土家藥材黃瓜香的顯微特征及其薄層色譜鑒別*

佘永紅，楊德泉

(湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗所，湖南 吉首 416000)

土家藥黃瓜香，又名蔓莖堇菜、七星蓮、黃花草、毛毛香，為堇菜科植物蔓莖堇菜(VioladiffusaGing.)的全草，土家語名“拍替塔王嘎那”.《土家族醫(yī)藥學》[1]、《土家族藥學》[2]、《實用土家族藥物》[3]等載其性冷，味甜、微苦，具有益精助孕，生血補虛，敗毒消腫，中和藥毒等功效；主要用于治療精虧不孕，血虛癥，癰瘡諸毒，藥物中毒，跌打損傷，燙傷等.在二十世紀八十年代，湘西自治州人民醫(yī)院用黃瓜香全草蒸雞服用方法，治療再生障礙性貧血，湖南省人民醫(yī)院和湖南省勞動衛(wèi)生研究所用黃瓜香提取物治療再生障礙性貧血，均獲得一定療效[4].藥理研究表明，黃瓜香具有抗菌、抗炎、調控免疫、利膽保肝、抗腫瘤、抗氧化等作用[5-11].在醫(yī)藥市場中，黃瓜香存在同名異物現(xiàn)象，如百合科油點草屬植物黃花油點草(Tricyrtismaculata(D. Don) Machride)的干燥全草，藥材名也為黃瓜香[12]，其功效為潤肺止咳、理氣止痛、散結，與堇菜科植物蔓莖堇菜的黃瓜香功效完全不同.為科學地鑒別土家藥黃瓜香(蔓莖堇菜)藥材，筆者用黃瓜香(蔓莖堇菜)對照藥材作為對照，研究建立黃瓜香(蔓莖堇菜)的薄層色譜鑒別方法，以期為黃瓜香藥材的鑒別提供技術支持.

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

AUW220D電子天平(日本島津公司)；KM5200DE型超聲波清洗器(昆山美美超聲儀器有限公司)；GoodSee-10型薄層色譜成像儀(上?？普苌萍加邢薰?.硅膠G薄層板(青島海浪干燥劑有限公司，批號2017年3月2日，10 cm×20 cm)；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠，批號2018年5月15日，10 cm×20 cm)；硅膠G高效薄層板(青島海洋化工廠分廠，批號2021年5月28日，10 cm×20 cm).本研究所用試劑的純度均為分析純，水為純化水.

1.2 對照品與樣品

1.2.1 對照藥材 筆者在吉首市寨陽村采集了黃瓜香對照藥材，經(jīng)佘永紅主任藥師鑒定為堇菜科植物蔓莖堇菜的全草(圖1).

圖1 黃瓜香植物Fig. 1 Viola diffusa Plants

1.2.2 實驗樣品及來源 2022年4月中旬，筆者在吉首市紅楓林場采集了黃瓜香藥材1號樣品；2022年5月上旬，筆者在吉首市寨陽村采集了黃瓜香藥材2號樣品.采集的樣品，均洗凈，干燥，備用.

2 方法與結果

2.1 藥材性狀

本品多皺縮成團.主根呈長圓錐形，直徑2～5 mm，淡黃色至黃棕色，有稀縱皺紋，具多條細小須根；葉基生，上表面深綠色，下表面灰綠色，展平后葉片呈卵形或卵狀長圓形，長1.5～3.5 cm，寬1～2 cm，先端鈍或稍尖，基部寬楔形，下延于葉柄，邊緣具鈍齒，葉柄具明顯的翅(圖2).

圖2 黃瓜香藥材Fig. 2 Viola diffusa Herbal Medicine

2.2 顯微鑒別

2.2.1 根的橫切面 根的橫切面呈類圓形.表皮2～3列薄壁細胞組成，排列疏松.皮層寬廣，細胞類圓形，薄壁細胞由外向內體積逐漸減小，細胞間隙不發(fā)達；木質部發(fā)達，導管單個或2～6個聚集而成；韌皮部呈壓扁皺縮狀，環(huán)繞木質部排列；無形成層；維管束為有限外韌型(圖3).

2.2.2葉的下表面特征 單細胞非腺毛，有的略彎曲，基部稍膨大，末端狹尖，長20～40 μm，直徑4～8 μm.氣孔多數(shù)呈直軸式，少數(shù)不等式(圖4).

圖3 黃瓜香根橫切面Fig. 3 Viola diffusa Root Cross Section

圖4 黃瓜香葉的下表面特征Fig. 4 Viola diffusa Leaf Cross Section

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液制備 稱取黃瓜香藥材樣品粉末(過2號篩)1 g，加入乙醇30 mL，稀鹽酸10 mL，超聲處理20 min，過濾，濾液水浴蒸干，殘渣再加5 mL乙醇溶解，過濾，濾液水浴蒸干，殘渣用1 mL乙醇溶解，作為供試品溶液.

2.3.2 對照藥材溶液制備 稱取黃瓜香對照藥材粉末(過2號篩)1 g，同2.3.1節(jié)方法制成對照藥材溶液.

2.3.3 鑒別方法 按照薄層色譜法(《中國藥典2020年版》四部通則0502)試驗方法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層色譜板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮(體積比10∶8∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈(365 nm)下檢視.

結果顯示，供試品色譜在與對照藥材色譜相應位置上，均呈現(xiàn)出相同顏色的斑點(圖5).

S—黃瓜香對照藥材;1—黃瓜香藥材1號；2—黃瓜香藥材2號.圖5 黃瓜香薄層色譜圖Fig. 5 Thin Layer Chromatogram of Viola diffusa

2.3.4 耐用性考察 采用2個不同生產(chǎn)廠家的薄層硅膠G薄層板，分別在不同的濕度、溫度條件下，按2.3.3節(jié)方法實驗.

(1)硅膠G薄層板(青島海浪干燥劑有限公司，批號：2017年3月2日)，溫度：28.1 ℃，濕度：70%.實驗結果見圖6.

(2)硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠，批號：2018年5月15日)，溫度：19.8 ℃，濕度：42%.實驗結果見圖7.

S—黃瓜香對照藥材；1—黃瓜香藥材1號；2—黃瓜香藥材2號.圖6 黃瓜香薄層色譜耐用性考察(1)Fig. 6 Durability of Viola diffusa Through Thin Layer Chromatography (1)

S—黃瓜香對照藥材；1—黃瓜香藥材1號；2—黃瓜香藥材2號.圖7 黃瓜香薄層色譜耐用性考察(2)Fig. 7 Durability of Viola diffusa Through Thin Layer Chromatography (2)

從圖6、圖7可以看出，耐用性實驗結果的色譜斑點清晰，分離度較好，結果穩(wěn)定，表明本方法耐用性能較好.

3 討論

黃瓜香為全草類藥材，葉多且易碎.本研究選擇黃瓜香根的橫切面和葉的下表皮顯微結構，作為鑒別特征，方法易于操作，能夠鑒別黃瓜香藥材.彭源貴等[13]報道黃瓜香中含赪桐留醇、棕櫚酸等化學成分，戴嬌嬌[14]分離鑒定了黃瓜香中化學成分，其中包含了表木栓酮、木栓酮、桐甾醇、violaic A、violaic B、violaide、clerosterol galactoside、decorinone、decortinol、isodecortinol、stigmast-25-ene-3β,5α,6β-triol、cerevisterol.因以上成分缺乏市場供應，故采用已知黃瓜香的單體成分作為對照品，建立黃瓜香薄層色譜鑒別方法的條件尚不成熟.因此，本研究以黃瓜香(蔓莖堇菜)對照藥材作為對照，研究建立了黃瓜香(蔓莖堇菜)的薄層色譜鑒別方法，在不同實驗條件下，供試品與對照藥材色譜一致，色譜斑點分離清楚.表明該方法穩(wěn)定性好，可以作為土家藥黃瓜香藥材的鑒別方法.

本研究建立的黃瓜香顯微組織鑒別方法和薄層色譜鑒別方法，具有方法簡便，穩(wěn)定性好等優(yōu)點，可用于黃瓜香藥材的質量控制.