體，通過(guò)有目的飼喂特定營(yíng)養(yǎng)豐富的食物給鹵蟲(chóng)，再將強(qiáng)化后的鹵蟲(chóng)投喂給魚(yú)蝦蟹苗；簡(jiǎn)單地說(shuō)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化就是通過(guò)提高鹵蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值傳遞給開(kāi)口苗種的過(guò)程，以滿(mǎn)足水產(chǎn)幼苗的營(yíng)養(yǎng)需求，從而達(dá)到提高魚(yú)蝦蟹幼苗成活率，提高苗種的增長(zhǎng)速率的一種營(yíng)養(yǎng)傳遞的強(qiáng)化方式。鹵蟲(chóng)的強(qiáng)化分為脂肪酸營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化、磷脂的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化、維生素的強(qiáng)化、氨基酸的強(qiáng)化和預(yù)防藥物的載體強(qiáng)化。目前人們于鹵蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化取得一定的效果，在磷脂、維生素、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)的強(qiáng)化上均取得了一定的進(jìn)展，特別是在多不飽和脂肪的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化做了大量的研究，取得了很好的效果，但近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)氨基酸的平衡對(duì)于魚(yú)類(lèi)同樣重要，氨基酸不平衡同樣制約水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和發(fā)育。鹵蟲(chóng)作為飼喂開(kāi)口魚(yú)苗常用的生物餌料，它體內(nèi)的氨基酸并不平衡，特別是蛋氨酸的含量相對(duì)較少，是第一限制性氨基酸，蛋氨酸是常用的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，人們已經(jīng)用蛋氨酸作為飼料中營(yíng)養(yǎng)添加劑對(duì)羅非魚(yú)、軍曹魚(yú)、凡納濱蝦、大黃魚(yú)仔稚魚(yú)等魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)性能、魚(yú)類(lèi)生理、消化和免疫等方面做了大量的研究，但開(kāi)口餌料與顆粒飼料相比無(wú)論從適口性、大小和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值方面都比顆粒飼料更適合作為仔稚魚(yú)的開(kāi)口料。鹵蟲(chóng)作為仔稚魚(yú)常用的開(kāi)口料，氨基酸不平衡尤其是蛋氨酸缺乏，因此人們也開(kāi)始關(guān)注蛋氨酸對(duì)鹵蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化。

1 蛋氨酸

蛋氨酸是甲硫氨酸，是魚(yú)類(lèi)的必需氨基酸，同時(shí)也是魚(yú)類(lèi)的限制性氨基酸之一。蛋氨酸參與蛋白質(zhì)的合成代謝，蛋氨酸的缺乏會(huì)導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成受阻和影響水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育。蛋白質(zhì)是魚(yú)類(lèi)的主要能源，對(duì)于魚(yú)類(lèi)而言飼料中氨基酸的平衡與否直接影響蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值同時(shí)決定著飼料蛋白質(zhì)利用率的高低，因此魚(yú)類(lèi)餌料中氨基酸的平衡十分重要[1]，蛋氨酸是魚(yú)類(lèi)不可缺少的氨基酸。幼魚(yú)早期階段生長(zhǎng)迅速，海洋魚(yú)類(lèi)開(kāi)口苗對(duì)于蛋白質(zhì)的需求相對(duì)較高[2-3]，一旦蛋白質(zhì)不足或氨基酸不平衡，仔稚魚(yú)生長(zhǎng)發(fā)育會(huì)受到嚴(yán)重的影響[4]。Ketola H G[5]研究表明飼料中缺乏蛋氨酸飼料會(huì)導(dǎo)致魚(yú)體發(fā)生白內(nèi)障。Schwarz等[6]研究發(fā)現(xiàn)，鯉魚(yú)攝食缺乏蛋氨酸（蛋氨酸0.49%）飼料85 d后，增重降低40.56%，提高蛋氨酸水平后，鯉魚(yú)的生產(chǎn)性能顯著提高。Murthy等[7]研究表明，當(dāng)飼料蛋白質(zhì)水平提高后，印度鯉生長(zhǎng)水平顯著提高。大量試驗(yàn)證明，魚(yú)類(lèi)如果缺乏蛋氨酸會(huì)導(dǎo)致其生長(zhǎng)發(fā)育受阻，采食量下降，飼料利用率降低。因此，氨基酸的平衡對(duì)于仔魚(yú)來(lái)說(shuō)更尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物生長(zhǎng)主要是機(jī)體蛋白質(zhì)的合成增加[8]，如果蛋氨酸不足則會(huì)影響機(jī)體的多種消化代謝反應(yīng)，蛋氨酸缺乏會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成受阻，蛋白質(zhì)分解代謝加快，這樣的負(fù)平衡會(huì)引起動(dòng)物的生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)緩慢的動(dòng)物受大腦中樞神經(jīng)的調(diào)控會(huì)引起采食量下降[9]。帥柯[10]研究表明，當(dāng)?shù)鞍彼崴綖?.0%時(shí)，幼建鯉的生長(zhǎng)水平極顯著高于對(duì)照組蛋氨酸缺乏組（Met 0.39%），蛋氨酸組的胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶的活力也顯著高于不添加蛋氨酸組，試驗(yàn)表明蛋氨酸能提高動(dòng)物機(jī)體的生長(zhǎng)、促進(jìn)機(jī)體的蛋白質(zhì)和脂肪的消化吸收代謝。于海瑞[11]分別用分別不同梯度的L-蛋氨酸飼料飼喂大黃魚(yú)魚(yú)苗,用飼喂鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體和橈足類(lèi)浮游生物做對(duì)照，結(jié)果表明，隨著蛋氨酸水平的升高，魚(yú)苗的生長(zhǎng)率、成活率、體蛋白分別有一定程度的升高，但均低于對(duì)照組。

2 蛋氨酸的強(qiáng)化方法

目前，人們對(duì)于蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)的方法主要有晶體蛋氨酸強(qiáng)化和包膜蛋氨酸強(qiáng)化兩種方式。Tonheim(2000)[12]用晶體蛋氨酸和包膜蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)，用未添加蛋氨酸作對(duì)照，包膜蛋氨酸是用兩種不同的脂質(zhì)體膜組合成的不同脂質(zhì)體，分別采用純化蛋黃磷脂中磷脂酰膽堿和粗蛋黃磷脂中磷脂酰膽堿和膽固醇結(jié)合成兩種不同組成的脂質(zhì)體來(lái)強(qiáng)化鹵蟲(chóng)，結(jié)果表明，晶體蛋氨酸的鹵蟲(chóng)體內(nèi)蛋氨酸含量為(68.4±3.8)pmol/nauplius未強(qiáng)化蛋氨酸組體內(nèi)蛋氨酸含量為(2.4±1.0)pmol/nauplius，蛋氨酸強(qiáng)化組比未強(qiáng)化組的含量要高出20～30倍，包膜純化蛋黃磷脂中磷脂酰膽堿組鹵蟲(chóng)體內(nèi)蛋氨酸含量為(148.8±27.6)pmol/nauplius，比未添加蛋氨酸組要高出為強(qiáng)化組60倍，比直接強(qiáng)化蛋氨酸組多2倍左右。粗蛋黃磷脂中磷脂酰膽堿組鹵蟲(chóng)體內(nèi)蛋氨酸含量為(90.5±4.1)pmol/nauplius，也比直接強(qiáng)化組要高1倍多；在模擬飼喂大西洋比目魚(yú)仔魚(yú)8 h后鹵蟲(chóng)體內(nèi)的蛋氨酸強(qiáng)化后的鹵蟲(chóng)體內(nèi)的游離蛋氨酸含量仍能保留80%。KovenW.等[13](2001)用DHA含量高，而氨基酸含量不同的強(qiáng)化劑強(qiáng)化鹵蟲(chóng)，強(qiáng)化后DHA/AA分別為3.7、4.6、25.8，用強(qiáng)化后的鹵蟲(chóng)投喂真鯛魚(yú)，35 d后，發(fā)現(xiàn)氨基酸的含量越高，魚(yú)苗的成活率越高，魚(yú)苗的應(yīng)激能力逐漸增強(qiáng)，試驗(yàn)充分證明了，不光是DHA，氨基酸對(duì)于魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)和成活同樣重要，在對(duì)于鹵蟲(chóng)HUFA強(qiáng)化的同時(shí)，對(duì)于氨基酸的強(qiáng)化我們也同樣要引起重視。óscar Monroig(2007)[14]用脂質(zhì)體包膜蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng),采用單層包膜或復(fù)層包膜的蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng),包膜脂質(zhì)體主要是由大豆卵磷脂(SPC)或者二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC），兩者結(jié)合膽固醇（CHO）作為膜穩(wěn)定劑組成用來(lái)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化，晶體蛋氨酸作對(duì)照，單層包膜分別為L(zhǎng)UVextM1(SPC∶CHO=1∶4)、LUVextM2（SPC∶CHO=1∶4；劑量為L(zhǎng)U VextM1組2倍）、LUVextM3（DPPC∶CHO=1∶4）、復(fù)層包膜蛋氨酸 MLVM4（SPC∶CHO=1∶4）和SolutionM（晶體蛋氨酸）對(duì)照組。結(jié)果表明，18 h后MLVM4強(qiáng)化組體內(nèi)蛋氨酸含量顯著高于其他處理組，18～21 h期間除了LU vextM1組蛋氨酸含量有迅速上升的趨勢(shì)外，其他組蛋氨酸含量微小的差異，有緩慢的上升，相反，21～24 h期間中可見(jiàn)5個(gè)處理組都呈現(xiàn)普遍下降的趨勢(shì)，24 h達(dá)到最低點(diǎn)，18～24 h期間對(duì)照組蛋氨酸各個(gè)取樣點(diǎn)蛋氨酸含量最低，試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，復(fù)層脂質(zhì)體是一個(gè)提供蛋氨酸給鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體的有用的工具，復(fù)層脂質(zhì)體與單層脂質(zhì)體相比有更好的包裹蛋氨酸的能力，減少蛋氨酸的損失。

3 影響鹵蟲(chóng)蛋氨酸營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的因素

3.1 鹵蟲(chóng)本身品系不同

不同品系的鹵蟲(chóng)的蛋氨酸的含量是不同的，我國(guó)六個(gè)產(chǎn)地的河北滄州、河北黃驊、山東無(wú)棣、新疆巴里坤湖、西藏措勒、內(nèi)蒙錫林浩特?zé)o節(jié)幼體的蛋氨酸含量分別為0.82、0.88、0.86、0.91、0.93、0.85 g/100 g干重[15]，可以看出不同產(chǎn)地的鹵蟲(chóng)蛋氨酸含量不盡相同，因此對(duì)于鹵蟲(chóng)的蛋氨酸強(qiáng)化需要因地制宜，這樣能達(dá)到最佳的強(qiáng)化效果，減少浪費(fèi)。

3.2 強(qiáng)化的時(shí)間

大量研究表明，游離蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)，鹵蟲(chóng)體內(nèi)的蛋氨酸含量都呈現(xiàn)先迅速升高再緩慢升高迅速下降，最后緩慢下降的一種趨勢(shì)，因此，對(duì)于蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)，要尋找一個(gè)最佳的強(qiáng)化時(shí)間點(diǎn)，在該點(diǎn)鹵蟲(chóng)的體內(nèi)蛋氨酸的含量達(dá)到最高值，這個(gè)時(shí)間就是最佳強(qiáng)化時(shí)間，最佳時(shí)間點(diǎn)的選擇決定著是否達(dá)到最佳強(qiáng)化效果。馬靜[16]用賴(lài)氨酸、裂壺藻、賴(lài)氨酸加裂壺藻組及空白做對(duì)照強(qiáng)化鹵蟲(chóng)的試驗(yàn)，試驗(yàn)進(jìn)行了16 h，16 h結(jié)束時(shí)賴(lài)氨酸組鹵蟲(chóng)體內(nèi)的游離賴(lài)氨酸顯著高于其他3個(gè)組達(dá)到最大值，較強(qiáng)化前多了4倍之多，但裂壺藻組的含量相對(duì)較低。S.K.Tonheim[12]用蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)的實(shí)驗(yàn)，從強(qiáng)化開(kāi)始到16 h,蛋氨酸在鹵蟲(chóng)體內(nèi)的含量隨著強(qiáng)化時(shí)間的推移是呈逐漸升高的趨勢(shì)，16 h后到18 h曲線(xiàn)緩慢降低，18～24 h迅速下降。16 h鹵蟲(chóng)體內(nèi)的蛋氨酸含量達(dá)到最高值。Naz等(2009)[17]的試驗(yàn)中，鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體的強(qiáng)化時(shí)間為16 h，綜上所述，本文認(rèn)為蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)的最佳時(shí)間應(yīng)該為16 h。

3.3 強(qiáng)化的方法

目前，人們用蛋氨酸強(qiáng)化主要有兩種強(qiáng)化方式，一種是用晶體蛋氨酸直接強(qiáng)化法，另一種是用包膜蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)，兩種強(qiáng)化方式的區(qū)別是包膜蛋氨酸用化學(xué)材料包被，難以被鹵蟲(chóng)吸收利用，減少蛋氨酸參與代謝反應(yīng)，而晶體蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)，晶體蛋氨酸被鹵蟲(chóng)吸收后，會(huì)參與體內(nèi)代謝反應(yīng)，蛋氨酸會(huì)轉(zhuǎn)化生成其他含硫化合物，與包膜蛋氨酸相比體內(nèi)的蛋氨酸含量相對(duì)較少，因此包膜蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)比蛋氨酸直接強(qiáng)化鹵蟲(chóng)有更好的強(qiáng)化效果。因此包膜蛋氨酸在鹵蟲(chóng)強(qiáng)化的實(shí)驗(yàn)效果較好。

3.4 強(qiáng)化介質(zhì)中的鹽度、溫度、強(qiáng)化后饑餓的時(shí)間

鹵蟲(chóng)是作為魚(yú)苗的開(kāi)口活餌料，它自身的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高低決定著魚(yú)苗所攝食的營(yíng)養(yǎng)是否全面，強(qiáng)化后的鹵蟲(chóng)可能不能立即飼喂仔稚魚(yú)，在鹵蟲(chóng)轉(zhuǎn)移或保存的過(guò)程中，存在著營(yíng)養(yǎng)成分的損失。介質(zhì)中鹽度的變化，溫度的變化和強(qiáng)化后饑餓時(shí)間的長(zhǎng)短都會(huì)影響鹵蟲(chóng)體內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)成分的代謝，為了使代謝的損失達(dá)到最小，所以在鹵蟲(chóng)強(qiáng)化后，它保存的介質(zhì)中的溫度、鹽度和強(qiáng)化后饑餓的時(shí)間是十分重要的。J.O.Evjemo[18]研究表明，在溫度達(dá)到30℃的高溫時(shí)，強(qiáng)化后的鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體饑餓1 d DHA的損失率達(dá)到92%，但在12℃時(shí)強(qiáng)化后的鹵蟲(chóng)每天DHA的損失率為51%，在相同溫度下（12℃）強(qiáng)化后鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體饑餓每天EPA、其他n-3多不飽和脂肪酸的總量和總油脂的減少率分別為15%、30%和11%。鹵蟲(chóng)體內(nèi)的蛋白質(zhì)在最低溫度（5～8℃）時(shí)是相對(duì)比較穩(wěn)定的幾乎沒(méi)有損失，但隨著溫度的升高，當(dāng)溫度達(dá)到26℃時(shí)，鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體每天蛋白質(zhì)的損失率增長(zhǎng)達(dá)到28%。這說(shuō)明，在鹵蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化后未飼喂魚(yú)苗前，鹵蟲(chóng)保存時(shí)間和保存的溫度十分重要，對(duì)于強(qiáng)化后的鹵蟲(chóng)要低溫保存，鹵蟲(chóng)強(qiáng)化后應(yīng)盡早飼喂魚(yú)苗減少鹵蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的損失。

Cláudia Arag?o[19]在不同鹽度的條件下用扁藻強(qiáng)化鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體24 h，4種鹽度分別為15%、25%、35%和45%，結(jié)果表明，鹽度對(duì)于總氨基酸含量的影響相對(duì)較小，但蛋氨酸有顯著性變化，蛋氨酸從鹽度15%到30%再到35%逐漸減少。Fyhn[20]發(fā)現(xiàn)鹽度與橈足類(lèi)體內(nèi)的必需氨基酸含量有強(qiáng)烈的相關(guān)性，Helland（2000）[21]表明，飼養(yǎng)的鹽度對(duì)于鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體內(nèi)的必需氨基酸成一定的相關(guān)性。但對(duì)于目前的研究，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種相關(guān)性,但是Helland等[21]對(duì)于鹵蟲(chóng)鹽度的研究相對(duì)于目前的研究鹽度比較廣（5%～75%）鹽度對(duì)于浮游生物必需氨基酸的組成是有影響的，必需氨基酸是主要的細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)在海洋無(wú)脊椎動(dòng)物，與無(wú)機(jī)離子不同的是，這些化合物作為滲透劑的使用不會(huì)影響蛋白質(zhì)的功能[22]，事實(shí)表明，盡管鹵蟲(chóng)對(duì)鹽度有很高的耐受性，但鹵蟲(chóng)似乎更適應(yīng)高鹽度與低鹽度相比[23]。

4 總結(jié)

鹵蟲(chóng)是仔稚魚(yú)優(yōu)良的開(kāi)口餌料，由于鹵蟲(chóng)的大小適宜、適口性好、營(yíng)養(yǎng)豐富，常常作為仔稚魚(yú)的開(kāi)口餌料，由于仔稚魚(yú)時(shí)期十分敏感，生長(zhǎng)迅速，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求很高，鹵蟲(chóng)作為開(kāi)口餌料，鹵蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值決定著仔稚魚(yú)苗的成活率和其生長(zhǎng)狀態(tài)，因此，鹵蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)就意味著仔稚魚(yú)的成活率的高低和生長(zhǎng)發(fā)育的快慢。然而鹵蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)并不全面，其中氨基酸不平衡，尤其是蛋氨酸缺乏，為其第一限制氨基酸，同時(shí)也是魚(yú)類(lèi)的限制性氨基酸，人們采用蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)就是增加其營(yíng)養(yǎng)，使其營(yíng)養(yǎng)更加全面，來(lái)飼喂魚(yú)苗，通過(guò)餌料傳遞的方式把營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)傳遞給仔稚魚(yú)，達(dá)到提高養(yǎng)殖水平，擴(kuò)大養(yǎng)殖規(guī)模。

隨著社會(huì)的不斷發(fā)展、經(jīng)濟(jì)的不斷進(jìn)步，人們對(duì)于水產(chǎn)品的需求越來(lái)越大，水產(chǎn)養(yǎng)殖的規(guī)模不斷擴(kuò)大發(fā)展的過(guò)程中，提高水產(chǎn)品苗種的成活率，迅速繁殖，水產(chǎn)幼苗的快速增長(zhǎng)，縮短水產(chǎn)幼苗的生長(zhǎng)周期是我們當(dāng)前的首要任務(wù)，因此，鹵蟲(chóng)作為開(kāi)口餌料，鹵蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)是否均衡對(duì)于魚(yú)苗的生長(zhǎng)，加快魚(yú)苗的生長(zhǎng)代謝起著重要的作用，然而對(duì)于鹵蟲(chóng)的氨基酸不平衡尤其是蛋氨酸含量較少，蛋氨酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)也就引起人們的廣泛關(guān)注，氨基酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)近年來(lái)國(guó)內(nèi)外都有一些研究，但是對(duì)于蛋氨酸強(qiáng)化的研究還不是很全面，添加量沒(méi)有具體的研究，鹵蟲(chóng)內(nèi)體氨基酸的代謝機(jī)理也沒(méi)有具體的研究，因此，本文主要是綜述蛋氨酸的強(qiáng)化的一些進(jìn)展，希望通過(guò)本文能夠引起人們對(duì)于蛋氨酸的關(guān)注能夠加強(qiáng)對(duì)于氨基酸強(qiáng)化鹵蟲(chóng)多方面的研究，同時(shí)也希望能夠?qū)τ谒a(chǎn)苗種的養(yǎng)殖提供幫助。