加味定喘片乙醇提取工藝的研究

李文烈 孟作環(huán) 曹海芳 柏艷柳 李錦 鄭曉杰

（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035）

加味定喘片乙醇提取工藝的研究

李文烈 孟作環(huán) 曹海芳 柏艷柳 李錦 鄭曉杰

（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035）

目的：優(yōu)化加味定喘片乙醇提取工藝。方法：采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，以鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選加味定喘片乙醇提取工藝。結(jié)果：加味定喘片乙醇提取工藝優(yōu)選為加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝科學(xué)合理，可為工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

加味定喘片；鹽酸麻黃堿；黃芩苷；出膏率；正交設(shè)計(jì)；乙醇提取工藝

加味定喘片是由麻黃、白果、黃芩等藥物組成的中藥復(fù)方制劑，具有宣肺降氣、清熱化痰之功效，臨床治療哮喘療效確切。為充分提取有效成分，保證藥效，同時(shí)省工節(jié)能，降低生產(chǎn)成本，本研究以鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以提取次數(shù)、提取時(shí)間、加乙醇量為考察因素，采用L9（3）4正交試驗(yàn)法對(duì)乙醇提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 儀器

回流提取裝置，高效液相色譜儀（Agilent 1100），色譜柱：Waters Sunfire C18（4.6 mm×150 mm）。

1.2 試劑與藥品

鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào) 171241-200506，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院），黃芩苷（批號(hào)110715-200815，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院），乙醇為醫(yī)用級(jí)，甲醇為色譜純，水為重蒸水。飲片均購(gòu)自安國(guó)以嶺中藥飲片有限公司，經(jīng)鑒定均符合《中國(guó)藥典》（2010年版）一部各自項(xiàng)下規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取提取次數(shù)（A）、提取時(shí)間（B）、加醇量（C）

為考察因素，（D）設(shè)為空白，以鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率為指標(biāo)，按L9（3）4正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表1。

表1 乙醇提取工藝正交試驗(yàn)因素水平

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 樣品提取 按比例稱(chēng)取復(fù)方飲片共9份，按照 L9（3）4正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表，加 60%乙醇回流提取，提取液合并，濾過(guò)，減壓回收乙醇，適量濃縮，轉(zhuǎn)移至1 000 mL量瓶中，放冷至室溫，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

2.2.2 鹽酸麻黃堿含量測(cè)定

2.2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液（9∶91）為流動(dòng)相，流速1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)207 nm[1]。

2.2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿對(duì)照品10 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。精密量取3 mL置25 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2.3 供試品溶液制備 精密量取 2 mL提取液，置分液漏斗中，加入1 mol/L的氫氧化鈉溶液10 mL，用乙醚提取5次（分別為 15，15，15，10，10 mL）合并乙醚層，加鹽酸-甲醇（1∶100）1 mL，置水浴上揮干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解，定容于10 mL量瓶中，搖勻，濾過(guò)。

2.2.2.4 測(cè)定方法 精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定供試品與對(duì)照品峰面積，計(jì)算。

2.2.3 黃芩苷含量測(cè)定

2.2.3.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－0.1%磷酸溶液（45∶55）為流動(dòng)相，流速1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm[2]。

2.2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取黃芩苷對(duì)照品約10 mg，置 250 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。

2.2.3.3 供試品溶液的制備 精密量取提取液2 mL，置 50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。

2.2.3.4 測(cè)定法 吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各 5 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定供試品與對(duì)照品峰面積，計(jì)算。

2.2.4 出膏率測(cè)定 精密吸取提取液各 100 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥5 h，置干燥器中冷卻 30 min，迅速精密稱(chēng)定重量，計(jì)算。

2.3 結(jié)果

見(jiàn)表2。

2.4 結(jié)果分析

直觀分析表明，各因素對(duì)鹽酸麻黃堿含量的影響大小依次為：提取次數(shù)＞提取時(shí)間＞加醇量，最佳工藝為A2B3C3；對(duì)黃芩苷含量的影響大小依次為：提取次數(shù)＞加醇量＞提取時(shí)間，最佳工藝為A3B3C3；對(duì)出膏率的影響大小依次為：提取次數(shù)＞提取時(shí)間＞加醇量。

方差分析（結(jié)果見(jiàn)表 3，4，5）表明，對(duì)3個(gè)指標(biāo)提取次數(shù)的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中鹽酸麻黃堿（P＜0.01）、黃芩苷（P＜0.05）、出膏率（P＜0.01），其他因素的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

從提取次數(shù)分析，提取3次與提取2次相比，鹽酸麻黃堿和黃芩苷含量差異均較小，但提取3次比提取2次出膏率明顯增加，結(jié)合節(jié)約能源、降低成本和降低服用量因素考慮，確定提取次數(shù)為2次。從提取時(shí)間分析，鹽酸麻黃堿和黃芩苷含量?jī)蓚€(gè)指標(biāo)隨提取時(shí)間延長(zhǎng)均呈上升趨勢(shì)，確定提取時(shí)間為2 h。從加醇量分析，加醇量對(duì)3個(gè)指標(biāo)影響均較小，考慮到乙醇成本較高，確定加醇量為第1次10倍量，第2次8倍量。綜上所述，確定乙醇提取工藝為：加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。

2.5 乙醇提取工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

稱(chēng)取選凈的藥材，分別按最佳工藝A3B3C3的組合條件和選定工藝的A2B3C（3，2）組合條件進(jìn)行重

復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，測(cè)定鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率，結(jié)果見(jiàn)表6。

表2 乙醇提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 乙醇提取工藝方差分析——鹽酸麻黃堿

表4 乙醇提取工藝方差分析——黃芩苷

表5 乙醇提取工藝方差分析——出膏率

結(jié)果表明，最佳工藝和選定工藝的3個(gè)指標(biāo)含量差距較小，而且選定工藝乙醇用量減少，節(jié)約能源，有利于降低生產(chǎn)成本，故采用選定工藝。

3 討論

3.1 根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)，鹽酸麻黃堿和黃芩苷在60%乙醇中溶解度較大，因此本研究正交試驗(yàn)采用60%乙醇回流提取。

3.2 麻黃為本方君藥，具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘、利水消腫的作用[3]，麻黃堿類(lèi)生物堿是麻黃主要

的有效成分；黃芩苷為黃芩中主要有效成分，具有抗菌、消炎等作用[4]，與加味定喘片的功能主治一致，故以鹽酸麻黃堿、黃芩苷為含量考察指標(biāo)。

3.3 本研究采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)優(yōu)選了影響提取物含量的3個(gè)因素，得出最佳提取工藝，再結(jié)合實(shí)際大生產(chǎn)情況，對(duì)各影響因素進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定了乙醇提取工藝為：加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。

表6 乙醇提取工藝驗(yàn)證結(jié)果

[1] 趙文明，承偉.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定小兒肺熱咳喘泡騰顆粒中鹽酸麻黃堿和苦杏仁苷的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，27（6）：474-476.

[2] 王曉宏.孕婦金花片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2012，26（4）：72-75.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2010年版）一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出社，2010：300-301.

[4] 黃志軍.黃芩苷藥理作用研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué)，2012，24（3）：61-64.

Study on the Ethanol Extraction Process for Jiaweidingchuan Tablets

Li Wenlie，Meng Zuohuan，Cao Haifang，Bai Yanliu，Li Jin，Zheng Xiaojie（Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co.Ltd.，Hebei Shijiazhuang 050035，China）

Objective:To optimize the ethanol extraction process for jiaweidingchuan tablets.Methods:Based on the orthogonal experiment design and using the contents of ephedrine hydrochloride and baicalin and the rate of extractum as indexes to optimize the ethanol extraction process for jiaweidingchuan tablets.Results:The optimum condition for the ethanol extraction of jiaweidingchuan tablets was the reflux extraction twice with addition of 60%ethanol，2 hours each time （10 and 8 times in volume respectively）.Conclusion:The optimized extraction process is scientific and reasonable，which can provide a basis for commercial productions.

Jiaweidingchuan Tablets；Ephedrine Hydrochloride；Baicalin；Orthogonal Design；Rate of Extractum；Ethanol Extraction Process

10.3969/j.issn.1672-5433.2013.11.005

2012-11-13）

李文烈，男，碩士，主管中藥師。研究方向：中藥新藥研發(fā)。通訊作者E-mail：liwenlie21@163.com