氣相色譜法測(cè)定香茅揮發(fā)油中檸檬醛

王 勇， 胡雄飛， 賴偉勇

(海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南海口571101)

香茅為禾本科香茅屬植物香茅Cymbopogon citratus(DC．)Stapf的干燥全草，又名檸檬草、檸檬香茅。主要分布于福建、臺(tái)灣、廣東、海南、廣西、湖南、四川、貴州、云南等省區(qū)。具有祛風(fēng)通絡(luò)、溫中止痛、止瀉的功效，臨床上常用于治療感冒頭身疼痛、風(fēng)寒濕痹、脘腹冷痛、泄瀉、跌打損傷，瘀血腫痛、月經(jīng)不調(diào)，產(chǎn)后水腫、食欲不佳等。香茅中的主要成分為揮發(fā)油和黃酮類化合物，其中揮發(fā)油中主要成分為檸檬醛 (香葉醛和橙花醛)、月桂烯和香葉醇等［1］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明香茅具有抑菌［2］、抗瘧［3］、抗 HIV［4］、抗抑郁［5］、免疫調(diào)節(jié)和腫瘤抑制等多種活性［6］。香茅精油的主要成分為檸檬醛，不僅適用于調(diào)配食用香精，同時(shí)還是合成紫羅蘭酮、甲基紫羅蘭酮的重要原料。目前對(duì)香茅揮發(fā)油的研究多集中于化學(xué)成分的GCMS 鑒別［7-8］、指紋圖譜［9］及香葉醇［10］的定量測(cè)定方面。但尚未見(jiàn)對(duì)其中主要成分檸檬醛進(jìn)行測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究采用氣相色譜法，以環(huán)己酮為內(nèi)標(biāo)物，對(duì)香茅揮發(fā)油中的檸檬醛定量測(cè)定，以期為香茅藥材的質(zhì)量控制方法提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

島津GC-14C毛細(xì)管氣相色譜儀，2010色譜數(shù)據(jù)工作站，氫火焰離子化檢測(cè)器 (FID)，島津AUW220D電子分析天平。檸檬醛對(duì)照品 (東京化成工業(yè)株式會(huì)社，批號(hào)U5DMK，純度＞98%)，環(huán)己酮 (廣州化學(xué)試劑廠，純度＞99.5%)，無(wú)水乙醇 (分析純，廣州化學(xué)試劑廠)，無(wú)水硫酸鈉 (分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)。香茅藥材共8批，經(jīng)海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥鑒定學(xué)教研室曾念開(kāi)博士鑒定為禾本科香茅屬植物香茅 Cymbopogon citratus(DC．)Stapf的干燥全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品貯備液的制備 精密稱取檸檬醛對(duì)照品適量，置10 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為25.342 mg/mL的對(duì)照品貯備液。

2.1.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取環(huán)己酮內(nèi)標(biāo)物適量，置25 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為10.368 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取低溫烘干香茅藥材，切成長(zhǎng)約2 cm的小段，取約10 g，精密稱定，置500 mL圓底燒瓶中，加入200 mL蒸餾水，按《中國(guó)藥典》2010年版(一部)附錄ⅩD甲法提取各樣品揮發(fā)油［11］，加適量無(wú)水硫酸鈉脫水，振搖，靜置，過(guò)夜，得淡黃色揮發(fā)油0.10～0.12 mL(收率1.0% ～1.2%)，加適量無(wú)水乙醇分次轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，定容，精密吸取1.0 mL，置10 mL量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為SE-54石英毛細(xì)管柱(0.25 mm×30 m，0 25μm);氫火焰離子化檢測(cè)器(FID);載氣為氮?dú)?進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為50∶1;進(jìn)樣量為1μL;進(jìn)樣口溫度為230℃;檢測(cè)器溫度為250℃;程序升溫，以50℃為起始溫度，先以5℃/min升至80℃后，再以3℃/min升至110℃，再以12℃/min升至230℃，保持4 min。在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)按香葉醛計(jì)算大于50 000，各峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。對(duì)照品和供試品氣相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品 (A)和供試品 (B)色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取檸檬醛對(duì)照品貯備液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 mL置10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，再加無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，得到各混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣1μL，在2.2項(xiàng)色譜條件下測(cè)定。以對(duì)照品檸檬醛質(zhì)量濃度 (mg/mL)為橫坐標(biāo) (X)，以對(duì)照品檸檬醛與內(nèi)標(biāo)物環(huán)己酮的峰面積的比值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.958 9X－0.097 7(r=0.999 9)，表明檸檬醛質(zhì)量濃度在0.506 84～10.136 8 mg/mL范圍內(nèi)，與內(nèi)標(biāo)峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液在2.2項(xiàng)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，以檸檬醛與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計(jì)算RSD為0.98%(n=6)。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批香茅藥材 (海南?？?0110830)6份，按2.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在2.2項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，計(jì)算檸檬醛的含有量，檸檬醛的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.95 mg/g，RSD為1.13%(n=6)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于配制后0、1、2、4、8、12、24 h分別進(jìn)樣，以檸檬醛和環(huán)己酮峰面積的比值計(jì)算RSD值為1.85%(n=7)。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 回收率試驗(yàn) 稱取已測(cè)定的同一批香茅藥材 (海南海口20110830)約5 g，共9份，按低、中、高質(zhì)量濃度分別加入檸檬醛對(duì)照品 (10.21 mg/mL)0.8、1.0、1.2 mL，每一質(zhì)量濃度各3份，按照2.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在2.2項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果低、中、高3個(gè)加入量的平均回收率 (n=9)為97.2%，RSD為1.81%。

2.8 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地、批次香茅藥材約10 g，精密稱定，按2.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在2.2項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)對(duì)比法計(jì)算香茅揮發(fā)油中檸檬醛的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 香茅揮發(fā)油中檸檬醛測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)以環(huán)己酮為內(nèi)標(biāo)物，采用氣相色譜法對(duì)水蒸氣蒸餾法提取的香茅揮發(fā)油中的檸檬醛進(jìn)行定量測(cè)定，建立的方法具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，可作為香茅揮發(fā)油成分質(zhì)量控制方法。

通過(guò)對(duì)8批香茅樣品測(cè)定的結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的香茅揮發(fā)油中的檸檬醛量存在一定差異，這些差異可能與香茅的氣候條件、生長(zhǎng)環(huán)境、采收季節(jié)、貯藏時(shí)間及干燥方式等有關(guān)。曾考察過(guò)陰干、低溫烘干及日光曝曬等干燥方式，發(fā)現(xiàn)陰干過(guò)程中香茅藥材含水量較高，干燥速度較慢，且易發(fā)生霉變，日光曝曬香茅揮發(fā)油損失較大，低溫烘干揮發(fā)油的提取率較高，因此采用低溫烘干的方式對(duì)藥材進(jìn)行干燥。另外由于香茅中檸檬醛具有較強(qiáng)的揮發(fā)性，粉碎后放置一段時(shí)間，揮發(fā)油的收率和檸檬醛的量均會(huì)急劇下降，因此本實(shí)驗(yàn)采取將低溫烘干后的香茅藥材冷凍保存，臨用前切成約2 cm的小段進(jìn)行提取。

［1］劉明生．黎藥學(xué)概論［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:113-114．

［2］楊森艷，姚 雷．檸檬草精油抗菌性研究［J］．上海交通大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)科學(xué)版，2005，23(4):374-376．

［3］Tchoumbougnang F，Amvamzollo PH，Dagne E，et al．In vivo antimalarial activity of essential oils from Cymbopogon citratus and Ocimum gratissimum on mice infected with Plasmodium berghei［J］．Planta Med，2005，71(1):20-23．

［4］Wright SC，Maree JE，SibanyoniM．Treatment of oral thrush in HIV/AIDS patientswith lemon juice and lemon grass(Cymbopogon citratus)and gentian violet［J］．Phytomedicine，2009，16(2):118-124．

［5］佟棽棽，姚 雷．迷迭香和檸檬草的精油以及活體香氣的抗抑郁作用的研究［J］．上海交通大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)科學(xué)版，2009，27(1):82-83．

［6］廉曉紅，李德山，竇玉琴，等．香茅草提取物的免疫調(diào)節(jié)作用與腫瘤抑制作用［J］．沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，22(4):295-300．

［7］董曉敏，劉布鳴，林 霄，等．廣西產(chǎn)香茅草揮發(fā)油的化學(xué)成分分析［J］．廣西科學(xué)，2009，16(3):302-304．

［8］陳集雙，彭崇勝，杜琪珍，等．香茅葉揮發(fā)油化學(xué)成分的分析［J］．中國(guó)藥學(xué)雜志，2000，35(7):462．

［9］劉布鳴，林 霄，董曉敏，等．香茅油的氣相色譜指紋圖譜研究［J］．廣西科學(xué)，2010，17(4):343-346．

［10］陳妙芬，馮靜儀，劉秋瓊，等．GC法測(cè)定香茅中香葉醇的含量［J］．中國(guó)藥房，2011，22(31):2950-2951．

［11］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典:2010年版一部［S］．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄ⅩD．