寄生蟲病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

王光雷

（新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊830000）

寄生蟲病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

王光雷

（新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊830000）

寄生蟲病在我國(guó)非常普遍，危害嚴(yán)重。本文詳細(xì)介紹了對(duì)動(dòng)物寄生蟲病的各種實(shí)驗(yàn)室診斷方法、診斷液的配制、使用方法、蟲種鑒定方法，以及作者在長(zhǎng)期寄生蟲病診斷方面的經(jīng)驗(yàn)，可為寄生蟲病的診斷、治療、蟲種鑒定提供幫助。

寄生蟲??；實(shí)驗(yàn)室診斷

動(dòng)物寄生蟲病在我國(guó)比較嚴(yán)重，寄生蟲病主要呈慢性、消耗性危害動(dòng)物的健康，寄生蟲病是制約畜牧業(yè)發(fā)展的重要因素之一。在我國(guó)常見的寄生蟲主要有肝片吸蟲、雙腔吸蟲、絳蟲、消化道線蟲、肺絲蟲、原蟲、外寄生蟲等，這些寄生蟲寄生在動(dòng)物的體表、肝臟、肺臟、消化道內(nèi)，不斷的吸取血液、奪取營(yíng)養(yǎng)、損害組織器官，造成動(dòng)物生長(zhǎng)緩慢、消瘦、生產(chǎn)性能下降、母畜流產(chǎn)等，感染嚴(yán)重的動(dòng)物甚至出現(xiàn)死亡，為了有效消滅和控制這些寄生蟲病，必須對(duì)寄生蟲病病原進(jìn)行鑒定，以便對(duì)癥下藥，科學(xué)驅(qū)蟲。

1 根據(jù)癥狀對(duì)寄生蟲病的診斷

寄生蟲除骨頭不能寄生外，可寄生在全身的各個(gè)系統(tǒng)和組織中。宿主出現(xiàn)的臨床癥狀和寄生部位密切相關(guān)。

蟲體寄生在消化系統(tǒng)(胃、腸、肝、胰)中，宿主出現(xiàn)消化不良，腸炎，拉稀，便血，消瘦，貧血等癥狀。如線蟲、絳蟲、吸蟲等。

蟲體寄生在神經(jīng)系統(tǒng)(腦、脊髓)中，宿主出現(xiàn)沉郁，轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)，倒地劃泳，癱瘓等癥狀。如羊的腦包蟲病，馬腦脊髓絲蟲病（牛腹腔絲蟲幼蟲）。

蟲體寄生在呼吸系統(tǒng)(鼻腔、氣管、肺)中，宿主出現(xiàn)呼吸困難，咳嗽，肺炎，體溫升高等癥狀。如羊鼻蠅蛆病，大、小型肺絲蟲病。

蟲體寄生在血液中，宿主出現(xiàn)體溫升高，黃膽，貧血，精神沉郁，厭食。如伊氏錐蟲、泰勒焦蟲、血吸蟲等。

蟲體寄生在體表，宿主出現(xiàn)騷癢不安，踢咬患部，皮膚發(fā)紅，破損，增厚，掉毛等。如羊的疥癬病、蜱病。

蟲體寄生在眼內(nèi)，宿主出現(xiàn)羞明，流淚，眼炎，失明等癥狀。如絲狀線蟲進(jìn)入非固有宿主馬、牛眼前房，引起的渾睛蟲病。吸吮線蟲寄生在馬牛結(jié)膜囊、第三眼臉和淚管內(nèi)。

蟲體寄生在泌尿系統(tǒng)（腎）中，宿主出現(xiàn)尿液呈白色、粘稠，有時(shí)有膿液；母畜不孕，公畜失去交配能力等。如豬的有齒冠尾線蟲病。

蟲體寄生在肌肉內(nèi)，多數(shù)無明顯癥狀。如豬囊蟲、牛囊蟲、住肉孢子蟲、旋毛蟲等。

少數(shù)寄生蟲寄生部位與癥狀無明顯關(guān)系，如美麗筒線蟲寄生在食道粘膜下。

2 寄生蟲病的活體診斷

2.1 外寄生蟲的鑒定

硬蜱、軟蜱、癢螨、疥螨、毛虱、血虱、羊蜱蠅、蠕形蚤等外寄生蟲形態(tài)較大，采集后去除雜物，洗凈后放入70%的酒精中，帶回實(shí)驗(yàn)室，在解剖鏡下進(jìn)行觀察鑒定。

癢螨和疥螨蟲體較小，癢螨的大小在0.7 mm以下，疥螨的大小在0.5 mm以下，眼觀不易發(fā)現(xiàn)。螨蟲的診斷方法如下：用毛剪剪去皮膚病變部位與正常部位交界處的羊毛，然后用手術(shù)刀垂直刮取交界處皮膚，直到皮膚微微出血，將刮下的皮屑放在平皿內(nèi)，在有黑色襯底的平臺(tái)上觀察，可用眼觀、放大鏡進(jìn)行觀察，必要時(shí)可放到立體顯微鏡下觀察。

2.2 蠕蟲和球蟲的診斷方法

對(duì)于吸蟲、線蟲、肺絲蟲、棘頭蟲、絳蟲、球蟲的診斷，可使用新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的國(guó)家專利產(chǎn)品《動(dòng)物糞便蟲卵診斷盒》和《肺絲蟲幼蟲診斷盒》進(jìn)行診斷。

2.2.1 《動(dòng)物糞便蟲卵診斷盒》漂浮法的操作方法

漂浮法主要用于動(dòng)物糞便中線蟲蟲卵、絳蟲蟲卵和球蟲的診斷。操作方法如下：

a.打開《動(dòng)物糞便蟲卵診斷盒》，取出試管架和飽和鹽水瓶。

b.用鑷子將2 g糞樣放入燒杯中，加飽和鹽水20 mL，用攪棒充分?jǐn)嚢?。然后用紗網(wǎng)將漂浮物撈出。

c.通過濾網(wǎng)將充分?jǐn)嚢璧募S液過濾到試管內(nèi)，液面略高于試管口。

d.將蓋玻片輕放在試管上，靜置20 min。

e.將蓋玻片移至載玻片上，然后放到顯微鏡下進(jìn)行觀察鑒定?？匆娤x卵，與動(dòng)物糞便蟲卵模式圖進(jìn)行對(duì)照，即可做出診斷結(jié)果。

2.2.2 《動(dòng)物糞便蟲卵診斷盒》沉淀法的操作方法

沉淀法主要用于動(dòng)物糞便中吸蟲蟲卵的診斷。操作方法如下：

a.用鑷子將2 g糞樣放入燒杯中，加入常水20 mL，用攪棒充分?jǐn)嚢琛?/p>

b.通過濾網(wǎng)將充分?jǐn)嚢璧募S液過濾到試管內(nèi)。

c.靜置20 min，棄上清液，約留2～3 mL；然后再往試管內(nèi)加滿常水。

d.靜置20 min，棄上清液，約留2～3 mL；

e.用吸管輕輕從上往下吸出1.5～2.5 mL，試管內(nèi)剩約0.5 mL。

f.充分搖動(dòng)試管，并將剩余液體吸入吸管中，滴加到載玻片上。

g.將蓋玻片移至載玻片上，然后放到顯微鏡下進(jìn)行觀察鑒定?？匆娤x卵，與動(dòng)物糞便蟲卵模式圖進(jìn)行對(duì)照，即可做出診斷結(jié)果。

用漂浮法和沉淀法診斷蠕蟲病感染情況時(shí)，蟲卵鑒定一般只能鑒定到屬，但對(duì)驅(qū)蟲藥品的選擇使用沒有影響。

2.2.3 蟲卵的保存方法

將收集的蟲卵放入保存液中。

保存液配方：福爾馬林10 mL、95%酒精30 mL、甘油40 mL、蒸餾水56 mL。

2.2.4 《肺絲蟲幼蟲診斷盒》的操作方法

a.打開《肺絲蟲幼蟲診斷盒》，取出漏斗架及器皿。

b.取15粒（15 g）糞樣，用紗布包裹并系緊，然后放在漏斗中。

c.往漏斗內(nèi)加入40℃溫水，以不溢出為宜，放置30 min。

d.用止水夾夾住膠管，然后取下膠管下方的小試管。

e.用吸管輕輕從液面的上方向下吸出液體，棄之，使試管內(nèi)剩余0.5～1 mL液體。

f.用吸管吸取剩余部分，滴加到載玻片上，然后蓋上蓋玻片。

g.放到顯微鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)游動(dòng)的蟲體，便可做出診斷。

2.2.5 血液原蟲的鑒定

血液原蟲主要包括巴貝斯蟲、泰勒焦蟲、邊緣邊蟲、伊氏錐蟲等。對(duì)原蟲的診斷，主要有兩種方法，一種是采一滴新鮮血液滴加到，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下直接觀察；另一種是采血，制作血片，然后染色觀察、高倍鏡下進(jìn)行鑒定。

姬姆薩爾染液（原液）的配制：稱0.6 g姬姆爾薩染料，放入50 mL甘油中，60℃水浴1.5 h，之后加入甲醇50 mL，靜置1 d，過濾裝瓶，此液即為原液。

染色方法：在染色前，先配制染液。每100 mL蒸餾水加2 mL原液。

檢查方法：制作血片、甲醇固定、干燥、放入染液中1至數(shù)小時(shí)、取出水洗、干燥后鏡檢。

3 寄生蟲標(biāo)本的采集方法

3.1 建立采集標(biāo)本登記表

登記表內(nèi)容包括畜主、時(shí)間、地點(diǎn)、畜種、年齡、性別、體重、采集的部位、數(shù)量等。

3.2 準(zhǔn)備剖檢器械用品

在進(jìn)行標(biāo)本采集前，必須做好準(zhǔn)備工作，如采集標(biāo)本所用的各種器械和用品。采集標(biāo)本所用的器械有：生物顯微鏡、解剖顯微鏡、載玻片、蓋玻片、不同直徑的平皿、注射器、手術(shù)剪、手術(shù)刀、鑷子、挑蟲針、塘瓷盤、放大鏡、量筒、標(biāo)本瓶、標(biāo)簽、酒精、酒精燈、食鹽、線繩、水桶、手套、工作服、肥皂、毛巾、消毒液等。

3.3 常規(guī)剖檢采集標(biāo)本的順序

采血做血片；檢查體表有無外寄生蟲；常規(guī)剖檢；分離各臟器，消化道要分段雙結(jié)扎；然后對(duì)頭部（眼、鼻腔、腦、舌）、肌肉、腹腔、后腔靜脈、各臟器進(jìn)行檢查。

現(xiàn)將各系統(tǒng)的檢查方法分述如下：

a.肌肉的檢查：檢查有無囊尾蚴、旋毛蟲、住肉孢子蟲。

b.腹腔液的檢查：檢查有無腹腔絲蟲。

c.后腔靜脈的檢查：檢查血管內(nèi)有無血吸蟲。

d.頭部的檢查：檢查眼結(jié)膜和結(jié)膜腔，剖開眼球，將前房水收集于平皿中，在放大鏡下檢查有無眼蟲。檢查鼻腔有無羊鼻蠅蛆。檢查腦內(nèi)有無多頭蚴（腦包蟲）。檢查舌內(nèi)有無大型住肉孢子蟲。

f.呼吸系統(tǒng)的檢查：檢查肺表面有無棘球蚴包囊；有無寄生蟲性結(jié)節(jié)，有些小型肺絲蟲寄生在這些結(jié)節(jié)中；之后，用剪刀將氣管、支氣管、小支氣管剪開，檢查有無蟲體大小肺絲蟲。

g.肝臟的檢查：檢查肝表面有無棘球蚴包囊；剪開肝管、膽囊，檢查有無肝片吸蟲、雙腔吸蟲。

h.胰臟的檢查：檢查胰管內(nèi)有無闊盤吸蟲。

i.心臟的檢查：切開心臟，檢查有無寄生在心臟內(nèi)的吸蟲、線蟲。

j.泌尿系統(tǒng)的檢查：檢查腎臟及其周圍脂肪組織中有無腎蟲；切開腎臟、膀胱，檢查有無腎蟲。

k.消化系統(tǒng)的檢查：將食道，胃（反芻獸應(yīng)將四個(gè)胃分開）、小腸、大腸、盲腸分別雙重結(jié)扎后分離。

檢查食道上有無大型住肉孢子蟲；之后，剪開食道，檢查食道粘膜下有無美麗筒線蟲。

胃和各腸段均應(yīng)分別置于容器內(nèi)，剖開，加水將內(nèi)容物洗入水中。洗凈的胃、腸粘膜應(yīng)仔細(xì)檢查其上是否附有蟲體，并用小刀刮取胃腸粘膜，將刮下物置解剖鏡下檢查。洗下物應(yīng)多加生理鹽水，反復(fù)地多次洗滌，沉淀，待液體清凈透明后，分批取少量沉渣，放入大培養(yǎng)皿的清水中，先后放于白色和黑色的背景上，尋找蟲體。

3.4 線蟲標(biāo)本的采集方法

用挑蟲針將器官內(nèi)的蟲體挑出，放在0.9%的鹽水中洗干凈，然后將洗凈的蟲體放入70℃的酒精中，蟲體伸直后，將蟲體挑入含5%甘油的80%的酒精中，加標(biāo)簽保存。

3.5 吸蟲和絳蟲標(biāo)本的采集方法

將洗凈的蟲體（吸蟲和絳蟲頭節(jié)及孕卵節(jié)片）放在兩塊玻璃板之間，用細(xì)線綁扎，兩端要用紙層墊住，防止把蟲體壓裂，然后滴入75%酒精，24 h后將蟲體取出，放入小瓶?jī)?nèi)，加標(biāo)簽保存。

3.6 蜘蛛、昆蟲標(biāo)本的采集方法

對(duì)采集的大型外寄生蟲，可將其洗凈后直接放入標(biāo)本瓶?jī)?nèi)。螨蟲必須先刮皮屑，檢出蟲體，放入75%的酒精內(nèi)。

3.7 原蟲的采集方法

血液原蟲要采血做血片。球蟲做糞便涂片檢查。住肉孢子蟲做肌肉壓片檢查。

4 蟲種鑒定方法

4.1 線蟲的鑒定

目前多采用對(duì)線蟲進(jìn)行透明處理后，在顯微鏡下進(jìn)行觀察、測(cè)量、繪圖、描述等。

線蟲透明液有多種。石炭酸酒精透明液配方：石炭酸4份+無水酒精1份。乳酸苯酚透明液配方：甘油2份+乳酸1份+石炭酸1份+水1份。

使用石炭酸酒精透明液時(shí)，可直接將蟲體放入透明液中，短時(shí)內(nèi)即可透明。然后將透明的蟲體放到載玻片上數(shù)條，頭朝下方，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下進(jìn)行觀察鑒定。

使用乳酸苯酚透明液時(shí)，要先將鑒定的蟲體移入1%的福爾馬林中2 h，然后再將蟲體放入透明液中，30 min后，可對(duì)透明的蟲體進(jìn)行鑒定。

4.2 吸蟲和絳蟲的鑒定

大型吸蟲和絳蟲要制成染色標(biāo)本后進(jìn)行鑒定；小型吸蟲(小腸斯氏吸蟲)和絳蟲（禽類小型絳蟲）可在現(xiàn)場(chǎng)直接進(jìn)行初步鑒定。

染色液配方：

a.鹽酸卡紅染液：蒸餾水15 mL+鹽酸2 mL，煮沸，趁熱加入卡紅染粉4 g，再加入85%酒精95 mL，再滴加濃氨水以中和，冷卻后過濾，濾液即為鹽酸卡紅染液。

b.硼砂卡紅染液：4 g硼砂+100 mL蒸餾水+1 g卡紅染粉，加熱使其溶解，再加入70%酒精100 mL，冷卻后過濾，濾液即為硼砂卡紅染液。

c.洋紅染液：洋紅5 g、鹽酸5 mL、蒸餾水5 mL、混合溶解。1 h后加入90%酒精100 mL，水浴鍋加熱至沸騰后追加90%酒精至200 mL。

吸蟲和絳蟲的染色步驟：

a.染色：將保存在酒精中的標(biāo)本直接放入染液中染色。保存于福爾馬林液內(nèi)的蟲體標(biāo)本，應(yīng)先取出水洗1～2 h，而后循序通過30%、50%、70%的酒精各0.5～1 h，之后再投入染液中。在染液中過夜，使蟲體染成深紅色。

b.脫色：將染色后的蟲體移入脫色液鹽酸酒精(2 mL鹽酸+100 mL70%酒精)中，使顏色深淺分明，呈淡紅為止。

c.脫水：依次通過80%、95%、100%酒精中脫水各30 min。

d.透明：將脫水后的蟲體移入二甲苯中透明。

e.封片：將透明后的蟲體放到載玻片上，滴加拿大樹膠，加蓋玻片封固、貼標(biāo)簽。

4.3 蜘蛛、昆蟲的鑒定

對(duì)大型蟲體可直接放到解剖鏡下進(jìn)行觀察鑒定，對(duì)小的蟲體須制作封片鑒定。

蚤類標(biāo)本（小標(biāo)本）的制做：

a.消蝕：將標(biāo)本取出，放入清水洗凈，然后放入10%氫氧化鈉消蝕其軟組織1～3 d。

b.中和堿性：將蚤在清水中洗凈，放入1%冰醋酸中1 h左右。

c.脫水：在50%、70%、80%、95%、100%酒精中各1.5 h。

d.透明軟化：放入丁香油中1 h。

e.封片：用加拿大樹膠或阿拉伯膠封片。

4.4 原蟲的鑒定

原蟲較小，需在顯微鏡下進(jìn)行觀察。血液性原蟲要制作血片，染色后進(jìn)行觀察鑒定。旋毛蟲、住肉孢子蟲可用做肌肉壓片的方法，直接在顯微鏡下觀察；要進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察時(shí)，可按照掃描電鏡和透射電鏡樣本的制作要求，然后將標(biāo)本放到電子顯微鏡下進(jìn)行觀察。球蟲類可做涂片，在顯微鏡下做一般性診斷。

血片的制作方法：采血、抹片、甲醇固定并干燥、放入染液中1至數(shù)小時(shí)、取出水洗、干燥，之后進(jìn)行鏡檢。

5 蟲種鑒定經(jīng)驗(yàn)

前面介紹了寄生蟲標(biāo)本的采集方法、鑒定方法、寄生蟲病的診斷方法，要快速、準(zhǔn)確鑒定一個(gè)蟲種可按下列方法進(jìn)行。

a.按照寄生蟲標(biāo)本的采集方法制作可觀察標(biāo)本。

b.對(duì)標(biāo)本進(jìn)行細(xì)致的觀察，記述蟲體的形態(tài)特點(diǎn)，包括蟲體的數(shù)量、蟲體的大小、形態(tài)、各器官的大小、形態(tài)、所處位置等，并根據(jù)觀察繪制簡(jiǎn)圖。

c.根據(jù)宿主的不同，大致確定寄生蟲的范圍，確定寄生蟲屬于哪一類動(dòng)物的寄生蟲，如：反芻動(dòng)物寄生蟲、馬屬動(dòng)物寄生蟲、鳥禽類寄生蟲、魚類寄生蟲、野生動(dòng)物寄生蟲、兩棲類動(dòng)物寄生蟲。不同類型的宿主，寄生蟲種類有所不同。根據(jù)調(diào)查結(jié)果，可查找有關(guān)宿主和寄生蟲資料。目前，新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所主辦的物種身份證編碼信息網(wǎng)（http://www.wzsfz.com）可提供較為齊全的資料。

d.按照寄生蟲分類學(xué)方法，將標(biāo)本的特點(diǎn)與動(dòng)物界之下的門、綱、目、科、屬的定義，逐級(jí)進(jìn)行比對(duì)，基本可推斷到屬。

e.將屬里的寄生蟲圖譜或有關(guān)記述與標(biāo)本比對(duì)，就可確定該蟲種。

f.對(duì)新種的發(fā)現(xiàn)，應(yīng)將標(biāo)本與該屬所有報(bào)道的蟲種進(jìn)行比對(duì)，確在形態(tài)上有所不同，可定新種。新種要有一定的數(shù)量，具有種群，不能發(fā)現(xiàn)1～2個(gè)蟲體就定為新種。在很多情況下，有的蟲體會(huì)出現(xiàn)畸形，也有標(biāo)本處理不當(dāng)出現(xiàn)標(biāo)本的變形或變態(tài)。

g.根據(jù)鑒定結(jié)果，與查找的資料分析，還可判定鑒定標(biāo)本是否新宿主的發(fā)現(xiàn)，或新地域的發(fā)現(xiàn)。

h.根據(jù)以上鑒定程序、鑒定內(nèi)容、撰寫有說服力的鑒定報(bào)告。

[1]北京農(nóng)業(yè)大學(xué).家畜寄生蟲學(xué)[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1983.

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[7]衛(wèi)廣森：獸醫(yī)全攻略[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2009.

Laboratory Diagnostic Techniques of Parasites

WANG Guang-lei
(Veterinary Research Institute，Xinjiang Academy of animal science，Urumqi 830000，China)

parasitic disease is very common in our country and can cause serious harm to people.This paper introduces various laboratory diagnosis methods,the preparation of diagnostic solution,means of use,species identification method about animal parasitic diseases in detail.we also introduces our parasitic disease diagnosis experiences in long-term work.This paper would contribute to the diagnosis of parasitic diseases, treatment and species identification.

parasitic diseases;laboratory diagnosis

S853.32

A

1003－6377（2013）03－0039-05

2013-02-07

資金項(xiàng)目：國(guó)家絨毛用羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)（CARS-40-11）；國(guó)家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201303037-5）

王光雷（1955-），男，碩士，研究員，長(zhǎng)期從事動(dòng)物寄生蟲病的防治研究。