丹參抗肝纖維化有效部位化學(xué)成分研究

王文祥

北京榮昌藥物研究院，北京 100078

唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge)是一常用中藥。化學(xué)成分研究表明，其主要含有酚酸類(lèi)水溶性成分和二萜類(lèi)脂溶性成分。藥理研究表明，丹參能降低肝內(nèi)I、II型膠原mRNA水平;對(duì)由膠原構(gòu)成的網(wǎng)狀纖維結(jié)締組織增生、沉積和延伸均有抑制作用，提示丹參可減少肝內(nèi)細(xì)胞基質(zhì)生成，抑制星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成纖維細(xì)胞［1，2］。我們用水提后醋酸乙酯萃取所得的酚酸類(lèi)成分，動(dòng)物藥理研究表明有明顯抗肝纖維作用［3］，為了進(jìn)一步闡明其所含的化學(xué)成分，對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)分離從中分離鑒定了7個(gè)化合物，其分別為:4、5、4'、5'-四羥基 1、2 雙苯醚(1)，原二茶醛(2)，原二茶酸(3)，異阿魏酸(4)，咖啡酸(5)，丹參甲素(6)，丹酚酸D(7)，其中化合物1為首次從丹參中分得的化合物。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

熔點(diǎn)用WL-I型顯微熔點(diǎn)儀測(cè)定，溫度未校正。氣質(zhì)聯(lián)用為Finnigan MD800紅外用 perkin—Elmer 983紅外分光光度計(jì)。質(zhì)譜用JMS-DX 300質(zhì)譜儀，核磁共振譜用ACF-300型核磁共振儀。薄層層析及柱層析用硅膠(200目)均為青島海洋化工產(chǎn)品，分離中所用試劑均為色譜純。

1.2 提取與分離

取丹參飲片10 kg，用16倍量水熱提二次，每次1.5 h，濾過(guò)，合并液，濃縮至每毫升含生藥0.5 g。加5%明膠沉淀鞣質(zhì)，0～4℃放置12 h，濾過(guò)，濾液濃縮至每毫升含生藥1.0 g，加95%乙醇至含醇量為70%，0～4℃放置12 h，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至每毫升含生藥2.0 g。用稀鹽酸調(diào)pH2到3，再用醋酸乙酯萃取，減壓回收醋酸乙酯，真空干燥，即得丹參抗肝纖維化有效部位總酚酸。(平均得率大于2%)

將丹參總酚酸提取物拌硅膠后，分別用乙酸乙酯、丙酮和甲醇回流提取得乙酸乙酯、丙酮和甲醇三個(gè)部位，乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠反復(fù)柱層析得化合物1～5。丙酮部位經(jīng)硅膠柱和ODS柱層析得化合物6、7。其中化合物1為首次從植物中分得的化合物。

1.3 鑒定

化合物1 為白色針晶，mp:198℃，三氯化鐵反應(yīng)陽(yáng)性。元素分析，分子式為C12H8O6。C58.12%，H3.31%。理論值C58.06%。IR:(cm-1):3100(締合 OH)，3083(芳 CH)，1692(—CH=C—O)，1645，1420，為芳環(huán)骨架振動(dòng)，1310(—C=C—)。1H NMR:出現(xiàn)二個(gè)峰，δ:6.63 ppm，13.11 ppm。峰面積比值為1∶1，從峰形上看13.11為活潑H，可能為形成分子內(nèi)氫鍵締合峰，6.63為芳?xì)?，無(wú)裂分，說(shuō)明其鄰位無(wú)其他質(zhì)子。碳譜只有二個(gè)碳棒(165.97 ppm，133.98 ppm)均位于低場(chǎng)，說(shuō)明此化合物無(wú)脂肪碳，并且為高度對(duì)稱(chēng)化合物。DEPT譜說(shuō)明:133，98峰為叔碳。由此推斷，化合物I可能為1、2、4、5四取代苯。因碳譜未有碳基峰，氫譜酚羥基如締合需處鄰位。EI/MS:248(M+)，203，185(203—H2O)，172，149(185—2H2O)，144(172—CO)，116(144—CO)，98，74，45。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)［10，11］鑒定化合物 1 為:4，5，4'，5'—四羥基 1，2雙苯醚。

化合物2 為灰白色針品，mp.195℃ 三氯化鐵陽(yáng)性。IR:(cm-1):3323，2754，1654，1595，1536，1477，1166，1118，974，876，813，754，631。MS(EI):M/Z 138(M+)，137(100)，109(48，62)，81(30.43)，63(17.09)，53(20.32)。1H NMR(DMSO-D6):δ ppm 6.90(1H，d，J=8 Hz)，7.23(1H，d，J=1.85 Hz)，7.27(1H，dd，J=8 Hz，J=1.85 Hz)，9.67(3 H，S，-OH，-OH，-CHO)。13C NMR(DMSO-D6):δ ppm 124.8(C-1)，129.2(C-2)，115.8(C-3)，114.7(C-4)，152.4(C-5)，146.2(C-6)，191.4(C-7)。根據(jù)以波譜數(shù)據(jù)并與標(biāo)準(zhǔn)原兒茶醛波譜相比較［4］，鑒定化合物2為原兒茶醛。

化合物4 為白色針晶，mp.213℃，三氯化鐵陽(yáng)性。IR(cm-1):3401，2979，2948，1671，1628，1511，1443，1263，1135，1023，977，857，815，760。MS(EI):M/Z 194(M+)，179(42.07)，133(19.28)。1H NMR(DMSO-D6):δppm3.81(3H，S，-OCH3)，6.25(1H，d，J=15.99)，7.46(1H，d，J=15.99)，7.10(1H，d，J=7.61 Hz)，7.24(1H，d，J=1.91 Hz)，7.28(1H，dd，J=7.97 Hz，J=1.96 Hz)。13C NMR(DMSO-D6):δppm 55.78(C-10)，127.24(C-1)，144.32(C-2)，141.99(C-3)，152.27(C-4)，116.40(C-5)，121.11(C-6)，112.16(C-7)，114.26(C-8)，167.89(C-9)。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)并與已知化合物相比較［4］，鑒定化合物4為異阿魏酸。

化合物5 白色結(jié)晶，mp.186℃。三氯化鐵試劑陽(yáng)性。IR VKBrmax(cm-1):3482，3050-2556(br)，1645，1610，1599，1449，1277。1H NMR(DMSO):δ6.12(1H，1d，J=8.3，1.8)，7.31(1H，d，J=1.8)，7.43(1H，d，J=15.2)?；衔?與咖啡酸數(shù)據(jù)一致［4］，故鑒定化合物5為咖啡酸。

化合物6 為白色針晶。mp.IR:VKBrmax(cm-1):3600(OH)，3054(芳 H)，2943，2816，1646(COOH)，1567，1528，1469(為芳環(huán)骨架振動(dòng))，1393(—C=C—)，1211，1121，871。1H NMR(DMSO-D6):δppm 2.40(1H，dd，J=8.5 Hz，13.5 Hz)，2.83(1H，dd，J=5 Hz，13.5 Hz)，3.6(1H，ddJ=5 Hz，8.5 Hz)，6.44(1H，dd，J=7.95 Hz，1.93 Hz)，6.57(1H，d，J=7.95 Hz)，6.65(1H，d，J=1.93 Hz)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)與已知波譜比較［6］，鑒定化合物6為丹參甲素。

化合物7 為黃色結(jié)晶，mp.288℃。三氯化鐵反應(yīng)陽(yáng)性。IR(cm-1):3390(OH)，1795，1715()，1636，1614，1521(芳環(huán))，1275，1185，1063，977。1H NMR δ(ppm)6.37(1H，d，J=18)，7.53(1H，d，J=18)為一反式雙鍵氫，7.44(1H，d，J=8.5)，6.89(1H，d，J=8.5)為苯環(huán)上二個(gè)相連的氫，6.67(1H，d，J=6.76)，6.57(1H，dd，J=6.76，1.5 Hz)，6.69(1H，d，J=1.5 Hz)另一個(gè)苯環(huán)的兩個(gè)鄰位一個(gè)間位氫，2.96(1H，dd，J=8.5，13.5 Hz)，3.05(1H，dd，J=8.5，13.5 Hz)，5.07(1H，dd，J=5，8.5 Hz)2.08(2H，S)為一連環(huán)上氫。13C NMR和DEPT表明:3個(gè)碳基 碳1741，170，165.9。二個(gè)脂仲碳:36.3，33.11一個(gè)連氧叔碳73.24，以及7個(gè)芳季碳和7個(gè)芳叔碳。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)［6，7］化合物7鑒定為:丹酚酸D。

2 討論

上述分離鑒定結(jié)果表明:丹參水溶性酚性成分主要為酚性芳酸類(lèi)化合物。根據(jù)分離得率丹參甲素和丹酚酸D所占比例最大，說(shuō)明丹參抗纖維化有效部位是以丹參素為代表的丹參總酚酸，本研究在分離時(shí)未分到已報(bào)道的丹參抗纖維化有效成分丹酚酸A 和 B［8，9］，可能與其不穩(wěn)定易氧化和分解，同時(shí)也提示它們不是丹參抗纖維化唯一有效成分，或者它們?cè)隗w內(nèi)抗纖維化是非原型化合物起作用而是先分解成其他化合物后再起作用。

1 Hu YY(胡義揚(yáng))，Liu C(劉成)，Liu P(劉平).Research status and prospects of the active ingredients of traditional Chinese medicine in antifibrotic.Chin Tradit Herb Drugs(中草藥)，1996，27:183-185.

2 Xue HM(薛惠明)，Hu YY(胡義揚(yáng))，Gu HT(顧宏圖)，et al.The inhibition of Salvia Miltiorrhiza on CCl4 and DMN-induced hepatic fibrosis rats.Chin J Inte Tradit West Med Liv Dis(中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志)，1999，9(4):16-18.

3 Ming ZJ(明志君)，Cao L(曹莉)，Wang WX(王文祥).Effelect of the extract of paeonia lactiflora and salvia miltiorrhiza on Liver fibrosis induced by BSA in rats.Acta Univ Med Nanjing(南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào))，2006，26:925-928.

4 Yu DQ(于德泉).Handbook of Analytical Chemistry Volume V(分析化學(xué)手冊(cè)，第五分冊(cè))NMR Spectroscopy.Beijing:Chemical Industry Press，1989.

5 Zheng GX(鄭國(guó)樨).The chemical ingredients of Salvia Miltiorrhiza research overview.Chin Pharm J(中國(guó)藥學(xué)雜志)，1989，24:6-10.

6 Zhang DC(張德成)，Wu WL(吳偉良)，Liu XJ(劉星階)，et al.Research of Water-soluble Active Ingredients of Salvia Miltiorrhiza.Chin Tradit Pat Med(中成藥研究)，1982;1，24.

7 Takako Y，Hae Y，Chung，HO，et，al.Isolation of the active component having the uremia-preventive effect from salviae miltiorrhizae radix extract.Chem Phar Bull，1988，36:316-320.

8 Chen YX(陳岳祥)，Li S(李石)，F(xiàn)an LY(范列英)，et al.The Anti-hepatic Fibrosis Experimental Study of Salvia miltiorrhiza monomer IH764-3.Chin Med J(中華醫(yī)學(xué)雜志)，1998，78:636-637.

9 Huang YS(黃詒森)，Zhang JT(張均田).Three water-soluble components of Salvia Miltiorrhiza Anti-oxidation effect in vitro．Acta Pharm Sin(藥學(xué)學(xué)報(bào))，1992，27:96-100.

10 Dai Y，Shi JQ，Zheng Q，et al.Thermodynamic Properties and Relative Stability of Polyhydroxylated Dibenzo-p-dioxins Calculated by Density Functional Theory.Chin J Struct Chem，2011，30:354-361.

11 Michael RL，Christopher AR，Patrick AR.The influence of hydroquinone on tyrosinase kinetics.Bioorg Med Chem，2012，20:4364-4370.