轉(zhuǎn)錄共激活子p300及表觀修飾在高糖致人系膜細(xì)胞代謝記憶中的匯聚作用

蘇紅，周波，段雅倩，杜超

所謂“代謝記憶”現(xiàn)象是指高糖介導(dǎo)的微血管病變即使在后續(xù)血糖控制達(dá)標(biāo)后仍可持續(xù)進(jìn)展[1-2]。體內(nèi)外研究已證實氧化應(yīng)激、晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)形成、蛋白激酶C(PKC)β2的激活等生化異常和表觀遺傳修飾與代謝記憶的啟動和維持關(guān)系密切[3]，但大量隨機(jī)對照試驗卻表明針對上述單一“經(jīng)典”的生化機(jī)制進(jìn)行干預(yù)后結(jié)果并不理想[4]，因此探尋微血管固有細(xì)胞中上述機(jī)制的匯聚點正成為學(xué)界的關(guān)注熱點。本小組及Kaur等[5]均發(fā)現(xiàn)高糖應(yīng)激可誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄共激活子p300激活，且p300可發(fā)揮組蛋白乙?；揎椬饔?，從而使轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的效應(yīng)基因表達(dá)在血糖正常后仍持續(xù)開放。目前，尚不清楚p300是否為代謝記憶各種刺激共同的信號“記憶”分子。為此，本研究以人系膜細(xì)胞(HMCs)作為體外模擬高糖記憶的研究對象，觀察p300及組蛋白乙酰化、PKCβ2和活性氧(ROS)的表達(dá)規(guī)律，并探討p300和組蛋白乙?；鞍譎3(Ac-H3)、Ac-H4在其中可能的潛在作用，為整合代謝記憶機(jī)制及防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞及主要試劑 HMCs由重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所惠贈。PKCβ2重組腺病毒載體(Ad5-PKCβ2)、重組腺病毒空載體(Ad5-null)的合成及鑒定已由本課題組完成[6]。DMEM培養(yǎng)基購自Hyclone公司；新生牛血清購自杭州四季青公司；牛血清白蛋白和CGP53353購自Sigma公司；D-葡萄糖購自加拿大Bio Basic公司；兔抗PKCβ2、兔抗p300及兔抗Ac-Histone H4多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司；兔抗Ac-Histone H3多克隆抗體購自Abcam公司；辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔及山羊抗小鼠IgG購自北京博奧森公司；活性氧檢測試劑盒和β-actin小鼠單克隆抗體購自江蘇碧云天公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) HMCs用含10%新生牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)于37℃，飽和濕度5%CO2的培養(yǎng)箱中。隔日換液，實驗前給予無血清DMEM培養(yǎng)液孵育細(xì)胞24h使其生長同步化，根據(jù)后續(xù)實驗設(shè)計分組培養(yǎng)細(xì)胞。

1.2.2 AGEs-BSA的制備 參照Valencia等[7]的方法并進(jìn)行改良。在1mol/L、pH為7.4的PBS溶液中加入一定量的葡萄糖使其終濃度為500mmol/L，待充分溶解后，加入牛血清白蛋白(BSA)溶液，使其終濃度為50mg/ml。采用0.22μm的針頭濾器過濾除菌，避光于37℃孵箱孵育90d。以不含葡萄糖的BSA溶液按上述方法配置作為對照。經(jīng)孵育的血清用PBS充分透析除去未結(jié)合的葡萄糖，過濾除菌，分裝封口后冷凍保存?zhèn)溆谩Ｈ∩倭繕悠凡捎脽晒夥止夤舛葍x(激發(fā)波長380nm，發(fā)射波長450nm)進(jìn)行光譜掃描及濃度測定。結(jié)果以任意熒光單位(AFU)表示。

1.2.3 實驗分組 根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，分別用H2O2(100μmol/L，30min)和AGEs(250μg/ml，48h)干預(yù)HMCs，并選擇感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection，MOI)=10進(jìn)行Ad5-PKCβ2及Ad5-null的轉(zhuǎn)染。

1.2.3.1 高糖誘導(dǎo)代謝記憶模型 模擬高糖誘導(dǎo)代謝記憶，觀察高糖誘導(dǎo)HMCs對p300及組蛋白乙?；磉_(dá)是否有記憶效應(yīng)，同時是否伴有氧化應(yīng)激和PKCβ2的持續(xù)激活。實驗分為：正糖組(NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d)；滲透壓組(LG，NG+20mmol/L L-葡萄糖×2d)；高糖組(HG，25mmol/L D-葡萄糖×2d)；記憶組(M1、M2、M3，25mmol/L D-葡萄糖×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3、6、9d)；持續(xù)正糖組(5.5mmol/L D-葡萄糖×9d)。

1.2.3.2 糖基化終末產(chǎn)物記憶模型 模擬糖基化終末產(chǎn)物記憶，分為正糖組(NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d)；正糖+AGEs組(AGEs，5.5mmol/L D-葡萄糖+250μg/ml AGEs×2d)；AGEs記憶組(AGEs-M，5.5mmol/L D-葡萄糖+250μg/ml AGEs×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)；BSA組(NG+BSA，給予同濃度BSA對照)。

1.2.3.3 H2O2模擬氧化應(yīng)激記憶模型 體外用H2O2模擬氧化應(yīng)激記憶，分為正糖組(NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×30min)；正糖+H2O2組(H2O2，5.5mmol/L D-葡萄糖+100μmol/L H2O2×30min)；H2O2記憶組(H2O2-M，5.5mmol/L D-葡萄糖+100μmol/L H2O2×30min+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)；正糖對照組(NG3，5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)。

1.2.3.4 PKCβ2激活記憶模型 體外轉(zhuǎn)染PKCβ2過表達(dá)載體模擬PKCβ2激活記憶，分為正糖組(NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d)；高糖組(HG，25mmol/L D-葡萄糖×2d)；記憶組(M，25mmol/L D-葡萄糖×2d +5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)；空載體記憶組(HN，25mmol/L D-葡萄糖+Ad5-null×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)；PKCβ2激活記憶組(PO，25mmol/L D-葡萄糖+Ad5-PKCβ2×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)；PKCβ2抑制劑記憶組(PI，25mmol/L D-葡萄糖×2d+10μmol/L CGP53353+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)。

1.2.4 細(xì)胞內(nèi)ROS檢測 不帶熒光的二氫二氯熒光素(DCFDA)可自由穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)可被ROS氧化生成熒光物質(zhì)DCF，其熒光強(qiáng)度可反映細(xì)胞內(nèi)ROS含量。細(xì)胞經(jīng)上述分組培養(yǎng)于6孔板后，按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，終濃度為10μmol/L。吸棄板內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入1ml 10μmol/L DCFH-DA，37℃避光孵育45min，采用無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次，用倒置熒光顯微鏡及熒光酶標(biāo)儀(激發(fā)波長485nm，發(fā)射波長530nm)檢測各組細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度。

1.2.5 Western blotting檢測蛋白表達(dá) 參照文獻(xiàn)[5]方法并加以改良，根據(jù)預(yù)先分組處理收集細(xì)胞，提取總蛋白并定量。分別經(jīng)6%(p300)、10%(PKCβ2)和15%(Ac-H3、Ac-H4)SDS-PAGE電泳分離后，電轉(zhuǎn)至PVDF膜；分別加入兔抗p300多克隆抗體(1:500)、兔抗PKCβ2多克隆抗體(1:500)、兔抗Ac-H3多克隆抗體(1:3000)、兔抗Ac-H4多克隆抗體(1:500)和β-actin抗體(1:1000)，于4℃過夜；TBST洗膜后再分別加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔及山羊抗小鼠IgG(1:2500稀釋)，37℃孵育1h；采用ECL試劑化學(xué)發(fā)光顯色，用Quantity One分析軟件系統(tǒng)測定蛋白條帶灰度值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 各實驗獨立重復(fù)3次。應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以x±s表示。采用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行多組均數(shù)間計量資料的比較，組內(nèi)兩兩比較采用SNK-q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 高糖記憶對HMCs表達(dá)ROS水平的影響與NG組相比，LG組和NC組ROS熒光強(qiáng)度無統(tǒng)計學(xué)差異。HG組ROS熒光強(qiáng)度較NG組增加了87%(P＜0.05)，而高糖培養(yǎng)后再正糖培養(yǎng)3、6、9d，ROS熒光強(qiáng)度仍較NG組分別增加了79%、63%和48%(P＜0.05，圖1)。該結(jié)果表明，高糖可增加HMCs ROS表達(dá)，當(dāng)糖濃度恢復(fù)正常后ROS仍持續(xù)激活，且至少可以存在9d。

2.2 高糖記憶對HMCs p300、Ac-H3、Ac-H4和PKCβ2蛋白水平表達(dá)的影響 與NG組相比，HG組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)，分別增加了115%、93%和87%(P＜0.05)；而LG組與NG組相比，各蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明高糖可上調(diào)p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)，該效應(yīng)與滲透壓無關(guān)。高糖培養(yǎng)2d后再繼續(xù)正糖培養(yǎng)3、6、9d，p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白的表達(dá)仍較NG組顯著升高(P＜0.05)，其中M3組較NG組上述蛋白表達(dá)分別增加了75%、49%和47%(P＜0.05)。同樣，高糖可誘導(dǎo)HMCs PKCβ2蛋白顯著上調(diào)，與NG組比較增加了130%，而M1、M2和M3組PKCβ2蛋白表達(dá)較NG組表達(dá)仍增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，圖2)。以上結(jié)果提示，高糖誘導(dǎo)的HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)增高在糖濃度恢復(fù)正常后持續(xù)存在，且同時伴PKCβ2表達(dá)的持續(xù)激活。

2.3 AGEs誘導(dǎo)糖基化終產(chǎn)物記憶模型下HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá) 基于上述高糖記憶時間，選取AGEs干預(yù)后再正糖培養(yǎng)3d模擬糖化終產(chǎn)物記憶。Western blotting檢測結(jié)果顯示，在生理糖濃度(5.5mmol/L)時，BSA并不增加HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白的表達(dá)，而AGEs組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)水平均顯著升高，較對照組分別升高了1.73倍、1.08倍和1.05倍(P＜0.05)。AGEs-M組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)較對照組分別升高了1.47倍、0.95倍和1.03倍(P＜0.05，圖3)。該結(jié)果提示，AGEs誘導(dǎo)HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)上調(diào)，且當(dāng)除去AGEs后繼續(xù)正糖培養(yǎng)3d，p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)差異仍有統(tǒng)計學(xué)意義，存在記憶效應(yīng)。

圖1 各組人腎小球系膜細(xì)胞ROS水平變化(熒光顯微鏡 ×200)Fig. 1 Changes of intracellular reactive oxygen levels in each group of HMCs (Fluorescence microscope ×200)A. Normal glucose group; B. Osmotic control group; C. High glucose group; D. High glucose (2d)+normal glucose (3d) group; E. High glucose(2d)+normal glucose (6d) group; F. High glucose (2d)+normal glucose (9d) group; G. Continue normal glucose (9d) group

圖2 高糖誘導(dǎo)各組系膜細(xì)胞p300、Ac-H3、Ac-H4蛋白和PKCβ2蛋白表達(dá)的Western blotting檢測Fig. 2 Expression of p300, Ac-H3, Ac-H4 and PKCβ2 protein induced by high glucose in each group of HMCs (Western blotting)NG. Normal glucose group; LG. Osmotic control group; HG.High glucose group; M1. high glucose (2d)+normal glucose (3d)group; M2. High glucose (2d)+normal glucose (6d) group; M3. High glucose (2d)+normal glucose (9d) group; NC. Continue normal glucose (9d) group

圖3 AGEs干預(yù)系膜細(xì)胞各組p300、Ac-H3、Ac-H4蛋白表達(dá)水平的Western blotting檢測Fig. 3 Expression of p300, Ac-H3 and Ac-H4 protein induced by AGEs in each group of HMCs (Western blotting)NG. Normal glucose group; AGEs. Normal glucose+AGEs group;AGEs-M. Normal glucose+AGEs followed by normal glucose for 3d group; BSA. Normal glucose +BSA group

2.4 H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激記憶模型下HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白的表達(dá) Western blotting顯示，H2O2干預(yù)系膜細(xì)胞后p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)水平均升高，較對照組分別升高了103%、85%和79%(P＜0.05，圖4)，而H2O2-M組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明單純H2O2誘導(dǎo)氧化記憶模型下p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)記憶效應(yīng)不明顯。

2.5 PKCβ2激活記憶模型下HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá) 采用增強(qiáng)和抑制雙重策略，如圖5所示，與M組相比，HN組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；PO組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)較M組進(jìn)一步上調(diào)，伴有PKCβ2蛋白表達(dá)增加，分別為M組的1.25倍、1.06倍、1.10倍和1.17倍(P＜0.05)；而PKCβ2抑制劑則可下調(diào)上述蛋白表達(dá)(P＜0.05)。提示PKCβ2激活介導(dǎo)高糖所致HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4的記憶效應(yīng)。

圖4 H2O2干預(yù)系膜細(xì)胞各組p300、Ac-H3、Ac-H4蛋白表達(dá)水平的Western blotting檢測Fig. 4 Expression of Ac-H3, Ac-H4 and p300 proteins in each group of HMCs after exposure to hydrogen peroxide (Western blotting)NG. Normal glucose group; H2O2. Normal glucose+H2O2 group;H2O2-M. Normal glucose+H2O2 followed by normal glucose for 3d group; NG3. Normal glucose control group

圖5 PKCβ2激活對系膜細(xì)胞各組p300、Ac-H3、Ac-H4蛋白表達(dá)水平的影響(Western blotting)Fig. 5 Infl uence of PKCβ2 activation on the expression of Ac-H3,Ac-H4 and p300 protein in each group of HMCs (Western bloは ing)NG. Normal glucose group; HG. High glucose group; M. Memory group; HN. High glucose+empty vector memory group; PO. High glucose+PKCβ2 memory group; PI. High glucose+ PKCβ2 inhibitor CGP53353 memory group

3 討 論

自2008年EI-Osta等[8]首次發(fā)現(xiàn)短暫高糖即可使核因子-κB亞基p65啟動子區(qū)組蛋白甲基化重塑以來，表觀遺傳學(xué)修飾與代謝記憶的關(guān)系開始受到重視。與組蛋白甲基化既可開放亦可關(guān)閉基因表達(dá)的作用不同，組蛋白乙?；Ｒ蛑泻碗姾珊驮鰪?qiáng)疏水性作用，使轉(zhuǎn)錄因子更易與DNA結(jié)合，引起RNA聚合酶順利通過核小體陣列，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄事件的發(fā)生[9]。本研究結(jié)果顯示，高糖負(fù)荷HMCs可顯著上調(diào)Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)，國外學(xué)者采用染色質(zhì)共沉淀-測序技術(shù)分析了高糖負(fù)荷血管細(xì)胞表觀修飾模式，結(jié)果發(fā)現(xiàn)組蛋白H3K9、H3K14呈高度乙?；⑴c了內(nèi)皮功能異常的發(fā)生[10]。他們同時還發(fā)現(xiàn)預(yù)先高糖培養(yǎng)HMCs 2d再恢復(fù)正糖培養(yǎng)3、6、9d，Ac-H3和Ac-H4蛋白水平仍較正糖組顯著上調(diào)，與Zhong等[11]在細(xì)胞和糖尿病大鼠記憶模型中的研究結(jié)果相似。以上結(jié)果表明高糖可誘導(dǎo)靶細(xì)胞染色質(zhì)組蛋白乙?；厮埽以撔?yīng)在血糖恢復(fù)正常后仍持續(xù)存在。

研究表明，代謝記憶的分子本質(zhì)是糖尿病誘導(dǎo)的關(guān)鍵靶細(xì)胞中特定轉(zhuǎn)錄復(fù)合器在血糖正常后持續(xù)啟動，介導(dǎo)后續(xù)核內(nèi)基因表達(dá)譜異常[8]。已證實基因轉(zhuǎn)錄不僅受到眾多轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄共激活子的調(diào)控，還受到表觀遺傳調(diào)控，而后者可作為一種標(biāo)記或語言，隨細(xì)胞分裂而持續(xù)傳遞，其中兼有多功能轉(zhuǎn)錄共激活子和組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(HAT)活性的p300在代謝記憶中的變化規(guī)律備受關(guān)注。本研究結(jié)果顯示，高糖負(fù)荷HMCs可顯著上調(diào)p300表達(dá)伴Ac-H3、Ac-H4蛋白表達(dá)增加。Yun等[12]在高糖培養(yǎng)的單核細(xì)胞模型中，亦發(fā)現(xiàn)p300蛋白表達(dá)上調(diào)和HAT活性增強(qiáng)。本研究還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)高糖培養(yǎng)2d恢復(fù)正糖培養(yǎng)后，p300蛋白表達(dá)仍較正糖組顯著增高，且至少可持續(xù)9d。p300包含多個保守結(jié)構(gòu)域[13]，不僅可提供多蛋白復(fù)合物裝配的支架，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子和基本轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的橋梁作用，而且p300具有HAT活性，可催化乙酰輔酶A中的乙?；D(zhuǎn)移到組蛋白N-端賴氨酸殘基上，通過表觀修飾導(dǎo)致核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)、環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)等轉(zhuǎn)錄因子活性增加，從而誘導(dǎo)代謝記憶表型形成[8]。

高糖介導(dǎo)的微血管病變“記憶”效應(yīng)的發(fā)生是多物質(zhì)參與、多因素、多環(huán)節(jié)的復(fù)雜病理生理過程[14]。本研究發(fā)現(xiàn)HMCs于高糖作用后ROS水平顯著升高，同時伴有PKCβ2的激活，當(dāng)恢復(fù)正糖培養(yǎng)3、6、9d后，ROS水平及PKCβ2蛋白表達(dá)較正糖組仍顯著上調(diào)，此結(jié)果與本小組的前期研究[15]及Roy等[16]的研究結(jié)果類似。有趣的是，雖然高糖可引起ROS增加伴隨p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)上調(diào)，但是本研究采用H2O2模擬氧化應(yīng)激記憶，H2O2干預(yù)后去除刺激因素再正糖培養(yǎng)3d，原先上調(diào)的p300、Ac-H3及Ac-H4蛋白水平則顯著下降，說明單純的氧化應(yīng)激并不介導(dǎo)高糖引起的HMCs p300及組蛋白乙?；洃浶?yīng)。國外學(xué)者Ceriello等[17]認(rèn)為ROS是病理生理狀態(tài)下生化反應(yīng)的瞬時代謝產(chǎn)物，可被機(jī)體正常抗氧化防御系統(tǒng)清除，在控制血糖至正常后不易在機(jī)體內(nèi)長期蓄積，難以解釋糖尿病患者持續(xù)十幾年或更長時間的代謝記憶，與本研究結(jié)論一致。但去除高糖后，高糖引起ROS增加伴隨p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)上調(diào)持續(xù)存在的機(jī)制尚未明了。我們認(rèn)為此可能與高糖誘發(fā)氧化應(yīng)激，加重了PKCβ2激活，形成惡性循環(huán)有關(guān)。本實驗通過重組腺病毒Ad5-PKCβ2過表達(dá)模擬PKCβ2激活記憶現(xiàn)象，結(jié)果顯示PKCβ2激活可進(jìn)一步上調(diào)p300及乙?；M蛋白的表達(dá)，且該效應(yīng)在正糖培養(yǎng)后仍持續(xù)存在，而給予PKCβ2選擇性抑制劑CGP53353處理則可使上述蛋白的表達(dá)水平明顯下調(diào)。同時本小組既往研究已證實，給予抗氧化劑可下調(diào)正糖培養(yǎng)后原本由高糖誘導(dǎo)的PKCβ2持續(xù)激活，進(jìn)一步支持氧化應(yīng)激-PKCβ2在高糖誘導(dǎo)的p300及組蛋白乙酰化重塑記憶效應(yīng)中的重要作用[15]。有研究表明，高糖誘導(dǎo)的ROS生成增多，可引起DNA鏈斷裂，導(dǎo)致核內(nèi)DNA修復(fù)酶-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶過度激活，適應(yīng)性地上調(diào)p300及組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)活性，開放抗氧化基因表達(dá)以利于DNA修復(fù)，但當(dāng)伴有PKCβ2激活時，通過絲裂素活化蛋白激酶和蛋白激酶B信號途徑，從而使短期、適應(yīng)性的表觀修飾轉(zhuǎn)變?yōu)殚L期、持續(xù)性的p300激活和組蛋白修飾，即使高糖因素撤出，仍可造成靶細(xì)胞的持續(xù)損害[18]。此外，本研究還在AGEs模擬的蛋白非酶糖化記憶模型下，證實p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白在AGEs干預(yù)組表達(dá)較對照組顯著升高，繼續(xù)正糖培養(yǎng)后各蛋白表達(dá)仍顯著上調(diào)，提示AGEs對轉(zhuǎn)錄共刺激子p300及組蛋白乙酰化有記憶效應(yīng)。研究表明，AGEs可通過AGEs受體(RAGE)，使NF-κB激活，介導(dǎo)RAGE mRNA表達(dá)增加，形成RAGE-NF-κB正反饋環(huán)[19]。目前已在多個細(xì)胞系中觀察到NF-κB活性受p300及HAT活性的調(diào)節(jié)，因此我們推測一旦AGEs作用于靶細(xì)胞，活化RAGE-p300-NF-κB正反饋環(huán)，就可不依賴于AGEs，表現(xiàn)出持續(xù)激活p300的記憶特征。總之，本研究結(jié)果顯示高糖誘導(dǎo)的HMCs p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)上調(diào)存在記憶效應(yīng)，且p300及組蛋白乙酰化可能系高糖致ROS、AGEs、PKCβ2記憶刺激的匯聚點。此不僅將代謝記憶的生化機(jī)制和表觀遺傳統(tǒng)一起來，而且亦為關(guān)閉代謝記憶探索了新的方向。

志謝：感謝眼科學(xué)重慶市市級重點實驗室在本研究中給予的支持！

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