LC-MS/MS法測定蔬菜和水果中3種殺軟體動物劑

鄭新華，韓煥美，何桂華，陳晞，張愛霞，盧燕華

（濟南出入境檢驗檢疫局，山東濟南250014）

防治有害軟體動物的農(nóng)藥叫做殺軟體動物劑。殺蟲環(huán)、滅梭威、四聚乙醛是選擇性很強的軟體動物殺滅劑，廣泛應用于防治作物上的田螺、蝸牛與蛞蝓等害蟲[1]。雖然此類藥物毒性中等或較低，但由于廣泛使用，導致人畜中毒的事例時有發(fā)生[2]，同時，此類藥物可在農(nóng)作物、環(huán)境及水生生物大量殘留，最終威脅人類健康。我國GB2763-2012《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定了葉菜中的四聚乙醛殘留限量是1.0 mg/kg；糙米中的四聚乙醛殘留限量是0.2 mg/kg；大米中的殺蟲環(huán)為0.2 mg/kg。殺蟲環(huán)在日本肯定列表中限量為0.050 mg/kg。

目前，關于殺軟體動物劑殘留量檢測報道較少。有用氣相色譜法（GC-ECD）檢測殺蟲環(huán)的報道[3]；有用LC-MS/MS 檢測滅梭威的報道[4]；用氣相色譜法[5]和LCMS/MS 法[6]檢測的四聚乙醛的報道。但對于本文所述的3 中不同類型的殺軟體動物劑殘留量同時分離檢測的尚未見報道。本文對3 中不同類型的殺軟體動物劑在蔬菜和水果中的殘留量采用同時提取、凈化方法，建立了LC-MS/MS 同時檢測的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Aglient1200 高效液相色譜API4000 串聯(lián)質(zhì)譜儀：美國AB SCIEX；感量為0.1 mg 的分析天平：瑞士梅特勒公司；Milli-Q 純水器：美國Millipore 公司；IKAGM200 型高速均質(zhì)器：德國IK 公司；超純水由Milli-Q純水器制備；甲醇、乙腈、丙酮：色譜純，默克公司；甲苯、甲酸（分析純）；氯化鈉、無水NaSO4（分析純，用前在500 ℃馬弗爐內(nèi)烘5 h，冷卻裝瓶備用）；四聚乙醛、滅梭威、殺蟲環(huán)標準品：德國Dr Ehrenstorfer 公司。其他試劑，如非特別提及，均為分析純。

1.2 標準工作液的配制

稱取四聚乙醛，滅梭威、殺蟲環(huán)標準品各10.0 mg，用甲醇溶解后，并分別定容于100 mL 棕色容量瓶中，即得100 mg/L 標準儲備液。用甲醇將標準儲備液稀釋成系列標準工作溶液，進行LC-MS/MS 分析。以標準工作液的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制相關線性方程。

1.3 樣品提取及凈化

稱取20.0 g 樣品于50 mL 聚四氟乙烯離心管中，加入20 mL 乙腈，在勻漿機中高速勻漿2 min。勻漿后以4 500 r/min 離心5 min，上清液轉移至另一裝有5.0 g氯化鈉的50 mL 離心管中，塞上塞子，手動劇烈振搖后再渦流1 min，再以4 500 r/min 離心5 min，吸取上清液轉移于裝有5.0 g 無水NaSO4的漏斗中，漏斗下接10 mL刻度試管，準確接液10 mL 于刻度管中，刻度管置于40 ℃水浴中氮氣吹干。準確加入2.0 mL 乙腈溶解殘渣渦流2 min 待凈化。

待凈化液轉移至盛有0.15 gPSA 粉和0.15 gC18粉的離心管中。渦流2 min，離心。取1.0 mL 上清液，置于離心管中氮氣吹近干，用甲醇定容至1.0 mL，渦流混合后過0.22 μm 濾膜，進行LC-MS/MS 分析。

1.4 儀器條件

色譜條件：XBridgeTMC18色譜柱（150 mm×2.1 mm×5.0 μm）；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。流動相：甲醇+0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫程序見表1。

表1 流動相梯度洗脫條件Table 1 Eluted condition of the mobile phase

質(zhì)譜條件：ESI 源正離子模式電離；多反應監(jiān)測；電噴霧電壓：4 500 V；離子源溫度：500 ℃；載氣流速：15 L/min；霧化器壓力：45 psi。目標物標準品的采集參數(shù)見表2。

表2 3 種殺軟體動物劑的LC-MS/MS 分析參數(shù)Table 2 LC-MS/MS parameters for three kinds of molluscicides

1.5 添加回收實驗

對菠菜、白菜、草莓和白瓜進行添加回收實驗，分別添加濃度為0.010、0.020、0.050 mg/kg。稱樣后加入標準溶液，渦旋混勻放置0.5 h 后按上文進行樣品處理。

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇及優(yōu)化

以乙腈+0.1%甲酸水，甲醇+5 mmol/L 乙酸銨水溶液，甲醇+0.1%甲酸水作為流動相，考察了不同流動相對色譜圖的影響。研究發(fā)現(xiàn)以乙腈+0.1%甲酸水，甲醇+5 mmol/L 乙酸銨水溶液為流動相，四聚乙醛，殺蟲環(huán)出峰快，峰形差。而以甲醇+0.1%甲酸水為流動相，采用梯度洗脫，3 種殺軟體動物劑能夠快速分離，且每種化合物色譜峰對稱尖銳，分離效果較好，見圖1。因此，選擇甲醇+0.1%甲酸水溶液作流動相，梯度洗脫條件見表1。

圖1 3 種殺軟體動物劑多反應監(jiān)測色譜圖Fig.1 Multiple reaction monitering chromatograms of three molluscicides

2.2 凈化條件的選擇

實驗比較了分散固相凈化方法、氨基柱、弗羅里硅土小柱對樣品的凈化效果。結果表明弗羅里硅土小柱去除雜質(zhì)效果較差；氨基柱去除雜質(zhì)效果較好，但試劑消耗量大、費時，而且四聚乙醛回收較差。采用PSA 粉、C18粉2 種混合吸附劑粉末凈化樣品，提取液可以充分和凈化粉末接觸，凈化效果較好，并且基線穩(wěn)定，回收效果好。

2.3 樣品機制效應的消除

樣品基質(zhì)對離子化有抑制作用，不同農(nóng)藥受同一樣品基質(zhì)影響不同，不同樣品對同一農(nóng)藥離子化的抑制也有差異。殺蟲環(huán)和滅梭威的離子化效率受樣品基質(zhì)影響較小，四聚乙醛離子化效率受樣品基質(zhì)影響較強。菠菜，白菜對農(nóng)藥離子化影響較弱，草莓和白瓜對農(nóng)藥離子化影響較強。為消除樣品基質(zhì)效應，以空白樣品提取液為標準溶液的稀釋液，可使標樣和樣品溶液具有同樣的離子化條件，從而消除樣品基質(zhì)效應。

2.4 線性方程、相關系數(shù)和檢出限

準確配制一系列濃度的3 種混合標準工作溶液，按上述儀器條件依次進樣，以色譜峰面積對濃度做標準曲線，得3 種殺軟體動物劑的線性方程及相關系數(shù)見表3。

表3 3 種農(nóng)藥的線性方程、線性范圍、相關系數(shù)和方法檢出限Table 3 Linear equations，linear ranges，correlation coefficients（r2）and detection limits of three molluscicides

以信噪比S/N=3 和樣品處理過程的稀釋倍數(shù)計算得出方法檢出限。結果顯示，3 種農(nóng)藥在一定質(zhì)量濃度內(nèi)呈良好線性關系，相關系數(shù)均大于0.99，檢出限均為0.010 mg/kg。

2.5 方法的回收率、精密度

在陰性白菜，菠菜，草莓和白瓜樣品中添加3 個濃度水平的混合標準溶液，按上述前處理方法進行處理，做回收實驗，每個水平重復6 次，精密度結果見表4。

表4 樣品中3 種殺軟體動物劑回收率和相對標準偏差Table 4 Spiked recoveries and RSDs of three kinds of molluscicides in the samples

3 種殺軟體動物劑在白菜、菠菜、草莓、白瓜中添加回收率在80.0 %～101.5 %之間，相對標準偏差（RSD，n=6）2.3%～7.5%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

3 結論

本文采用乙腈提取，分散固相進行樣品凈化，首次建立了同時檢測蔬菜和水果中的四聚乙醛、殺蟲環(huán)、滅梭威3 種殺軟體動物劑殘留量的LC-MS/MS法。該方法簡便快速，準確靈敏、重現(xiàn)性好，完全滿足進出口食品農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)品質(zhì)量控制要求。

[1] 朱丹,周曉農(nóng),張世清,等.密達利殺滅湖北釘螺效果的研究[J].中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志,2006,24(3):200-203

[2] 陸慧寧,任三香,祝亞非,等.有毒湯樣中微量農(nóng)藥殺蟲環(huán)的鑒定[J].分析測試學報,2002,21(3):78-89

[3] 蔣世熙,夏虹.GB/T 5009.113-2003 大米中殺蟲環(huán)殘留量的測定[S].北京:中國標準出版社,2004:63-67

[4] 龐國芳,鄭峰,范春林,等.GB/T 23208-2008 河豚魚、鰻魚和對蝦中450 種農(nóng)藥及相關化學品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京:中國標準出版社,2009:1-80

[5] 張雪燕,代雪芳.四聚乙醛在煙草和土壤中的殘留量檢測與消解動態(tài)[J].農(nóng)藥學學報,2006,8(4):344-348

[6] 李存,趙莉,楊挺,等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中四聚乙醛殘留量[J].分析化學,2011,39(2):239-242