抗癆膠囊與抗癆丸中有效成分巖白菜素的測(cè)定

溫俊霞， 任艷平， 朱 紅， 張?zhí)m桐*

(1.河北省胸科醫(yī)院藥學(xué)部 河北 石家莊050041;2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥物分析教研室 河北 石家莊050017)

抗癆膠囊與抗癆丸主要功能為散瘀止血，祛痰止咳，是用于治療浸潤(rùn)性肺結(jié)核、肺虛久咳，痰中帶血的中成藥。這兩種藥物的主要成分均為矮地茶、百部、穿破石、五指毛桃、白及、桑白皮，其藥材組方比例也相同。但其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)均沿用部頒標(biāo)準(zhǔn) (抗癆膠囊為中藥成方制劑第三冊(cè)WS3-B-0555-91，抗癆丸為中藥成方制劑第七冊(cè)WS3-B-1336-93)，僅用化學(xué)鑒別法來做主要成分鑒別，質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)較為單一。

巖白菜素 (Bergenin)是抗癆膠囊與抗癆丸的主藥矮地茶的主要有效成分，屬于異香豆素類化合物，具有良好的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎、護(hù)肝、抗病毒和神經(jīng)保護(hù)作用，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床。矮地茶Japanese Ardisia Herb為紫金?？浦参锏母稍锶?，為抗癆膠囊與抗癆丸組方中的主藥。《中國藥典》(2010年版)對(duì)矮地茶中巖白菜素進(jìn)行定量測(cè)定，因此通過對(duì)抗癆膠囊及抗癆丸中有效成分巖白菜素進(jìn)行定性、定量測(cè)定，可在一定程度上探討這兩種制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，從而為提高其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

美國Agilent-1200高效液相色譜儀 (四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，在線脫氣機(jī)，柱溫箱);Agilent chem office色譜工作站;二極管陣列檢測(cè)器 (DAD);色譜柱為DiamonsilTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);KQ-100A型超聲清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司);LG16-W型離心機(jī) (北京醫(yī)用離心機(jī)廠);BP211D型十萬分之一天平 (德國Sartorius公司)。

巖白菜素對(duì)照品 (100315124-10473563)由上海同田生物技術(shù)有限公司提供;不同批次抗癆膠囊1(制藥有限公司1)與抗癆丸 (制藥有限公司2)均購于河北省胸科醫(yī)院，抗癆膠囊2(制藥有限公司3)購于石家莊康泰大藥房，詳見表1。甲醇、乙腈均為色譜純 (美國Tedia試劑公司)，水為二次重蒸水，其余試劑均為分析純。

表1 樣品批次及來源

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［1-13］DiamonsilTMC18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5μm);檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm;柱溫為30℃;以甲醇-水 (20∶80)為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫;體積流量1.0 mL/min;進(jìn)樣體積10μL。

2.2 溶液的制備［1-13］

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取巖白菜素對(duì)照品適量，用甲醇配制成質(zhì)量濃度為0.6 mg/mL的對(duì)照品溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 分別取抗癆膠囊、抗癆丸內(nèi)容物粉碎，過60篩，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，搖勻，精密稱定，超聲提取40 min，取出，放冷，再精密稱定，缺失的質(zhì)量用75%甲醇補(bǔ)足，搖勻，離心10 min(10 000 r/min)取上清液，即得。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取對(duì)照品貯備液0.625、1.25、2.5、5、10 mL，分別置50 mL量瓶中，進(jìn)樣并記錄峰面積，以各成分的峰面積對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度來進(jìn)行線性回歸分析，以巖白菜素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) (X)，相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo) (Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理得回歸方程為Y=14 378X+33.702(r=0.999 9)，結(jié)果表明，巖白菜素質(zhì)量濃度在7.823×10－3～0.625 8 mg/mL呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 按照2.1項(xiàng)下方法，在同一天內(nèi)對(duì)同一份樣品連續(xù)測(cè)定6次，所得數(shù)據(jù)經(jīng)分析后為日內(nèi)精密度;在連續(xù)3 d內(nèi)對(duì)同一份樣品進(jìn)行測(cè)定，所得數(shù)據(jù)經(jīng)分析后為日間精密度。結(jié)果表明巖白菜素的日內(nèi)、日間精密度RSD分別為0.42%和1.56%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、4、8、12、24 h取供試品溶液進(jìn)樣并測(cè)定峰面積。結(jié)果表明巖白菜素含有量的RSD均小于0.8%，表明該方法于24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 分別取已測(cè)定的抗癆膠囊1與抗癆丸3批，各取3份，按照標(biāo)準(zhǔn)加入法的要求，分別精密加入低、中、高3種不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按第2.2.2項(xiàng)下制備供試品溶液的方法來制備樣品溶液，注入HPLC分析，測(cè)定樣品溶液中巖白菜素的量，并計(jì)算平均回收率。結(jié)果表明:抗癆膠囊中巖白菜素的低、中、高3種不同質(zhì)量濃度的回收率范圍均在98.4% ～102.2%之間，RSD小于2%，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品測(cè)定 取1～7號(hào)樣品按照第2.2.2項(xiàng)下的方法制備樣品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算質(zhì)量分?jǐn)?shù)。樣品及巖白菜素對(duì)照品色譜圖見圖1。測(cè)得巖白菜素的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)結(jié)果見表3。

圖1 巖白菜素對(duì)照品 (A)、抗癆膠囊1(B)、抗癆丸 (C)、抗癆膠囊2(D)HPLC色譜圖

表3 樣品中巖白菜素測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 分別比較了甲醇-水、乙腈-水等不同的流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行梯度、等度洗脫試驗(yàn)，選擇分離系數(shù)好，時(shí)間盡可能短的最佳流動(dòng)相條件，最終確定甲醇-水 (20∶80)等度洗脫作為定量測(cè)定條件。

3.2 通過DAD檢測(cè)器，對(duì)主要色譜峰在200～400 nm之間進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，選擇出峰數(shù)較多，各組分都有較好吸收的波長(zhǎng)275 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 比較了不同溫度20℃、25℃、30℃、35℃對(duì)分離效果的影響，最終選擇30℃作為合適的柱溫。

3.4 分別考察了提取方式 (超聲和加熱回流)，提取時(shí)間(20 min、30 min、40 min、50 min和60 min)，提取溶劑(水、25%、50%、75%及100%甲醇)對(duì)不同色譜圖的影響，最終確定以75%甲醇超聲提取40 min作為最佳提取條件。

3.5 由結(jié)果看出，3種樣品中巖白菜素平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)有較大差別?？拱A膠囊2中巖白菜素質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，平均達(dá)到5.99 mg/g，而抗癆膠囊1與抗癆丸中巖白菜素的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.56 mg/g與1.72 mg/g，差異明顯，因而得知，在所測(cè)樣品中，抗癆膠囊2主要成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均較其他兩批制劑高。其可能的原因?yàn)椴煌瑥S家生產(chǎn)的制劑由于其制備工藝不同，所用原藥材產(chǎn)地、添加輔料及賦形劑不同，均有可能造成所生產(chǎn)的藥品在某一成分量上存在差別。

4 結(jié)論

通過HPLC法對(duì)不同廠家生產(chǎn)的抗癆膠囊與抗癆丸中的有效成分巖白菜素進(jìn)行了定量測(cè)定，并對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行了分析比較。表明所測(cè)樣品中抗癆膠囊2的巖白菜素量，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他兩批樣品。

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