當(dāng)歸補(bǔ)血湯促血管新生的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

景海波 潘立群

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029）

當(dāng)歸補(bǔ)血湯出自金元時(shí)期李東垣的《內(nèi)外傷辨惑論》，其問世以來一直作為補(bǔ)氣生血的經(jīng)典名方，在臨床上廣泛應(yīng)用于各個(gè)系統(tǒng)疾病中。隨著中醫(yī)現(xiàn)代化進(jìn)程的不斷深入，該方在促血管新生的研究方面，國內(nèi)學(xué)者已進(jìn)行了較多的實(shí)驗(yàn)研究，并對其作用機(jī)制進(jìn)行了探討?，F(xiàn)將當(dāng)歸補(bǔ)血湯促血管新生的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展概述如下。

1 立方基礎(chǔ)及配伍意義

當(dāng)歸補(bǔ)血湯由黃芪、當(dāng)歸按5∶1組成，“重用黃芪大補(bǔ)脾肺之氣，以資氣血生化之源”，符合“有形之血生于無形之氣”的理論，又配伍當(dāng)歸養(yǎng)血和營，使陽生陰長，氣旺血生，為補(bǔ)氣生血的名方。通過現(xiàn)代技術(shù)，從化學(xué)和藥理指標(biāo)方面研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸補(bǔ)血湯不管從配伍比例還是有效組分的溶出度、生物活性等方面均體現(xiàn)出組方之嚴(yán)謹(jǐn)，配伍之精當(dāng)。

王文萍等[1]從藥動(dòng)學(xué)角度研究發(fā)現(xiàn)，黃芪合用當(dāng)歸后增強(qiáng)了黃芪中黃芪甲苷在體內(nèi)的活力，提前了黃芪甲苷發(fā)揮功效的進(jìn)程，體現(xiàn)了當(dāng)歸臣藥的輔佐之功。金芳等[2]采用反相高效液相色譜法測定不同配伍比例的當(dāng)歸補(bǔ)血湯中阿魏酸煎出率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪與當(dāng)歸按5∶1配比時(shí)，阿魏酸煎出率最高，還發(fā)現(xiàn)黃芪與當(dāng)歸按5∶1配比時(shí)對提高小鼠胸腺指數(shù)作用最強(qiáng)。張子忠等[3-4]采用擬合定量技術(shù)與聯(lián)用反相高效液相色譜（RP-HPLC）與二極管陣列檢測器（DAD）技術(shù)，分別對黃芪、當(dāng)歸以及當(dāng)歸補(bǔ)血湯研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)黃芪用量變化時(shí)，全方中黃芪、當(dāng)歸的物質(zhì)組分濃度也有一些變化，這種變化為物質(zhì)組分間發(fā)生關(guān)聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生新的物質(zhì)提供了重要條件。由此可見，當(dāng)黃芪、當(dāng)歸用量變化時(shí)，復(fù)方中的物質(zhì)組分質(zhì)變現(xiàn)象不同，究其是何成分，有待今后進(jìn)一步研究。

趙奎君等[5]對當(dāng)歸補(bǔ)血湯原方進(jìn)行煎煮，通過一系列的化學(xué)檢測、生物活性研究結(jié)果顯示，無論是黃芪中的黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素，還是來源于當(dāng)歸的阿魏酸、藁本內(nèi)酯；或者總黃酮、總皂苷、總多糖等有效組分，共煎的當(dāng)歸補(bǔ)血湯的含量均高于單煎的黃芪、當(dāng)歸及“黃芪+當(dāng)歸”分煎后重組的混合物。說明中藥復(fù)方“分煎”和“共煎”并不是“1+1=2”的簡單數(shù)學(xué)關(guān)系。并且在免疫調(diào)節(jié)、促紅細(xì)胞生成素生成、增強(qiáng)類雌激素活性以及對骨骼細(xì)胞生物活性的影響方面，共煎的當(dāng)歸補(bǔ)血湯與黃芪、當(dāng)歸、“黃芪+當(dāng)歸”分煎后重組的混合物相比均有更強(qiáng)的生物活性。甚至研究發(fā)現(xiàn)免疫相關(guān)因子IL-2、IL-6、IL-10僅在共煎的當(dāng)歸補(bǔ)血湯條件下才顯現(xiàn)出特殊的活性。由此，趙氏等大膽推斷，黃芪當(dāng)歸的多種活性成分在共煎過程中形成“雞尾酒”式的協(xié)同作用，使共煎的當(dāng)歸補(bǔ)血湯顯現(xiàn)出獨(dú)特的活性和療效，而簡單的 “黃芪+當(dāng)歸”分煎的效果是無可比擬的。

綜上所述，當(dāng)歸補(bǔ)血湯組方簡單，配伍配比精當(dāng)，同時(shí)現(xiàn)代研究亦表明，復(fù)方中黃芪、當(dāng)歸的多種活性成分在共煎時(shí)有協(xié)同作用，其促進(jìn)血管新生的黃芪甲苷、黃芪多糖、阿魏酸的含量比單煎含量要多，不僅揭示了古方的科學(xué)內(nèi)涵，同時(shí)為研究復(fù)方促進(jìn)血管新生提供了理論依據(jù)。

2 體外實(shí)驗(yàn)研究

雷燕等[6]建立離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）模型，探討黃芪、當(dāng)歸及其組方對HUVEC增殖和細(xì)胞周期的影響。結(jié)果表明，黃芪、當(dāng)歸能促進(jìn)細(xì)胞增殖及DNA合成，兩藥配伍應(yīng)用，即組成當(dāng)歸補(bǔ)血湯時(shí)具有協(xié)同效應(yīng)，提示了在缺血心肌新生血管的發(fā)生和發(fā)展中可能具有一定的作用。根據(jù)當(dāng)歸補(bǔ)血湯重用黃芪的方意，雷燕等[7]又通過制備雞胚絨毛尿囊膜（CAM）模型，觀察應(yīng)用黃芪與當(dāng)歸5∶1配比的含藥血清后CAM血管生成的情況。結(jié)果顯示：黃芪與當(dāng)歸5∶1配比合用后，在血管生成表現(xiàn)以及血管計(jì)數(shù)方面，均明顯優(yōu)于生理鹽水對照組及其他配比組。黃芪與當(dāng)歸按5∶1配伍具有較好的促進(jìn)CAM新生血管生成的作用。另外，劉清君等[8]直接將當(dāng)歸補(bǔ)血湯超濾膜提取物過載體加到CAM上，發(fā)現(xiàn)能明顯促進(jìn)血管新生，且作用與劑量呈正相關(guān)，以0.3g/L作用最顯著，但與表皮生長因子（EGF）比較，促CAM血管新生作用相對較弱（P<0.05）。由此當(dāng)歸補(bǔ)血湯促血管新生的作用在體外實(shí)驗(yàn)中得到很好的證明。

3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究

苗明三等[9]發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸補(bǔ)血湯可拮抗通過放血和環(huán)磷酰胺所致氣血雙虛模型大鼠胸腺和脾臟的病理損傷，可增加胸腺皮質(zhì)厚度、皮質(zhì)細(xì)胞數(shù)及脾小葉淋巴細(xì)胞數(shù)。胸腺、脾臟均是人體重要的免疫器官，含有大量的B、T細(xì)胞，是進(jìn)行特異免疫應(yīng)答的場所，提示當(dāng)歸補(bǔ)血湯對氣血虧虛型機(jī)體的免疫增強(qiáng)作用。吳建新等[10]對黃芪、當(dāng)歸及其配伍對大鼠紅細(xì)胞電泳、血紅蛋白的影響的實(shí)驗(yàn)研究表明，黃芪、當(dāng)歸能升高血虛型紅細(xì)胞壓積，增加紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，從而體現(xiàn)了當(dāng)歸補(bǔ)血湯對血液的影響。楊長春等[11]建立鼠動(dòng)脈骨皮脫落模型，應(yīng)用形態(tài)學(xué)觀察和在基因水平的研究，發(fā)現(xiàn)黃芪和當(dāng)歸單獨(dú)及聯(lián)合使用均可不同程度地抑制內(nèi)皮損傷所致的內(nèi)膜增生，改善血液循環(huán)，其機(jī)制與保護(hù)血管內(nèi)皮、促進(jìn)NO合成及抑制FAK基因表達(dá)和活化有關(guān)。秦臻等[12]在探討當(dāng)歸補(bǔ)血湯對兔動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸補(bǔ)血湯抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用與促進(jìn)骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和活性密切相關(guān)。以上研究表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯可通過調(diào)節(jié)免疫功能，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞、血細(xì)胞、血紅蛋白等方面改善組織缺血狀態(tài)，體現(xiàn)了傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)“補(bǔ)氣生血”的基本理論。因此，當(dāng)歸補(bǔ)血湯在促血管新生方面有著廣泛的應(yīng)用前景。

4 作用機(jī)制研究

血管新生是一個(gè)復(fù)雜的多步驟生物學(xué)過程，涉及多種細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、血管壁細(xì)胞、炎性細(xì)胞等），是細(xì)胞與細(xì)胞因子、細(xì)胞外基質(zhì)及蛋白水解酶等之間相互作用的結(jié)果。機(jī)體受眾多的正性與負(fù)性調(diào)節(jié)因子的控制，即存在著多種促進(jìn)血管新生的因素，同時(shí)也存在多種抑制血管新生的因素，兩者的平衡使血管生成維持在生理范圍，這一系列過程包括細(xì)胞外物質(zhì)降解，內(nèi)皮細(xì)胞遷移及增殖，毛細(xì)血管形成與吻合等。當(dāng)歸補(bǔ)血湯具有促進(jìn)造血和血管生成的作用已得到證實(shí)，但其作用機(jī)制仍不明確。雷燕等[13-14]研究表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯具有增加缺血心肌微血管密度和促進(jìn)血管生成因子表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用，使血管密度增加，其機(jī)制尚不清楚。

王培利等[15]將當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清作用于常規(guī)培養(yǎng)和低氧培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC），觀察其表面VEGF受體的變化以及VEGF mRNA的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)益氣活血之當(dāng)歸補(bǔ)血湯可以上調(diào)VEGF受體以及VEGF mRNA的表達(dá)。VEGF是一類多功能生長因子，VEGF和受體結(jié)合后最明顯的生物學(xué)效應(yīng)是促使內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷徙，增殖和遷徙的內(nèi)皮細(xì)胞又分泌其他生長因子，一方面作用于非內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)它們的有絲分裂，以此和內(nèi)皮細(xì)胞形成新生血管，另一方面還可以使非內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF，再通過旁分泌機(jī)制作用于內(nèi)皮細(xì)胞。從而為當(dāng)歸補(bǔ)血湯促血管新生的體外作用機(jī)制提供了理論證據(jù)。同時(shí)表明當(dāng)歸補(bǔ)血湯促血管新生的效應(yīng)是一種調(diào)節(jié)作用機(jī)制，這也符合中醫(yī)整體調(diào)節(jié)的特征。

張瑩雯等[16]研究結(jié)果顯示，當(dāng)歸補(bǔ)血湯可以有效地降低糖尿病腎病大鼠腎小球和腎小管TGF-β1mRNA表達(dá)，進(jìn)而減輕ECM積聚和腎臟肥大。TGF-β是血管新生重要的調(diào)節(jié)因子，該實(shí)驗(yàn)表明當(dāng)歸補(bǔ)血湯對糖尿病大鼠腎臟病變的保護(hù)作用可能是通過調(diào)節(jié)腎小球和腎小管血管的改變而實(shí)現(xiàn)的。

秦臻等[17]也通過觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯對兔動(dòng)脈粥樣硬化模型外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）功能及血清血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子 1（SDF-1）表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸補(bǔ)血湯能明顯升高家兔血清VEGF和SDF-1水平，且EPCs的增殖、黏附、遷移和形成小管能力均有增強(qiáng)。EPCs在血管生成中扮演主要的角色，它參與血管內(nèi)皮損傷后的再生與修復(fù)，VEGF本身具有促血管新生的作用，而SDF-1也是影響EPCs向內(nèi)皮細(xì)胞分化的主要因子，研究證實(shí)了當(dāng)歸補(bǔ)血湯對EPCs的調(diào)節(jié)作用，其機(jī)制可能通過維持循環(huán)VEGF和SDF-1水平來參與EPCs活性的調(diào)控。

另外，李亞芹等[18]通過觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯對高尿酸血癥大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸補(bǔ)血湯能降低尿酸從而改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，其機(jī)制可能與提高超氧化物歧化酶（SOD）活力，降低過氧化脂質(zhì)丙二醛（MDA）有關(guān)。

綜合目前文獻(xiàn)研究所示，其作用機(jī)制仍不明確，初步分析可能為：一方面，當(dāng)歸補(bǔ)血湯中黃芪多糖、黃芪皂苷、阿魏酸等有效成分具有益氣養(yǎng)元、促進(jìn)血管生長的作用[19-21]，其機(jī)制與促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子等生長因子的表達(dá)，提高組織血細(xì)胞、血紅蛋白和羥脯氨酸含量等相關(guān)；另一方面，當(dāng)歸補(bǔ)血湯作為復(fù)方的整體能調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞、基因活性及生長因子，保護(hù)血管內(nèi)皮、促進(jìn)NO合成、刺激內(nèi)皮祖細(xì)胞等作用應(yīng)是其主要原因。當(dāng)歸補(bǔ)血湯中沒有某一部分、部位或單體能代表全方功效及其物質(zhì)基礎(chǔ)[22]，當(dāng)歸補(bǔ)血湯促進(jìn)血管新生的作用應(yīng)歸結(jié)于湯劑整體，這與中醫(yī)的整體觀及現(xiàn)代復(fù)雜性系統(tǒng)理論不謀而合。

5 結(jié)語

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，氣血是構(gòu)成機(jī)體和維持生命活動(dòng)的核心，氣血與機(jī)體健康、疾病和生命的關(guān)系極為密切。當(dāng)歸補(bǔ)血湯是一首組方簡單、療效確切的補(bǔ)氣生血方，這里的血，不是單純靶點(diǎn)和物質(zhì)意義上的血（Blood），而是體現(xiàn)出基于審證求因的病機(jī)概念，其補(bǔ)氣生血的基礎(chǔ)表征是通過促進(jìn)新生血管的生長，以增加物質(zhì)能量的產(chǎn)生、交換與耗散所表現(xiàn)出來的那種氣血旺盛的功能態(tài)[23]。相反，有些疾病過程中伴有血管新生不足，無法滿足機(jī)體組織修復(fù)或生長需要，如心肌缺血側(cè)支循環(huán)代償建立不足、創(chuàng)傷和骨折愈合緩慢、閉塞性脈管炎等，這類疾病需要促血管新生治療。研究表明許多中藥能通過影響血管調(diào)控因素，調(diào)節(jié)血管新生，從而有效治療血管新生異常的疾病。

有關(guān)當(dāng)歸補(bǔ)血湯促進(jìn)血管新生的藥理研究日趨活躍，目前已取得一定進(jìn)展，尤其是對黃芪及當(dāng)歸的單體研究較多，而從中醫(yī)原創(chuàng)性理論和系統(tǒng)科學(xué)思維角度而言，補(bǔ)氣生血的功能應(yīng)當(dāng)在當(dāng)歸補(bǔ)血湯類的整體系統(tǒng)中才能實(shí)現(xiàn)，孤立靶點(diǎn)的思路并不適合中醫(yī)這一系統(tǒng)科學(xué)的研究。但目前多數(shù)研究集中在體內(nèi)、外動(dòng)物整體、器官、細(xì)胞等水平，在分子、受體、靶作用點(diǎn)的研究還較薄弱，有待細(xì)致深入。隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，當(dāng)歸補(bǔ)血湯補(bǔ)氣生血機(jī)理將在分子水平深入研究，充分開發(fā)和利用中醫(yī)中藥，使樸素的中醫(yī)學(xué)理論得到現(xiàn)代最新科學(xué)的闡述。

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