扶正顆粒劑含量測(cè)定方法的研究

于秀娟

（內(nèi)蒙古興安盟婦幼保健所 內(nèi)蒙古 興安 137400）

扶正顆粒劑屬于院內(nèi)制劑，原處方由黃芪、當(dāng)歸、枸杞和陳皮四味中藥組成，臨床上用于提高放化療后腫瘤患者血中的白細(xì)胞數(shù)，以提高機(jī)體免疫力，從而降低放化療毒副作用[1－7]。原劑型為湯劑。為實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，方便腫瘤患者用藥，擬將其改為顆粒劑。以方便患者使用。為保證產(chǎn)品質(zhì)量的可控性，采用HPLC法對(duì)扶正顆粒劑中黃芪甲苷進(jìn)行含量研究，[8]方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，能有效控制扶正顆粒劑的質(zhì)量。該研究為完善和提高藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器

1.1 試劑與試藥：正丁醇（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司 批號(hào)080912）；氨水（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司 批號(hào)090118）；甲醇（天津威晨化學(xué)試劑科貿(mào)有限公司 批號(hào)080509）；無(wú)水乙醇 （天津市化學(xué)試劑三廠 批號(hào)090512）；黃芪甲苷對(duì)照品（成都曼思特生物科技有限公司批號(hào)20070901）。芪歸扶正顆粒劑三批 本實(shí)驗(yàn)室制備。

1.2 儀器：p230高效液相色譜儀EC2000色譜工作站（大連依利特）；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 ELSD800（Alltech）；色譜柱（大連依利特E1720833 Hypersil ODS 5ul 4.6mm＊200mm）；KH3200E型超聲波清洗機(jī)（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；AB135－S電子天平 （METTLER TOLEDO）101－3型電熱鼓風(fēng)箱（上海市上?？h實(shí)驗(yàn)儀器廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE－52A（上海亞榮生化儀器廠）

2 含量測(cè)定方法

精密量定芪歸扶正顆粒劑約3.7g，加入40倍量70%乙醇，充分振搖，放置30min后，超聲提取30min，過(guò)濾，濾渣用70%的乙醇50ml充分沖洗，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖萃取4次，每次80ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次80ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?ml量瓶中，進(jìn)樣10μl，以乙腈－水＝36∶64為流動(dòng)相，流速1.0ml/min，ELSD檢測(cè)器漂移管溫度為70℃，氣體壓力為3MP測(cè)定扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量。

3 方法學(xué)考察[9]

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱：大連依利特E－1720833Hypersil ODS 5ul 4.6mm＊200mm；流動(dòng)相：乙腈－水＝36∶64，流速1.0ml/min；ELSD檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度為70℃，氣體壓力為3 MP。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品5.26mg，用甲醇定容至5ml量瓶中，超聲3min，搖勻，即得，濃度為1.052mg/ml。

3.2.2 供試品溶液的制備：取芪歸扶正顆粒劑約3.7g，精密稱定，加入40倍量70%乙醇，充分振搖，放置30min后，超聲提取30min，過(guò)濾，濾渣用70%的乙醇50ml充分沖洗，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖萃取4次，每次80ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次80ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?ml量瓶中，即得。標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液的HPLC色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液HPLC色譜圖

3.3 線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、1ml置于1ml量瓶中，用甲醇定容。微孔濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，收集續(xù)濾液于EP管中，進(jìn)樣20μl，以峰面積與對(duì)照品濃度進(jìn)行線性回歸，回歸方程：y＝1027.1x－29.349，R2＝0.9996。結(jié)果表明，黃芪甲苷濃度在0.1052mg/ml～1.0520mg/ml的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表1、圖3。

圖2 供試品溶液HPLC色譜圖

表1 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定值

圖3 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.4 精密度試驗(yàn)：樣品液配制同“供試品溶液的制備”，用微孔濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，收集續(xù)濾液。連續(xù)平行進(jìn)樣五次，每次進(jìn)樣10ul，測(cè)定黃芪甲苷的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

表3 重現(xiàn)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

3.5 重復(fù)性試驗(yàn)：樣品液制備同“供試品溶液的制備”，平行提取樣品5份，用微孔濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，分別進(jìn)樣10ul，測(cè)定每份樣品黃芪甲苷的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表3。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：樣品液配制同“供試品溶液的制備”，用微孔濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，收集續(xù)濾液。每隔2小時(shí)進(jìn)樣一次，連續(xù)測(cè)定6次，即分別于0h、2h、4h、6h、8小時(shí)、10h進(jìn)樣測(cè)定，每次進(jìn)樣10μl，測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)黃芪甲苷的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

表5 加樣回收試驗(yàn)數(shù)據(jù)

表6 含量測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)

3.7 加樣回收試驗(yàn)：取芪歸扶正顆粒劑5份，每份約1.8g，精密稱定，每份加入1.044mg/ml的黃芪甲苷對(duì)照品1ml，以下步驟同“供試品液制備”，得到的樣品液用微孔濾膜過(guò)濾，收集續(xù)濾液。每份進(jìn)樣10μl，測(cè)每份樣品中黃芪甲苷的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表5。

3.8 芪歸扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量測(cè)定：稱取平行制備的三批芪歸扶正顆粒劑，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法提取，提取液微孔濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，每份進(jìn)樣10ul，測(cè)黃芪甲苷的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表6。

4 結(jié)果

本課題應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定芪歸扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍（0.1052mg/ml－1.0520mg/ml），精密度（RSD＝1.92%），重復(fù)性（RSD＝1.01%），穩(wěn)定性（RSD＝1.64%），平均加樣回收率（96.60%RSD＝1.85%）進(jìn)行了考察，結(jié)果均符合方法學(xué)要求，可以作為芪歸扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法。

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