XS-800i血細胞分析儀顯微鏡復檢規(guī)則的建立與評價

孫 燕，鮮玉萍

（四川省成都市第六人民醫(yī)院檢驗科 610051）

近年來，隨著分析技術(shù)的不斷發(fā)展，血常規(guī)檢測的準確性、靈敏度和檢測效率均大大提高。同時，全自動血細胞分析儀的使用也使細胞數(shù)量及形態(tài)學分析的參數(shù)不斷增多，為臨床提供了更多的診療依據(jù)。但由于血細胞分析儀尚不具備識別細胞形態(tài)的能力，因此，在形態(tài)學檢查方面只能作為篩選的手段。對于可疑或異常的標本進行顯微鏡復檢很有必要［1］。目前五分類血細胞分析儀的檢測篩檢標準在國內(nèi)外無統(tǒng)一規(guī)定，如果不在本室制定嚴格的復檢規(guī)則可能會導致錯誤的檢測報告發(fā)放及一些疾病的漏檢［2］。2005年國際血液學復檢專家組通過對13 289例血液標本進行分析后，推薦了41條自動血細胞分析和分類復檢規(guī)則［3］。但這只是通則，對于不同的實驗室并無針對性。因此，本科室根據(jù)本實驗室的具體情況及Sysmex XS-800i血細胞分析儀的性能特點，參考41條復檢規(guī)則，與臨床醫(yī)生討論，制訂了適合本實驗室的顯微鏡復檢規(guī)則，并對復檢規(guī)則進行了驗證，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2011年9月11～20日共收集1 002例標本，均來自于本院住院及門診患者的靜脈血抗凝標本（抗凝劑為乙二胺四乙酸二鉀），用Sysmex XS-800i血細胞分析儀按常規(guī)進行血細胞檢測。

1.2 儀器與試劑 XS-800i全自動血細胞分析儀、原裝配套試劑、質(zhì)控物均由日本Sysmex公司提供。顯微鏡為日本Olympus產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 人員培訓 根據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》和《白細胞分類計數(shù)參考方法》中制定的操作程序（SOP）［4－5］，對參與人員進行培訓。儀器操作和結(jié)果判斷由1名有經(jīng)驗的主管技師負責，涂片染色和鏡下檢查分別由另外4名主管技師負責，進行雙盲檢驗。

1.3.2 儀器準備 由Sysmex公司工程師對儀器進行校準，每天的室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測必須在控。

1.3.3 檢測方法 每例標本制備1張血涂片，寫好編號，風干后用瑞氏染液進行染色，保證涂片和染色良好。由有經(jīng)驗的檢驗人員按培訓方法進行鏡檢。內(nèi)容包括：（1）白細胞（WBC）分類計數(shù)每人每張血涂片分類200個 WBC，并觀察形態(tài)；（2）WBC和血小板（PLT）數(shù)量估計；（3）紅細胞（RBC）及PLT 的大小、形態(tài)；（4）有無巨大PLT及PLT聚集；（5）有無有核RBC及血液寄生蟲。

2 結(jié) 果

2.1 復檢規(guī)則建立的依據(jù) 利用Sysmex XS-800i血細胞分析儀自身的報警系統(tǒng)，根據(jù)儀器報警提示對 WBC、RBC、PLT的數(shù)量異常和形態(tài)異常進行判斷，參照“國際41條規(guī)則”，與臨床醫(yī)生討論，結(jié)合本科室工作量大的具體情況，制訂出復檢規(guī)則17條。

2.2 判斷標準

2.2.1 儀器結(jié)果陽性判斷標準 儀器檢測結(jié)果符合17條顯微鏡復檢規(guī)則中任一條即為陽性。

2.2.2 涂片鏡檢陽性判斷標準 由國內(nèi)血液學復檢專家小組將國際制定的12條鏡檢陽性規(guī)則進一步量化完善，統(tǒng)一了評估標準［6］。（1）RBC明顯大小不均（大小相差1倍以上），中空淡染（大于1／2淡染區(qū)的RBC＞30% ）；（2）巨大PLT＞15%；（3）見到PLT聚集；（4）有Dohle小體的粒細胞大于1%；（5）有中毒顆粒的中性粒細胞大于10%；（6）空泡變性粒細胞大于10% ；（7）原始和幼稚細胞大于或等于1% ；（8）早幼和中幼粒細胞大于或等于1% ；（9）晚幼粒細胞大于2%；（10）異型淋巴細胞大于5% ；（11）NRBC大于或等于1%；（12）漿細胞大于或等于1%。鏡檢結(jié)果符合上述12條中任何一條即為陽性。

2.2.3 真陽性、假陽性及真陰性、假陰性判斷標準 真陽性為儀器及鏡檢結(jié)果均為陽性；假陽性為儀器結(jié)果為陽性，鏡檢結(jié)果為陰性；真陰性為儀器及鏡檢結(jié)果均為陰性；假陰性為儀器結(jié)果為陰性，鏡檢結(jié)果為陽性。

2.3 驗證

2.3.1 1 002例標本的驗證情況 根據(jù)上述判斷標準，將人工顯微鏡鏡檢結(jié)果與儀器報警信息進行比較，1 002例標本中真陽性率6.7%（67／1 002），假陽性率15.7%（157／1 002），真陰性率75.1%（753／1 002），假陰性率2.5%（25／1 002）。

2.3.2 1 002例標本中真陽性、假陽性情況分析 1 002例標本中需復檢標本數(shù)為224例，將224例中各項的真陽性與假陽性進行了分類分析結(jié)果見表1。

2.3.3 17條復檢規(guī)則在實際工作中的應(yīng)用情況 2011年10月至2012年1月本科室每月的復檢率分別為24.6%、21.9%、23.5%、21.3%，4個月的平均復檢率為22.8%，與驗證結(jié)果相符。

3 討 論

為了彌補血細胞分析儀對細胞形態(tài)識別能力的不足，需要建立適合本實驗室的顯微鏡復檢規(guī)則，并進行必要的顯微鏡復檢。復檢規(guī)則建立后，需對其科學性及實用性進行驗證。本實驗室制訂Sysmex XS-800i全自動血細胞分析儀17條顯微鏡復檢規(guī)則遵循的原則：（1）根據(jù)該儀器對細胞形態(tài)的識別能力；（2）該儀器均能提供復檢規(guī)則涉及的參數(shù)；（3）復檢范圍涵蓋了儀器的所有參數(shù)及形態(tài)學特征；（4）在確保病理細胞不漏檢，保證篩選質(zhì)量的基礎(chǔ)上盡量降低復檢率，使患者能在較短的時間內(nèi)獲得正確的檢驗報告；（5）假陰性是制定復檢規(guī)則的關(guān)鍵參數(shù)，具有診斷意義的重要參數(shù)不能出現(xiàn)假陰性，其他參數(shù)的假陰性率應(yīng)小于5%，國際血液學復審協(xié)作組認為5%是為保證患者檢測結(jié)果安全性的最大可接受的假陰性率；（6）在較低假陰性率的前提下降低假陽性率，假陽性率過高會增加工作量，延遲報告發(fā)放時間；（7）白血病患者及臨床醫(yī)生提出閱片需求的必須鏡檢［7］。疾病的正確診斷需要了解患者的病史，進行體格檢查及實驗室檢查。無論儀器有無異常提示，只要臨床醫(yī)生要求人工鏡檢，就必須進行。涂片鏡檢可確切反映白血病細胞特征，在白血病診治過程中起關(guān)鍵作用，因此，對白血病患者的標本必須進行鏡檢。

按照本實驗室制訂的復檢規(guī)則，通過1 002例標本進行驗證，總符合率為81.8%（真陽性加真陰性）。其中假陰性25例。2例幼稚細胞漏檢，但并非白血病患者，該病例均為癌癥化療患者，白細胞總數(shù)正常，分類200個白細胞中中幼粒細胞只見到2個（僅占1% ），處在早幼粒、中幼粒大于或等于1%鏡檢陽性臨界值附近。出現(xiàn)這種情況與人工鏡檢分類計數(shù)的變異率有關(guān)，比例越低，變異越大，而未見到其他幼稚細胞。另外在1 002例標本中2例白血病復檢均為陽性，未漏檢。

復檢以規(guī)則統(tǒng)計，血小板（規(guī)則13、15）復檢率最高，占總復檢率的41.1%，但其假陽性率高達71.7%。其主要原因可能是乙二胺四乙酸抗凝劑和靜脈采血過程欠規(guī)范造成。白細胞報警（規(guī)則14））次之，占總復檢率32.1%；白細胞（規(guī)則2～7）第3，約占總復檢率22.8%，后二者假陽率雖然分別高達81.9%、52.9%，但為了防止白血病幼稚細胞漏檢是必要的。其他規(guī)則雖然復檢率低，但復檢陽性率高，其復檢尤為重要。

按照上述復檢規(guī)則，在這次驗證過程中，儀器檢測結(jié)果需要復檢的有224例，復檢率為22.4%，后經(jīng)本科室使用4個月統(tǒng)計，復檢率分別為24.6%、21.9% 、23.5% 、21.3%；平均復檢率為22.8%。通過1 002例標本進行分析，對該17條復檢規(guī)則進行驗證，經(jīng)統(tǒng)計分析得出真陽性率為6.7%，假陽性率為15.7%，真陰性率為75.1%，假陰性2.5%。2.5%的假陰性率符合國際血液學復審協(xié)作組關(guān)于假陰性率小于5.0%的規(guī)定，22.4% 的復檢率是合理的。

［1］ 彭黎明，邱廣斌，趙威，等.自動血細胞計數(shù)和白細胞分類計數(shù)的復檢規(guī)則［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2007，30（4）：377.

［2］ 孫芾，王厚芳，于俊峰，等.血細胞顯微鏡復檢標準的制定及臨床應(yīng)用［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2005，28（2）：155-157.

［3］ Barnes PW，McFadden SL，Machin SJ，et al.The International Consensus Group for Hematology Review：suggested criteria for action following automated CBC and WBC diferential analysis［J］.Lab Hematol，2005，11（1）：83-90.

［4］ 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學出版社，2006：133.

［5］ 中華人民共和國衛(wèi)生部.白細胞分類計數(shù)參考方法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：4.

［6］ 中華檢驗醫(yī)學雜志編輯委員會.全國血液學復檢專家小組工作會議紀要暨血細胞自動計數(shù)復檢標準釋義［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2007，30（3）：380.

［7］ 叢玉隆，王昌富，樂家新.血細胞自動化分析后血涂片復審標準制定的原則與步驟［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2008，31（6）：731.