猴腿蹄蓋蕨化學(xué)成分研究

王金蘭， 張美薇， 冀 承， 張文治， 張樹(shù)軍

(齊齊哈爾大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾161006)

猴腿蹄蓋蕨Athyrium multidentatum又名多齒蹄蓋蕨，別名猴蹆菜，猴蹆兒，屬蹄蓋蕨科，是多年生蕨類(lèi)植物，生于雜木林或針闊混交林中及林緣的濕潤(rùn)、溝邊河岸草地，廣泛分布于中國(guó)東北、華北、內(nèi)蒙古等地，朝鮮、日本也有分布。具有清熱解毒，潤(rùn)肺理氣，補(bǔ)虛舒絡(luò)，止血?dú)⑾x(chóng)的功效，經(jīng)常食用可治療高血壓、頭昏、子宮出血、關(guān)節(jié)炎等癥，并對(duì)麻疹、流感有預(yù)防作用，民間用來(lái)治療痢疾、消腫止痛、外傷出血、驅(qū)蛔蟲(chóng)、瘡毒癤腫及配伍治療癌癥等，也做山野菜食用。由于目前缺少關(guān)于其中化學(xué)成分的研究報(bào)道，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)該植物的藥用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其地上部分乙醇提取液乙酸乙酯萃取物的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離得到12個(gè)化合物，分別鑒定為:綿馬酚 B(1)，咖啡酸(2)，槲皮素 (3)，烏蘇酸 (4)，山柰酚 (5)，沒(méi)食子酸 (6)，3-羥基-5，6-環(huán)氧-β-紫羅蘭酮(7)，山柰酚-3-β-D-葡萄糖苷 (8)，山柰酚-7-β-D-葡萄糖苷 (9)，槲皮素-3-β-D-葡萄糖苷 (10)，槲皮素-7-β-D-葡萄糖苷 (11)，綠原酸 (12)。12個(gè)化合物均系首次從該種植物中分離得到。

1 儀器與材料

x—6顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀 (溫度未校正);Bruker AM—400型核磁共振波譜儀;Magna FTIR—750型傅立葉變換紅外光譜儀(美國(guó)Nicolet公司);美國(guó)魯?shù)婪蚬?AUTOPOLⅤ型旋光儀;薄層色譜硅膠板(煙臺(tái)化工廠生產(chǎn));HITACHI L—7100高效液相色譜儀;柱色譜硅膠 (200～300目，青島海洋化工廠產(chǎn)品)，溶劑為國(guó)藥集團(tuán)上海試劑廠產(chǎn)品。

猴腿蹄蓋蕨于2008年5月3日采于五大連池風(fēng)景區(qū)，經(jīng)齊齊哈爾大學(xué)植物學(xué)教授沙偉鑒定為猴腿蹄蓋蕨Athyrium multidentatum。標(biāo)本貯藏于齊齊哈爾大學(xué)天然有機(jī)物研究室 (編號(hào)為:Am-20080503)。

2 提取與分離

干燥猴腿蹄蓋蕨地上部分3.3 kg粉碎后，室溫下用95% 無(wú)水乙醇15 L浸泡6 d過(guò)濾，重復(fù)提取5次，合并提取液濃縮至約900mL，加入1.0 L去離子水混懸，依次用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇分級(jí)萃取4次，分別合并各種溶劑萃取液，濃縮得正己烷萃取物145.8 g，乙酸乙酯萃取物54.5 g，正丁醇萃取物45.5 g。

乙酸乙酯萃取物33.5 g，用硅膠柱層析分離，依次用 正己烷-乙酸乙酯 (5∶5)2.5 L、乙酸乙酯3.5 L、乙酸乙酯-甲醇 (7∶3)3.2 L進(jìn)行洗脫。以150 mL為單位接收流出液，根據(jù)TLC分析跟蹤監(jiān)測(cè)結(jié)果，合并相同餾分，得到 6個(gè)部分(F1～F6)。F1(7.3 g)用硅膠柱層析分離，依次用正己烷-乙酸乙酯 (8∶2)2.0 L、(5∶5)2.0 L、乙酸乙酯3.0 L洗脫得到化合物1(116.6 mg)，2(8.1 mg)。F2(3.1 g)用硅膠柱層析分離，依次用正己烷-乙酸乙酯 (6∶4)1.5 L、(7∶3)1.5 L、乙酸乙酯2.0 L洗脫得到化合物3(16.1 mg)，4(12.6mg)，5(17.3mg)。F3(5.0 g)用硅膠柱層析分離，依次用正己烷-乙酸乙酯 (2∶8)2.5 L、乙酸乙酯3.0 L、乙酸乙酯-甲醇 (7∶3)2.5 L洗脫得化合物6(13.1 mg);F4(9.3 g)用硅膠柱層析分離，依次用正己烷-乙酸乙酯 (2∶8)3.0 L、乙酸乙酯3.0 L、乙酸乙酯-甲醇 (7∶3)3.5 L洗脫得化合物7(10.1 mg);F5(5.6 g)用硅膠柱層析分離，依次用乙酸乙酯2.0 L、乙酸乙酯-甲醇(9∶1)2.5 L、(7∶3)3.5 L洗脫得到5個(gè)部分(F5-1～F5-5)。F5-2(820.8 mg)用半制備 HPLC分離 ［GL Scirnces Inc．Inertsil PREP-ODSΦ 10 ×250 mm不銹鋼柱，流動(dòng)相為甲醇-水 (35∶65)，體積流量4.0 mL/min］，得化合物 8(34.7 mg，tR=15.21 min)，9(33.2 mg，tR=18.76 min)。F5-4(2.1 g)用硅膠柱層析分離，依次用乙酸乙酯(2.0 L)、乙酸乙酯-甲醇 (9∶1)2.0 L、乙酸乙酯-甲醇(7∶3)3.0 L洗脫得化合物10(14.2 mg)，11(13.3 mg)。F6(1.2 g)進(jìn)行硅膠柱層析分離，用乙酸乙酯-甲醇 (7∶3)3.5 L洗脫得化合物12(14.4 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色粉末狀晶體 (EtOAc)，mp 158.5 ～ 160.8 ℃。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:19.11(1H，s，H-OH)，19.06(1H，s，H-OH)，5.95(1H，s，H-5)，3.83(3H，s，-OCH3)，3.06(2H，t，J=7.2 Hz，H-8)，2.01(3H，s，3-CH3)，1.73(2H，m，H-9)，0.98(3H，t，J=7.2 Hz，H-10);13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ:206.2(C-7)，163.1(C-6)，161.2(C-4)，159.4(C-2)，104.8(C-3)，91.6(C-5)，85.8(C-1)，55.6(COCH3)，46.1(C-8)，18.3(C-9)，14.1(3-CH3)，7.2(C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［1］報(bào)道一致，故鑒定該化合物為綿馬酚。

化合物2:黃綠色顆粒 (EtOAc)，mp 217.5～219.0 ℃。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.06(1H，br s，-COOH)，9.49(1H，br s，-OH)，9.10(1H，br s，-OH)，7.41(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，7.03(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.97(1H，dd，J=8.1，2.0 Hz，H-6)，6.76(1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.18(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)。13CNMR(100 MHz，CD3COCD3)δ:168.5(C-9)，148.8(C-4)，146.3(C-3)，146.1(C-7)，127.6(C-1)，122.6(C-2)，116.4(C-8)，115.7(C-5)，115.1(C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［2］報(bào)道一致，確定為咖啡酸。

化合物3:黃色粉末 (MeOH)，mp 311.1～312.3℃;Mg-HCl反應(yīng)陽(yáng)性，Molish反應(yīng)陽(yáng)性。1HNMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.45(1H，s，5-OH)，10.79(1H，s，3-OH)，9.61(1H，s，7-OH)，9.38(1H，s，3'-OH)，9.32(1H，s，4'-OH)，7.68(1H，s，H-2')，7.54(1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，6.89(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.41(1H，s，H-8)，6.19(1H，s，H-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］報(bào)道一致，鑒定為槲皮素。

化合物4:白色針狀結(jié)晶 ［石油醚-EtOAc(1∶1)］，mp 284.7 ～286.6 ℃。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:5.25(1H，t，J=3.6 Hz，H-12)，3.21(1H，dd，J=4.4，10.8 Hz，H-3)，2.18(1H，d，J=11.6 Hz，H-19)，1.08(3H，s，H-27)，0.98(3H，s，H-25)，0.95(3H，d，J=6.4 Hz，H-29)，0.91(3H，s，H-26)，0.85(3H，d，J=6.9 Hz，H-30)，0.79(3H，s，H-23)，0.77(3H，s，H-24)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ:38.9(C-1)，27.4(C-2)，78.9(C-3)，38.8(C-4)，55.3(C-5)，18.4(C-6)，33.3(C-7)，38.9(C-8)，47.6(C-9)，37.0(C-10)，17.1(C-11)，125.2(C-12)，139.0(C-13)，42.3(C-14)，28.3(C-15)，24.3(C-16)，48.0(C-17)，53.0(C-18)，39.1(C-19)，39.0(C-20)，30.7(C-21)，36.9(C-22)，28.2(C-23)，15.6(C-24)，15.5(C-25)，17.2(C-26)，23.6(C-27)，182.4(C-28)，23.7(C-29)，21.2(C-30)．該結(jié)果與文獻(xiàn)［4］報(bào)道一致，鑒定為烏蘇酸。

化合物5:黃色針晶 (MeOH)，mp 271.4～272.9℃，Mg-HCl反應(yīng)陽(yáng)性，Molish反應(yīng)陽(yáng)性，UV λmax(MeOH)nm:250，365。IR(KBr)cm－1:3 400，1 660，1 600，1 510，1 360。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.45(1H，s，5-OH)，10.88(1H，s，7-OH)，10.11(1H，s，3-OH)，9.37(1H，s，4'-OH)，8.02(2H，d，J=8.7 Hz，H-2'，6')，6.91(2H，d，J=8.7 Hz，H-3'，5')，6.42(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.17(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:177.3(C-4)，165.3(C-7)，161.9(C-9)，160.7(C-4')，157.6(C-5)，147.6(C-2)，136.8(C-3)，130.5(C-2'，C-6')，123.6(C-1')，116.5(C-3'，C-5')，105.0(C-10)，98.9(C-6)，94.0(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道一致，鑒定為山柰酚。

化合物6:白色針晶 (MeOH)，mp 237.2～238.7℃。FeCl3反應(yīng)陽(yáng)性，表明有酚羥基存在。1HNMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:7.11(2H，s，H-2，6)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:170.4(CCOOH)，146.6(C-3，5)，139.6(C-4)，122.1(C-1)，110.2(C-2，6)。該結(jié)果與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致，鑒定為沒(méi)食子酸。

化合物7:無(wú)色透明不定形體，1H-NMR(400 MHZ，CDCI3)δ:7.02(1H，d，J=15.6 Hz，H-8)，6.29(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，3.90(1H，m，H-3)，2.36(1H，dd，J=12.0，5.2 Hz，H-4)，2.24(3H，s，H-10)，1.63(2H，m，H-2，H-4)，1.26(1H，m，H-2)，1.19(6H，s，H-11，H-12)，1.02(3H，s，H-13)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ:196.0(C-9)，142.9(C-7)，132.9(C-8)，70.9(C-3)，69.6(C-6)，66.8(C-5)，44.3(C-2)，37.3(C-4)，34.9(C-1)，28.5(C-10)，26.9(C-11)，24.9(C-12)，19.6(C-13)．以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道一致，鑒定為 3-羥基-5，6-環(huán)氧-β-紫羅蘭酮。

化合物 8:黃色針晶 (MeOH)，mp 192～193℃，Mg-HCl反應(yīng)陽(yáng)性，Molish反應(yīng)陽(yáng)性，UV λmax(MeOH)nm:366，353。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.61(1H，s，5-OH)，8.07(2H，d，J=8.7 Hz，H-2'，6')，6.89(2H，d，J=8.7 Hz，H-3'，5')，6.43(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.34(1H，d，J=7.2 Hz，Glc-1)，3.05 ～3.40(6H，m，Glc)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:177.4(C-4)，163.1(C-7)，161.2(C-5)，159.9(C-4')，156.3(C-9)，156.2(C-2)，133.2(C-3)，130.8(C-2'，6')，115.0(C-3'，5')，120.9(C-1')，103.9(C-10)，100.9(C-1″)，98.7(C-6)，93.6(C-8)，77.4(C-5″)，76.4(C-3″)，74.2(C-2″)，69.9(C-4″)，60.8(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道一致，鑒定為山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9:橘黃色粉末 (MeOH)，mp 214～216℃，Mg-HCl反應(yīng)陽(yáng)性，Molish反應(yīng)陽(yáng)性。1HNMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.61(1H，s，5-OH)，8.02(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.87(2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.82(1H，s，H-8)，6.40(1H，s，H-6)，5.45(1H，d，J=7.6 Hz，H-Glc1″)，3.05 ～ 3.40(6H，m，Glc)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:162.9(C-7)，160.5(C-5)，159.4(C-4)，156.0(C-9)，147.9(C-2)，136.3(C-3)，129.6(C-2'，6')，121.7(C-1')，115.0(C-3'，5')，105.5(C-1″)，105.1(C-10)，99.2(C-6)，94.8(C-8)，77.3(C-5″)，76.7(C-3″)，73.4(C-2″)，70.1(C-4″)，61.2(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道一致，鑒定為山柰酚-7-β-D-葡萄糖苷。

化合物10:黃色粉末 (MeOH)，mp 240～242 ℃，IR(KBr)cm－1:3 360，1 662，1 608，1 497，1 364，1 301，1 200。UV λmax(MeOH)nm:258，358。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.60(1H，s，5-OH)，7.66(1H，dd，J=8.4 Hz，2.0 Hz，H-6')，7.51(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，6.84(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.26(1H，d，J=6.0 Hz，H-1″)，3.14～3.70(6H，m，Glc)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:177.4(C-4)，164.1(C-7)，161.2(C-5)，156.3(C-2)，156.2(C-9)，148.5(C-4')，144.8(C-3')，133.3(C-3)，121.6(C-1')，121.2(C-6')，116.2(C-5')，115.2(C-2')，103.9(C-10)，100.8(C-1″)，98.6(C-6)，93.5(C-8)，77.6(C-5″)，76.5(C-3″)，74.1(C-2″)，69.9(C-4″)，61.0(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，鑒定為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物11:黃色顆粒狀粉末(MeOH)，mp 245～247℃，Mg-HCl反應(yīng)陽(yáng)性，Molish反應(yīng)陽(yáng)性，IR(KBr)cm－1:3 407，2 928，1 708，1 655，1 601，1 512，1 416，1 366，1 267，1 204。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.60(1H，s，5-OH)，7.57(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.57(1H，dd，J=8.8，2.0 Hz，H-6')，6.83(1H，d，J=8.8 Hz，H-5')，6.38(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.17(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.44(1H，d，J=7.6 Hz，Glc-1″)，3.05～3.60(6H，m，Glc)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:176.3(C-4)，163.3(C-7)，160.9(C-5)，156.9(C-9)，147.8(C-2)，147.6(C-3')，145.1(C-4')，136.2(C-3)，122.8(C-1')，120.7(C-6')，116.6(C-2')，114.5(C-5')，105.1(C-10)，100.5(C-1″)，99.0(C-6)，94.3(C-8)，77.2(C-5″)，76.5(C-3″)，73.6(C-2″)，69.7(C-4″)，61.3(C-6″)．以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道一致，鑒定為槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物12:白色粉末 (MeOH)，mp 205～206 ℃;UV λmax(MeOH)nm:327，300，235，216。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:8.29(2H，s，Ar-OH)，7.39(1H，d，J=16.0 Hz，H-3')，7.04(1H，d，J=1.7，H-2″)，7.01(1H，dd，J=8.1，1.7 Hz，H-6″)，6.78(1H，d，J=8.1 Hz，H-5″)，6.15(1H，d，J=16.0 Hz，H-2')，5.05(3H，m，-OH)，3.83(1H，m，H-3)，3.60(2H，m，H-4，H-5)，2.15 ～1.76(4H，m，H-2，H-6)。13CNMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:178.0(C-7)，168.8(C-1')，147.9(C-4″)，145.6(C-3')，144.9(C-3″)，126.3(C-1″)，122.8(C-6″)，116.6(C-5″)，115.8(C-2')，114.0(C-2″)，76.5(C-1)，71.2(C-5)，70.6(C-4)，70.4(C-3)，38.5(C-2)，37.9(C-6)．以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，鑒定為綠原酸。

［1］Ito H，Muranaka T，Mori K，et al．Ichthyotoxic phloroglucinol derivatives from Dryopteris fragrans and their anti-tumor promoting activity ［J］． Chem Pharm Bull，2000，48(8):1190-1195．

［2］徐麗萍，劉建生，敏 德，等．金龍膽草的化學(xué)成分研究［J］．中國(guó)中藥雜志，1998，23(5):293-295．

［3］葉 冠，范明松，黃成鋼．芨芨草中的黃酮類(lèi)化學(xué)成分的分離與鑒定 ［J］．中草藥，2006，37(6):821-823．

［4］舒任庚，劉玉鳳，陳 杰，等．青錢(qián)柳植物中三萜成分的研究 ［J］．中藥材，2005，28(7):558-559．

［5］姚佳琪，孟 娜，宋少江．馬齒莧的化學(xué)成分［J］．沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，24(12):751-753，757．

［6］林 佳，李 琰，徐麗珍．石榴葉的化學(xué)成分研究［J］．中南藥學(xué)，2005，3(2):720-721．

［7］Masashi K，Takayuki H，Yuji S，et al．3-hydroxy-5，6-epoxyβ-ionone as germination inhibitory active constituent in Athyrium yokoscense ［J］．Nat Prod Lett，1998，12(1):35-38．

［8］李 寧，李 銑，楊世林，等．過(guò)山蕨總黃酮的化學(xué)成分研究(Ⅰ)［J］．沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，21(2):105-107．

［9］宋純清．番紅花化學(xué)成分研究Ⅱ:番紅花花被中的黃酮醇類(lèi)化合物 ［J］．中草藥，1990，21(10):439-441．

［10］李 敏，高慧媛，孫博航．茶葉正丁醇萃取物化學(xué)成分的分離與鑒定 ［J］．沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，25(10):785-789．

［11］蔣海強(qiáng)，王建平，劉玉紅．鬼針草化學(xué)成分的分離和鑒定［J］．食品與藥品，2008，10(9):15-17．

［12］陳國(guó)良，李新莉，石凌剛，等．煙管薊地上部分化學(xué)成分研究 ［J］．中藥材，2007，30(3):291-294．