酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在巨細胞病毒IgG 抗體檢測中的應(yīng)用

耿珍 劉銘

鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院(鄭州，450002)

目前，國內(nèi)最常用的巨細胞病毒(CMV)IgG檢測方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，該方法簡單易操作，但檢測時間往往需要3h，醫(yī)生和患者等待時間過長。酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀是一種加速抗原抗體反應(yīng)，縮短工作時間的醫(yī)學(xué)設(shè)備，為探討其臨床應(yīng)用價值，本文將其用于CMV IgG檢測中，并與傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫方法(簡稱傳統(tǒng)法)比較，觀察其重復(fù)性、線性相關(guān)性、靈敏度、特異度等指標(biāo)，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒

使用加拿大亞特斯公司(ADALTIS)生產(chǎn)的TORCH檢測試劑盒和標(biāo)本專用稀釋液。

1.2 標(biāo)本

亞特斯公司提供CMV IgG抗體標(biāo)準(zhǔn)品(編碼:BS/95.1814):0U/ml、0.6U/ml、1U/ml、2U/ml、4U/ml、8U/ml;門診提供隨機抽樣血清642份。

1.3 儀器

高頻免疫反應(yīng)加速器(四川諾亞醫(yī)療科技公司)、96孔全自動酶標(biāo)儀(PHOMO)、全自動洗板機(iWO-960)、37℃恒溫水箱(光明儀器公司)、微量振蕩器(姜堰市電子儀器廠)、加樣器(榮泰生化工程有限公司)。

1.4 操作方法

［1］和試劑盒使用說明書進行。

1.4.1 線性相關(guān)性分析 隨機抽取血清標(biāo)本40份分別用加速法和傳統(tǒng)法檢測，進行線性相關(guān)性分析。

1.4.2 重復(fù)性試驗 使用同一批號(產(chǎn)品批號:0405)TORCH檢測試劑盒檢測CMV IgG抗體標(biāo)準(zhǔn)品，用加速法和傳統(tǒng)方法對樣品進行檢測，連續(xù)重復(fù)檢測20d。巨細胞病毒IgG值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用χ2檢驗，使用SPSS 12.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 線性相關(guān)分析

統(tǒng)計顯示加速法和傳統(tǒng)法定量結(jié)果呈正相關(guān)關(guān)系，回歸方程為:y=1.101x-0.721(血清CMV IgG濃度范圍為0～7.8U/ml)，回歸方程有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)，見圖1。

圖1 兩種方法測定CMV IgG濃度線性相關(guān)分析

2.2 重復(fù)性試驗

6種濃度的CMV IgG標(biāo)準(zhǔn)品采用加速法和傳統(tǒng)法檢測，定量結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，定性結(jié)果相同。ELISA試劑盒規(guī)定其批間變異系數(shù)在15%以內(nèi)，而在本次試驗中傳統(tǒng)法的變異系數(shù)為10% ～2.7%，加速法變異系數(shù)為10% ～2.1%，均在規(guī)定范圍內(nèi)。見表1。

表1 6種濃度CMV IgG標(biāo)準(zhǔn)品兩種方法檢測結(jié)果

2.3 靈敏度和特異度

將經(jīng)過參考方法(CMV-DNA方法)確定的642例臨床樣本分成觀察組和對照組:觀察組562例陽性樣本(512例陽性、50例弱陽性)，對照組80例陰性樣本(25例妊娠、10例丙肝抗體陽性、10例乙肝表面抗體陽性、5例類風(fēng)濕因子陽性、5例抗核抗體陽性、5例抗心肌抗體陽性、10例溶血、10例冷凍樣本)。采用加速法和常規(guī)法測定CMV IgG抗體(CUT-OFF=0.50U/ml)，結(jié)果見表2。

表2 642例臨床樣本兩種方法檢測結(jié)果

從表2可以看出兩種方法對臨床不同感染階段和不同類型的標(biāo)本均有很高的靈敏度和特異度，沒有發(fā)現(xiàn)交叉反應(yīng)及其他因素影響實驗結(jié)果，符合試劑盒規(guī)定的性能指標(biāo)。

3 討論

CMV可引起生殖泌尿系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肝臟感染，該病毒的感染在兒童和青少年中特別流行，妊娠婦女感染CMV后可通過胎盤感染胎兒，引起胎兒出生缺陷，嚴(yán)重者導(dǎo)致流產(chǎn)或死胎［1］，故應(yīng)積極預(yù)防其發(fā)生。在缺乏典型臨床癥狀的情況下，CMV IgG和CMV IgM檢測對急性/首次CMV感染，以及潛伏CMV型再激活的診斷具有重要意義。

傳統(tǒng)血清學(xué)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測方法簡單、準(zhǔn)確，但耗時長，加速儀的出現(xiàn)很好地彌補了這一缺陷。加速儀運用高頻電磁波以微量震蕩方式，促使抗原和抗體碰撞次數(shù)增多，緊密接觸頻率增高，從而提高抗原和抗體的反應(yīng)效率。而且加速儀的高頻電磁波有促使離子遷移和偶極子轉(zhuǎn)動，從而引起免疫分子轉(zhuǎn)動的作用。故縮短了抗原和抗體反應(yīng)的時間，并可提高檢測的靈敏度［2］。

將加速儀應(yīng)用于CMV IgG檢測，與傳統(tǒng)法比較:線性相關(guān)性分析結(jié)果顯示加速法和傳統(tǒng)法定量結(jié)果呈正相關(guān)關(guān)系;重復(fù)性試驗顯示兩種方法定性、定量結(jié)果無差異。與傳統(tǒng)法相比，加速法具有大幅縮短檢測時間、變異系數(shù)更小、靈敏度更高、特異度更強等優(yōu)點，值得在臨床中使用。

參考文獻

1 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，等.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:630-631.

2 瞿良，李云，滕儀，等.NY/MMJ型酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在高原地區(qū)的臨床使用［J］.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，(3):52-53.