H PLC法測(cè)定明珠口服液中大黃酚的含量

陳月霞 王俊 蔡亞蘭 曹冬梅 洪麗萍 朱佳麗

（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 泰州225500）

H PLC法測(cè)定明珠口服液中大黃酚的含量

陳月霞 王俊 蔡亞蘭 曹冬梅 洪麗萍 朱佳麗

（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 泰州225500）

目的：建立明珠口服液中大黃酚的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC），色譜柱為Agilent XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（70∶30），流速1.0 mL/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)288 nm。結(jié)果：大黃酚在0.106 3～0.637 8 μg呈良好的線性關(guān)系（r＝1.000 0）；平均加樣回收率為98.87%（RSD為1.3%，n＝6）。結(jié)論：本法重復(fù)性好，靈敏度高、定量準(zhǔn)確，可作為明珠口服液質(zhì)量控制方法之一。

明珠口服液；大黃酚；含量測(cè)定；高效液相色譜法

明珠口服液是一種純中藥制劑，由決明子、制何首烏、珍珠母、菊花、夏枯草、當(dāng)歸、白芍、枸杞子、赤芍、紅花、益母草、車(chē)前子等十幾味中藥組成。用于肝腎陰虛引起的視力下降，視瞻有色，視物變形等癥狀的治療。方中有“還瞳子”之稱(chēng)的決明子主要有效成分為蒽醌類(lèi)化合物（大黃素、大黃酚等）[1]，大黃素與大黃酚都具有清肝明目、防止視力模糊的功效。為提高明珠口服液的質(zhì)量，保證其臨床用藥的穩(wěn)定性，以明珠口服液中的大黃酚作為指標(biāo)成分進(jìn)行高效液相色譜法（HPLC）定量測(cè)定法研究，結(jié)果表明，本試驗(yàn)專(zhuān)屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為明珠口服液的質(zhì)量控制提供理論依據(jù)和可行的檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀：包括四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、可變波長(zhǎng)檢測(cè)器（VWD）、ChemStations色譜工作站，美國(guó)安捷倫科技有限公司；Agilent XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，

5μm）；YLE-2000型電熱恒溫水浴鍋；XS205型電子分析天平（0.000 01 g，德國(guó)梅特勒-托利多）。

大黃酚對(duì)照品（原中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量為99.6%，批號(hào)：110796-201017），乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

本實(shí)驗(yàn)所用的明珠口服液與明珠口服液陰性樣品均為我公司生產(chǎn)，所用明珠口服液的批號(hào)為10112212，10112311，11022411；所用明珠口服液陰性樣品的批號(hào)為YXDZ-12112011。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm），柱溫 30℃，流動(dòng)相乙腈-0.1%磷酸溶液（70∶30），流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)288 nm。按此色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示大黃酚能與其他組分色譜峰基線分離，理論板數(shù)不低于2 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取大黃酚對(duì)照品10 mg，置100 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（75∶25）溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。所得對(duì)照品圖譜見(jiàn)圖1-A。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品15 mL，加三氯甲烷50 mL，再加20%硫酸溶液10 mL，加熱回流1 h，分取三氯甲烷層，酸水層再加三氯甲烷 30 mL，加熱回流1 h，分取三氯甲烷層，酸水層用少量三氯甲烷洗滌3次，合并三氯甲烷提取液，用水洗滌3次，回收三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，濾過(guò)。所得供試品圖譜見(jiàn)圖1-B。

2.4 陰性樣品溶液的制備

精密量取裝量差異項(xiàng)下的明珠口服液陰性樣品15 mL，按2.3項(xiàng)下的方法制備陰性樣品溶液。所得陰性樣品溶液圖譜見(jiàn)圖1-C。

圖1 大黃酚的HPLC圖A對(duì)照品；B供試品；C陰性樣品

2.5 線性關(guān)系

精密量取 2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液（0.1g/L）1.00，5.00，3.00，10.00，5.00，6.00 mL分別至 10，25，10，25，10，10 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，按2.1項(xiàng)下條件測(cè)定峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量（X）對(duì)色譜峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸求得線性方程為

Y＝24.69 X＋1.709

r=1.000 0（n＝6）

結(jié)果顯示大黃酚在0.106 3～ 0.637 8 μg呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液 10 μL，按 2.1項(xiàng)下條件，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.26%（n＝6）。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液分別在 0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13 h精密吸取10.0 μL注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.41%（n＝14）。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液，精密吸取 10 μL測(cè)定峰面積，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.35%（n＝6）。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知大黃酚含量為 0.022 1 mg/mL的樣品6份，分別精密加入106.3 μg/mL的大黃酚對(duì)照品溶液3 mL，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.1項(xiàng)下方法分別測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大黃酚回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批次的樣品各兩份，按 2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，依法平行測(cè)定兩次。計(jì)算大黃酚的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3批樣品測(cè)定結(jié)果（n＝2）

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取大黃酚對(duì)照品用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分別在278，288 nm處有最大吸收，均遠(yuǎn)離溶劑的吸收峰，但在288 nm處的吸光度比278 nm處的吸光度更強(qiáng)，且在該波長(zhǎng)下樣品溶液中大黃酚可與其他組分得到基線分離，故選擇288 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇

本實(shí)驗(yàn)考察了流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（80∶20，70∶30，60∶40），結(jié)果綜合經(jīng)濟(jì)實(shí)用的角度選擇乙腈-0.1%磷酸溶液（70∶30）為流動(dòng)相，此時(shí)大黃酚與相鄰雜質(zhì)峰分離度較好，且出峰時(shí)間合適。

3.3 提取溶劑的選擇

參考《中國(guó)藥典》（2010年版）一部中“決明子”藥材含量測(cè)定及相關(guān)文獻(xiàn)[2-7]，比較了乙酸乙酯-無(wú)水乙醇（80∶20，75∶25，70∶30，65∶35，60∶40，55∶45），作為提取溶劑，從測(cè)定結(jié)果的比較可以看出，采用乙酸乙酯-無(wú)水乙醇（75∶25）提取時(shí)，大黃酚的提取率最高，故選定乙酸乙酯-無(wú)水乙醇（75∶25）作為提取溶劑。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 （2010年版）一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：135-136.

[2] 周曉明，李波，王曉琴.HPLC測(cè)定蒙藥辛木興-6中大黃酚的含量[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2012，18（5）：47-49.

[3] 李亞榮，王舒.HPLC法測(cè)定連翹敗毒丸中大黃素和大黃酚的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥雜志，2007，5（11）：25-28.

[4] 劉春峰，楊秀峰，濮洪洲.高效液相色譜法測(cè)定太極升降口服液中大黃酚和大黃素的含量[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2011，20（6）：26-27.

[5] 周嘉裕，湯佳，廖海，等.大黃、制何首烏中大黃素和大黃酚的提取與含量測(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（5）：1056-1057.

[6] 虞曉升，駱惠青，王春甫，等.HPLC法測(cè)定利膽消石片中大黃素、大黃酚的含量[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2011，25（4）：61-63.

[7] 劉善新，馬毅，鐘方曉，等.HPLC法測(cè)定復(fù)方大黃利膽片中大黃素、大黃酚的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13（12）：13-14.

Content Determination of Chrysophanol in Bright Pearl Oral Liquid by HPLC

Chen Yuexia，Wang Jun，Cai Yalan，Cao Dongmei，Hong Liping，Zhu Jiali（Yangtze River Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Jiangsu Taizhou 225500，China）

Objective：To establish a method for determining chrysophanol in bright pearl oral liquid.Methods：Agilent XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）column was used with acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution（70∶30）as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and column temperature was maintained at 30℃.The detection wavelength was set at 288 nm.Results：The calibration curve was linear within the range of 0.106 3～0.637 8 μg for chrysophanol.The average recovery was 98.87% （RSD was 1.3%，n=6）.Conclusion：The method is reproducible，sensitive and accurate for the determination of chrysophanol in bright pearl oral liquid.

Bright Pearl Oral Liquid；Chrysophanol；Content Determination；HPLC

10.3969/j.issn.1672-5433.2013.12.005

2013-05-06）

陳月霞，女，碩士。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：624963144@qq.com