基質(zhì)金屬蛋白酶－1基因多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死相關(guān)性研究＊

張晉霞，張志勇，劉 斌，史富華，李紹彩，張文彥，張 蕊（河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院：.神經(jīng)內(nèi)科，.神經(jīng)外科，河北唐山 06000；遵化市人民醫(yī)院：.神經(jīng)內(nèi)科，.心內(nèi)科，河北遵化 0600）

頸動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化腦梗死（ACI）的病理機(jī)制主要包括血管腔狹窄致使腦組織缺血和斑塊脫落造成栓塞，超過(guò)60%的ACI患者由后者所致[1]。因此，斑塊不穩(wěn)定性研究對(duì)預(yù)防ACI尤其重要。基質(zhì)金屬蛋白酶－1（MMP－1）基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的插入或缺失突變，對(duì)MMP－1表達(dá)有不同影響，使其對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的降解作用不同，影響動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展[2]。本研究分析了ACI患者M(jìn)MP－1基因突變和外周血MMP－1水平的關(guān)系，旨在為頸動(dòng)脈斑塊的破潰、脫落及斑塊內(nèi)出血等引起ACI提供預(yù)防治療參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院2010年10月至2012年10月收治的ACI患者95例，均符合全國(guó)第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議《各類(lèi)腦血管疾病診斷要點(diǎn)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頸動(dòng)脈超聲檢查證實(shí)存在頸動(dòng)脈硬化；所有患者無(wú)外傷、動(dòng)脈炎癥、血液疾病、囊腫、藥物和腦血管畸形導(dǎo)致的腦梗死；根據(jù)頸動(dòng)脈超聲檢查結(jié)果分為不穩(wěn)定斑塊組51例和穩(wěn)定斑塊組44例。不穩(wěn)定斑塊組患者中，男28例、女23例，年齡48～76歲，平均54.6歲；穩(wěn)定斑塊組患者中，男29例、女15例，年齡47～81歲，平均56.3歲。同期于該院體檢健康者58例納入對(duì)照組，男37例、女21例，年齡49～73歲，平均61.45歲，均無(wú)主要臟器系統(tǒng)疾病，頸動(dòng)脈無(wú)硬化現(xiàn)象，無(wú)腦梗死家族史和病史。性別、年齡各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 MMP－1基因多態(tài)性檢測(cè) 采集受檢者靜脈血3mL，酚抽提法提取血白細(xì)胞DNA；5%瓊脂糖凝膠電泳熒光法估測(cè)DNA濃度，稀釋至20μg／L[3]；采用PerKin－Elme公司聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增儀擴(kuò)增MMP－1基因特異片段，上游引物：5′－TCG TGA GAA TGT CTT CCC ATT－3′，下游引物：5′－TCT TGG ATT GAT ITG AGA TAA GTG AAA TC－3′，反應(yīng)條件為：95℃30s，55℃30s，72℃30s，35個(gè)循環(huán)；取5μL產(chǎn)物與2 μL 10×NE緩沖液、0.2μL牛血清清蛋白、0.3μL XmnI、2.5 μL超純水混勻，靜置3.0h[4]；聚丙烯酞胺凝膠電泳混勻液，EB染色后紫外燈下觀察。

1.2.2 外周血MMP－1水平檢測(cè) 體檢健康者于體檢時(shí)、患者于發(fā)病后第1、3、7天采集肘靜脈血3mL，采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒（武漢博士德）測(cè)定MMP－1水平[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel2003建立數(shù)據(jù)庫(kù)，以SPSS18.0軟件分析數(shù)據(jù)；計(jì)量資料以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α＝0.05，P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

不穩(wěn)定斑塊組2G／2G基因型頻率和2G等位基因頻率顯著高于穩(wěn)定斑塊組（P＜0.05）；不穩(wěn)定斑塊組和穩(wěn)定斑塊組2G／2G基因型頻率與2G等位基因頻率均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。不穩(wěn)定斑塊組和穩(wěn)定斑塊組外周血MMP－l濃度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不穩(wěn)定斑塊組和穩(wěn)定斑塊組各時(shí)間點(diǎn)外周血MMP－l濃度均高于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表1 MMP－1基因型頻率分布[%（n）]

表2 外周血MMP－l水平比較（μg／L，x±s）

3 討 論

頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)覆蓋的纖維帽將斑塊內(nèi)的成血栓性物質(zhì)與血液隔開(kāi)，是決定斑塊是否穩(wěn)定的關(guān)鍵，如果纖維帽受損或破裂，可導(dǎo)致斑塊內(nèi)物質(zhì)進(jìn)入血液，促使血栓形成，引發(fā)動(dòng)脈阻塞誘發(fā)ACI[6]。MMP－1是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中表達(dá)量最高的腸膠原酶，能夠降解血管內(nèi)膜和粥樣斑塊纖維帽的主要組成蛋白，即Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白。有研究證實(shí)，頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊邊緣和泡沫細(xì)胞積聚處MMP－1濃度較高，說(shuō)明MMP－1通過(guò)降解Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白使纖維帽變薄，促進(jìn)粥樣斑塊進(jìn)入不穩(wěn)定狀態(tài)[7]。MMP－1基因位于染色體11q22－q23，有10個(gè)外顯子和9個(gè)含子，1 607bp位點(diǎn)為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)出現(xiàn)單個(gè)G核苷酸插入或缺失，可導(dǎo)致單核苷酸多態(tài)性的出現(xiàn)，影響MMP－1基因的表達(dá)[8]。

本研究通過(guò)檢測(cè)ACI患者M(jìn)MP－1基因多態(tài)性和外周血MMP－1水平，并結(jié)合超聲檢查，從斑塊形態(tài)學(xué)上探討了MMP－1基因多態(tài)性、外周血MMP－1水平、頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性和ACI的關(guān)系，結(jié)果證實(shí)MMP－1基因多態(tài)性影響外周血MMP－1水平，而頸動(dòng)脈斑塊的不穩(wěn)定能夠預(yù)示發(fā)生ACI的可能。

總之，MMP－1基因多態(tài)性及外周血MMP－1水平均與ACI具有相關(guān)性，MMP－1基因型檢測(cè)聯(lián)合頸動(dòng)脈斑塊超聲影像學(xué)檢查，有利于及早發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定斑塊，盡早采取干預(yù)措施，降低ACI發(fā)病率。

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[2]姜紅菊，張梅，李大慶，等.冠心病患者基質(zhì)金屬蛋白酶－1基因多態(tài)性[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2010，13（5）：589－592.

[3]侯旭敏，劉華，關(guān)韶峰，等.基質(zhì)金屬蛋白酶－1與冠狀動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的相關(guān)研究[J].中國(guó)心血管病研究，2007，5（12）：889－891.

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