巴戟天對(duì)訓(xùn)練小鼠心肌自由基代謝及運(yùn)動(dòng)能力的影響*

龍碧波，張新定，徐海衡，周學(xué)蘭，賴月娟

（1.海南師范大學(xué)體育學(xué)院，2.?？诮?jīng)濟(jì)學(xué)院藝術(shù)學(xué)院，?？?71158）

長(zhǎng)時(shí)間的耐力運(yùn)動(dòng)引起機(jī)體內(nèi)各個(gè)組織器官自由基大量堆積，過多的自由基會(huì)損傷組織細(xì)胞膜，導(dǎo)致機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力下降［1］。因此，尋找高效低毒的天然抗氧化劑已成為國(guó)內(nèi)外運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)界的熱點(diǎn)課題之一。南藥巴戟天（morinda officinalis how，MOH）為茜草科植物巴戟天的根，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕等功效［2］。但把巴戟天用于運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方面的實(shí)驗(yàn)少見報(bào)道。本研究通過建立灌服巴戟天提取液小鼠的力竭游泳訓(xùn)練模型，測(cè)定小鼠心肌組織超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性、丙二醛（malondialdehye，MDA）含量以及血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（glutamic oxalo acetic transaminase，GOT）活性的變化，研究補(bǔ)充巴戟天對(duì)訓(xùn)練小鼠心肌組織自由基代謝及運(yùn)動(dòng)能力的影響，為將巴戟天作為運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng) 選自4周齡健康雄性昆明種小鼠60只，體重20～22 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。自由攝食飲水，鼠糧亦由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。飼養(yǎng)室內(nèi)溫度（22～27）℃，照明取自然光源。將小鼠隨機(jī)分成3大組：安靜組、運(yùn)動(dòng)組、恢復(fù)組，每組內(nèi)均設(shè)藥物組和對(duì)照組（n＝10），適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 巴戟天水提液的制備 巴戟天購(gòu)自海南省中醫(yī)院。將巴戟天粉碎成粉狀，加入相當(dāng)于藥粉量7倍的去離子水浸泡1.5 h，煮沸30 min，過濾，藥渣加入5倍量水繼續(xù)煮沸20 min，過濾，合并 2次濾液，濃縮成含巴戟天生藥 1.0 g／ml的藥液供實(shí)驗(yàn)備用［3］。

1.2 方法

1.2.1 建立動(dòng)物運(yùn)動(dòng)模型 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在1m×0.6m×0.8m的透明玻璃游泳池中分組進(jìn)行無負(fù)重的游泳訓(xùn)練，水溫控制在20℃～21℃，水深35 cm。運(yùn)動(dòng)組、恢復(fù)組小鼠每天上午9∶00進(jìn)行游泳訓(xùn)練，每周游泳訓(xùn)練6 d，周日休息。第1周每天無負(fù)重游泳30min，然后每周增加10 min，藥物組采用灌胃法給藥，用藥劑量為 45 g／（kg.d）［4］，每天下午 4∶00灌服 1次。對(duì)照組灌胃相應(yīng)劑量的生理鹽水作為安慰劑，共持續(xù)6周，至第6周每天游泳80 min。第6周游泳訓(xùn)練結(jié)束后進(jìn)行最后一次力竭性游泳，并記錄各組力竭游泳時(shí)間。力竭判斷的標(biāo)準(zhǔn)為：小鼠沉入水中超過10 s，且放在平面時(shí)無法完成翻正反射［5］。運(yùn)動(dòng)組在力竭運(yùn)動(dòng)后立刻處死?；謴?fù)組在力竭運(yùn)動(dòng)后24 h處死，安靜組也同時(shí)處死。

1.2.2 取材 眼眶取血，肝素抗凝。迅速打開胸腔，快速取出心臟，將心尖和心室部分剪下，放在冰生理鹽水中洗凈，濾紙吸干，稱重，加蒸餾水（按W∶V＝1∶9）制成10%勻漿液。用低溫冷凍離心機(jī)（6 000 r／min）離心15min，取上清液于4℃冰箱中保存以測(cè)定心肌組織超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性和丙二醛（MDA）含量。然后將抗凝全血以3 000 r／min的轉(zhuǎn)速離心15min，測(cè)試谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）活性。所有指標(biāo)的測(cè)定均嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)之間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 巴戟天提取液對(duì)小鼠游泳至力竭時(shí)間的影響

運(yùn)動(dòng)藥物組小鼠游泳至力竭時(shí)間顯著高于運(yùn)動(dòng)對(duì)照組（P＜0.05，表 1），延緩率為 29.59%。表明補(bǔ)充巴戟天提取液可顯著提高小鼠游泳至力竭的時(shí)間，具有明顯的抗疲勞作用。

2.2 巴戟天提取液對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠心肌組織SOD、MDA、GSH-Px及血清GOT活性的影響

所有藥物組小鼠心肌組織SOD、GSH-Px的活性均顯著高于其對(duì)照組（P＜0.05，表 2），而運(yùn)動(dòng)藥物組、恢復(fù)藥物組心肌組織MDA含量顯著低于其對(duì)照組 （P＜0.05，表2），安靜藥物組心肌組織MDA含量低于其對(duì)照組，但無顯著性差異。表明補(bǔ)充巴戟天提取液可顯著提高小鼠心肌組織抗氧化自由基的功效。

運(yùn)動(dòng)藥物組、恢復(fù)藥物組小鼠血清GOT活性顯著低于其對(duì)照組，且有顯著性差異（P＜0.05，表2）。安靜藥物組小鼠GOT活性低于安靜對(duì)照組，但無顯著性差異。提示補(bǔ)充巴戟天提取液在機(jī)體進(jìn)行耐力性運(yùn)動(dòng)時(shí)，可以起到保護(hù)心肌組織的作用。

Tab.1 MOH affecting swimming time ofmice（±s，n＝10）

Tab.1 MOH affecting swimming time ofmice（±s，n＝10）

MOH：Morinda officinalis how*P＜0.05 vs control group

Group Exhausted time（min）Reduce rate Control 216.6±25.16 Drug 280.7±19.53*29.59%

3 討論

3.1 巴戟天對(duì)訓(xùn)練小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響

游泳至力竭的時(shí)間是機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力的綜合表現(xiàn)，它既能反映機(jī)體抗疲勞的能力，也反應(yīng)機(jī)體抗應(yīng)激能力，且小鼠無負(fù)荷力竭游泳是一種有氧耐力運(yùn)動(dòng)。因此，小鼠游泳至力竭時(shí)間的長(zhǎng)短將在一定程度上反映機(jī)體有氧運(yùn)動(dòng)能力及抗應(yīng)激能力。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在進(jìn)行耐力訓(xùn)練的同時(shí)補(bǔ)充巴戟天可明顯延長(zhǎng)小鼠游泳至力竭的時(shí)間。提示巴戟天具有明顯的抗應(yīng)激能力和抗疲勞作用。

Tab.2 EffectofMOH onmousemyocardial SOD，MDA，GSH-Px and serum GOT（±s，n＝10）

Tab.2 EffectofMOH onmousemyocardial SOD，MDA，GSH-Px and serum GOT（±s，n＝10）

MOH：Morinda officinalis how；SOD：Superoxide dismutase；MDA：Malondialdehyde；GSH-Px：Glutathione peroxidase；GOT：Glutami coxalo acetic transaminase*P＜0.05 vs control group

Group SOD（U／mg） MDA（nmol／mg） GSH-Px（U／mg） GOT（U／L ）Quiet Control 50.30±1.87 8.47±1.29 39.51±2.69 36.65±1.24 group Drug 52.23±1.15* 7.13±0.97 45.13±2.57* 34.23±1.15 Training Control 61.13±0.79 11.47±1.29 48.09±2.01 55.30±1.28 group Drug 72.19±1.59* 9.13±0.97* 54.49±2.87* 40.00±0.92*Recovery Ccontrol 35.33±2.12 9.98±1.69 46.29±2.12 48.77±1.61 group Drug 41.64±1.76* 7.75±2.87* 51.95±2.26* 35.80±1.01*

3.2 巴戟天對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠心肌MDA含量、SOD、GSH-Px活性的影響

SOD、GSH-Px是機(jī)體抗氧化系統(tǒng)中非常重要的抗氧化酶，其活性的大小反映機(jī)體組織抗氧化能力的高低。MDA是過氧化脂質(zhì)的代謝產(chǎn)物，其含量變化可反映自由基對(duì)組織的損傷程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，安靜藥物組小鼠心肌組織SOD、GSH-Px活性顯著高于對(duì)照組，MDA含量低于對(duì)照組，說明巴戟天對(duì)心肌有良好的保護(hù)作用，能夠提高心肌內(nèi)抗氧化酶的活性。在運(yùn)動(dòng)組和恢復(fù)組中，藥物組小鼠心肌組織SOD、GSH-Px的活性均顯著高于其對(duì)照組，MDA含量均顯著低于其對(duì)照組。說明巴戟天能有效促進(jìn)小鼠心肌組織SOD、GSH-Px活性的升高，降低小鼠心肌組織MDA的含量，可及時(shí)清除運(yùn)動(dòng)過程中產(chǎn)生的過量自由基，能有效地阻止或抵制機(jī)體脂質(zhì)過氧化，對(duì)心肌組織的損傷具有明顯的保護(hù)作用，并能促進(jìn)機(jī)體的恢復(fù)。

3.3 巴戟天對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠血清GOT活性的影響

正常情況下，血清GOT活性相對(duì)穩(wěn)定。當(dāng)心肌組織發(fā)生病變和受到嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，心肌細(xì)胞膜通透性改變，引起血清中GOT活性顯著升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：運(yùn)動(dòng)組小鼠血清中GOT活性顯著高于安靜組，推測(cè)這主要是由于力竭運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)受損造成。而在運(yùn)動(dòng)組和恢復(fù)組中，藥物組小鼠血清中GOT活性均顯著低于其對(duì)照組，說明巴戟天在力竭運(yùn)動(dòng)中以及在24 h恢復(fù)期內(nèi)，均能有效減輕機(jī)體 GOT從組織中外泄，對(duì)運(yùn)動(dòng)造成的心肌損傷具有明顯的保護(hù)作用。其機(jī)制可能是巴戟天的活性成分能提高機(jī)體內(nèi)源性抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性，從而提高機(jī)體防御體系的保護(hù)功能，降低心肌細(xì)胞膜受損程度，較好地維持心肌細(xì)胞等膜性結(jié)構(gòu)的完整性。

【參考文獻(xiàn)】

［1］ Lovlin R，CottleW，Pgke I，etal.Are indices of free redical damage related to exercises intensity［J］.EurJAppl PhysiolOccupPhysiol，1987，56（3）：313-316.

［2］ 陳志霞，林 勵(lì).巴戟天的研究進(jìn)展［J］.中藥材，2001，24（3）：209-210.

［3］ 陳 忠，涂 濤，方代南.南藥巴戟天水提液對(duì)小鼠造血功能的研究［J］.熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002，22（5）：21-22，52.

［4］ 馮昭明，肖柳英，張 丹.巴戟水提液對(duì)小鼠肝癌模型的作用［J］.廣州醫(yī)藥，1999，30（5）：65-67.

［5］ 龍碧波.絞股藍(lán)提取物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響［J］.中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，2010，26（3）：339-340.