嬰幼兒血管瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展

馬剛 綜述 林曉曦 審校

嬰幼兒血管瘤（Infantile hemangioma，IH）為最常見(jiàn)的兒童期良性腫瘤，發(fā)病率高達(dá)10%~12%，男女比例為1∶3~1∶5[1]。IH具有獨(dú)特的自然病史，多數(shù)患兒出生后8~12個(gè)月血管瘤持續(xù)增生，隨后的5~7年內(nèi)呈現(xiàn)自發(fā)地緩慢消退，20%~40%患兒出現(xiàn)殘余皮膚改變。傳統(tǒng)的糖皮質(zhì)激素治療沿用了40多年，療效的個(gè)體差異大，副作用多[2]。普奈洛爾（心得安）的使用，被認(rèn)為是IH治療的一次突破。該藥能迅速控制增生期IH的快速發(fā)展[3]，但藥物副作用尚未知曉。IH的發(fā)病機(jī)制仍未闡明，其標(biāo)志物也缺乏特異性，本文就此方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 組織學(xué)標(biāo)志物

1.1 血管生成相關(guān)標(biāo)志物

IH一直與血管生成（Angiogenesis）聯(lián)系在一起，因此促進(jìn)或抑制血管生成相關(guān)的標(biāo)志物研究較多[4]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）僅表達(dá)于增生期的IH內(nèi)皮細(xì)胞（HemEC）和周細(xì)胞，VEGFR1低表達(dá)，VEFGR2出現(xiàn)高表達(dá)[5]。增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）同樣表達(dá)于增生期的周細(xì)胞和部分HemEC核內(nèi)，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）在增生期HemEC中表達(dá)顯著升高。CD31和vWF在IH三期中均表達(dá)。金屬蛋白酶組織抑制物（TIMP）可抑制新生血管形成，僅在消退期IH周細(xì)胞胞漿內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)。E-selectin是內(nèi)皮細(xì)胞特異性白細(xì)胞黏附分子，在增生期IH中表達(dá)顯著增高，并與血管數(shù)量相關(guān)[6]，也被用于HemEC的分選。增生期IH組織和體外培養(yǎng)的HemEC中Tie2、ang1高表達(dá)，ang2低表達(dá)，提示ang/Tie通路調(diào)節(jié)IH的增生[7]。β4整合素在消退期IH中表達(dá)陽(yáng)性，可作為消退期的標(biāo)志物[8]。細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）在增生期IH表達(dá)增高，提示IH具有侵襲性，需積極地干預(yù)治療，并可能成為基因治療的靶點(diǎn)[9]。Notch信號(hào)通路也認(rèn)為與血管生成相關(guān)，周細(xì)胞 Notch3(+)，Notch1、Notch4 和 Jagged1 在消退期IH中表達(dá)增加，而且Notch基因表達(dá)的改變反映了IH從增生到消退逐漸成熟的過(guò)程[10]。

1.2 胎盤(pán)相關(guān)標(biāo)志物

2000年，North等[11]首次提出葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（GLUT1）在三期IH中陽(yáng)性表達(dá)，而在其他血管性腫瘤和脈管畸形中不表達(dá)，隨后的研究進(jìn)一步證實(shí)GLUT1可作為IH特異性標(biāo)志物[12]。免疫組化發(fā)現(xiàn)，在IH組織中還表達(dá)其他一些胎盤(pán)相關(guān)的血管性標(biāo)志物， 包括 Lewis Y、CD32、FcγRI、merosin 等[13]，而在體外培養(yǎng)的HemEC中幾乎不表達(dá)。提示IH前體細(xì)胞可能來(lái)源于胎盤(pán)或向胎盤(pán)血管表型分化的成血管細(xì)胞。胎盤(pán)生長(zhǎng)因子（PIGF）能夠預(yù)示實(shí)體腫瘤的自發(fā)消退，在消退期IH中表達(dá)陽(yáng)性，而且能夠負(fù)性調(diào)節(jié)VEGF-A，功能性中斷內(nèi)皮的增殖，促進(jìn)IH的消退過(guò)程[14]。

1.3 凋亡相關(guān)標(biāo)志物

IH為何在12～24個(gè)月時(shí)開(kāi)始消退，最直接的原因可能與細(xì)胞凋亡相關(guān)，使用TUNEL法檢測(cè)顯示IH消退過(guò)程中凋亡較增生期和消退后期增加5倍，而且1/3的凋亡細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞[15]。 Clusterin/apolipoprotein J（clust/apoJ）作為凋亡細(xì)胞最顯著的標(biāo)志物，在增生期IH中表達(dá)陰性，一旦進(jìn)入消退期，即在IH內(nèi)皮上顯著陽(yáng)性表達(dá)[16]。細(xì)胞分裂的核抗原Ki67在增生期HemEC中表達(dá)陽(yáng)性，消退期表達(dá)急劇下降，提示1歲以后，凋亡逐漸抵消細(xì)胞增殖，并啟動(dòng)IH的消退。胰島素樣生長(zhǎng)因子2（IGF2）是已知的促有絲分裂劑和凋亡抑制劑，還是VEGF和GLUT-1的上游調(diào)節(jié)因子。DAN表達(dá)芯片發(fā)現(xiàn)IGF-2在IH增生期中高表達(dá)，消退期顯著下降。而且IGF-2作為一個(gè)缺氧誘導(dǎo)基因，通過(guò)低氧水平驅(qū)動(dòng)，在IH增生中發(fā)揮作用[17]。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)增生期IH中IGF2表達(dá)于血管周?chē)烷g質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，很少的內(nèi)皮細(xì)胞共表達(dá)CD31和IGF2，消退期IH中間質(zhì)細(xì)胞的IGF2表達(dá)急劇下降[18]。

1.4 缺氧相關(guān)標(biāo)志物

缺氧是新生血管形成的一種強(qiáng)有力的刺激，通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子HIF-1α發(fā)揮作用，HIF-1α活性增加，能夠促進(jìn)其下游缺氧應(yīng)答基因比如VEGF和間質(zhì)衍生因子（SDF-1α）的表達(dá)。增生期IH表現(xiàn)為顯著的缺氧，HIF-1α表達(dá)增加，其下游靶標(biāo)VEGF和SDF-1α表達(dá)也相應(yīng)增加，而在消退期IH中HIF-1α表達(dá)不增加[19]。陳達(dá)等[20]發(fā)現(xiàn)，增生期IH中HIF-1α表達(dá)與VEGF和血管新生數(shù)量成正相關(guān)。提示IH增生期存在著特殊的缺氧微環(huán)境，并通過(guò)HIF-1α表達(dá)水平升高調(diào)節(jié)VEGF等血管生成相關(guān)因子表達(dá)水平升高，促進(jìn)了新生微血管的生成。Giatromanolaki等[21]也發(fā)現(xiàn)HemEC中HIF-2α、VEGF、TP表達(dá)陽(yáng)性，提示HIF-2α/VEGF通路活化也可能對(duì)IH生成起重要作用。

1.5 炎癥相關(guān)標(biāo)志物

同種異體移植炎癥因子－1（Allograft inflammatory factor-1，AIF-1）在三期IH內(nèi)皮細(xì)胞中均強(qiáng)表達(dá)，可作為IH的又一標(biāo)志物[22]。IH內(nèi)聚集CD8(+)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，可能通過(guò)釋放細(xì)胞因子促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。增生期高水平的吲哚胺-2,3-雙加氧酶使色氨酸降解增加，抑制T細(xì)胞功能，使IH逃脫免疫監(jiān)視[23]，免疫組化還發(fā)現(xiàn)HemEC表達(dá)血管細(xì)胞黏附分子－1（VCAM-1）和細(xì)胞間黏附分子－1（ICAM-1），可促進(jìn)白細(xì)胞的聚集。

1.6 淋巴內(nèi)皮相關(guān)標(biāo)志物

淋巴內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體-1（LYVE-1）是和腫瘤相關(guān)的淋巴管特異性標(biāo)志物。研究發(fā)現(xiàn)，在增生期IH中，CD31(+)和CD34(+)的內(nèi)皮細(xì)胞均高表達(dá)LYVE-1，而另一淋巴管內(nèi)皮特異性標(biāo)志物Prox-1，在增生期和消退期IH中LYVE-1、CD31和CD34三者均陽(yáng)性的內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)均為陰性，提示HemEC為不成熟的免疫表型，與胚胎發(fā)育過(guò)程中具有淋巴分化潛能的主靜脈內(nèi)皮非常相似，停滯在血管分化的早期階段，其內(nèi)在的缺陷導(dǎo)致出生后的快速增生[24]。Nguyen等[25]研究發(fā)現(xiàn)，淋巴管內(nèi)皮特異性標(biāo)志物L(fēng)YVE-1、Prox-1、podoplanin和D2-40在增生期和消退期IH的血管內(nèi)皮上均不表達(dá)，僅血管周?chē)哂袠?shù)突樣細(xì)胞形態(tài)的HLA-DR(+)細(xì)胞表達(dá)LYVE-1，且LYVE-1的表達(dá)與IH的增生和消退無(wú)關(guān)，否定了之前的研究結(jié)果，認(rèn)為IH的血管不具有淋巴管的特性。

1.7 血管原細(xì)胞（Haemangioblasts）標(biāo)志物

血管原細(xì)胞是造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，在CD34(+)和 GLUT-1(+)的 HemEC 上 ，VEGFR-2 和 CD133 表達(dá)陽(yáng)性，確認(rèn)了EPC的表型，繼而發(fā)現(xiàn)原始中胚層標(biāo)志物brachyury、ACE也為陽(yáng)性表達(dá)，提示EPC來(lái)源于血管原細(xì)胞，最終TAL-1、GATA-2也為陽(yáng)性表達(dá)，確立了 CD34(+)的內(nèi)皮為原始造血原內(nèi)皮，具有向造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分化的雙向潛能[26]。Itinteang等[27]研究發(fā)現(xiàn)，增生期CD34(+)的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)紅細(xì)胞生成素受體（EPO-R），該EPO-R(+)細(xì)胞同時(shí)表達(dá)胚胎原性血紅蛋白 ζ（haemoglobin ζ，HBZ），IH 體外組織塊培養(yǎng)能生成無(wú)核紅細(xì)胞，進(jìn)一步證明IH微血管是具有功能的血管原性內(nèi)皮，具有原始紅細(xì)胞生成的潛能。

1.8 內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitorcells，EPCs）標(biāo)志物

增生期IH含有大量不成熟的內(nèi)皮細(xì)胞，推測(cè)其可能來(lái)源于循環(huán)EPC的聚集，實(shí)驗(yàn)證實(shí)IH患者外周血CD34(+)、AC133(+)EPC是正?；颊叩?5倍，體外培養(yǎng)的EPC能表達(dá)IH標(biāo)志物GLUT1、CD32和merosin[28]。組織學(xué)研究證實(shí)，在增生期IH組織中存在CD34(+)、AC133(+)EPC[29]。IH來(lái)源的EPC （hemEPC）、hemEC和臍血來(lái)源的EPC在內(nèi)皮抑素刺激后黏附、遷移和增殖能力增加，而且hemEPC反應(yīng)持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間[30]。增生期hemEC上表達(dá)CD14、CD83，提示hemEC可能來(lái)源于髓樣細(xì)胞[31]。

1.9 干細(xì)胞標(biāo)志物

Yu等[32]發(fā)現(xiàn)，在IH增生期成脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）數(shù)量顯著高于消退期和正常皮膚，能夠表達(dá)CD105、SH3、SH4、CD90、CD29、αSMA、CD133，不表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)志物CD45和CD14，也不表達(dá)內(nèi)皮標(biāo)志物CD34、CD31和KDR。IH來(lái)源的MSCs具有強(qiáng)大的脂肪形成潛能。提示可以誘導(dǎo)MSCs加速分化為脂肪細(xì)胞，促進(jìn)IH的提前消退。節(jié)段性IH伴發(fā)PHACES綜合征，提示神經(jīng)嵴細(xì)胞參與IH的發(fā)病機(jī)制，免疫組化發(fā)現(xiàn)，增生期IH內(nèi)皮表達(dá)神經(jīng)嵴細(xì)胞特異標(biāo)志物神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體、原始中胚層細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子brachyury、造血干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、內(nèi)皮造血干細(xì)胞/祖細(xì)胞標(biāo)志物CD34、內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31和VEGFR-2、間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物CD29和波形蛋白（Vimentin）以及神經(jīng)嵴細(xì)胞前體的特異標(biāo)志物Sox9和Sox10。同時(shí)組織塊體外培養(yǎng)分離的hemEC也同樣表達(dá)上述標(biāo)志物。這些結(jié)果提示IH可能來(lái)源于具有神經(jīng)嵴細(xì)胞表型的原始中胚層細(xì)胞[33]。在增生期IH中，這類(lèi)同時(shí)表達(dá)神經(jīng)嵴細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物內(nèi)皮的原始細(xì)胞也表達(dá)前脂肪細(xì)胞因子－1（Pref-1），該因子是表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白，是阻止終末脂肪生成的關(guān)鍵因子，抑制脂肪細(xì)胞的分化，在增生期所有CD34(+)陽(yáng)性的內(nèi)皮上強(qiáng)表達(dá)，在消退期和正常皮膚上極少表達(dá)，在消退完成期成熟內(nèi)皮上不表達(dá)。從IH組織塊出芽獲取的細(xì)胞能夠體外誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞和誘導(dǎo)成骨[34]。

1.10 周細(xì)胞（Pericytes）標(biāo)志物

周細(xì)胞又稱為壁細(xì)胞，圍繞在IH新生血管周?chē)?，免疫組化顯示在增生期IH血管周?chē)?xì)胞主要表達(dá)周細(xì)胞標(biāo)志物nerve/glial antigen-2（NG2），同時(shí)也表達(dá) α-SMA 和 CD146[35]，免疫雙染組織定位顯示周細(xì)胞共表達(dá)PDGFR-β/α-SMA、CD133/α-SMA 和 PPAR-γ/α-SMA。 周細(xì)胞也表現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）的特性，具有成骨、成軟骨和成脂肪的潛能。因此周細(xì)胞也具有多向分化潛能，尤其是脂肪生成，是消退完成期脂肪細(xì)胞的來(lái)源之一。壁細(xì)胞的聚集對(duì)保持血管結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定至關(guān)重要，免疫組化發(fā)現(xiàn)增生期和消退期IH內(nèi)皮周?chē)奂罅喀罶MA(+)細(xì)胞，而先天性快速消退型IH（RICH）中缺乏αSMA(+)壁細(xì)胞，血管結(jié)構(gòu)的不成熟導(dǎo)致RICH更加早期和快速的消退[15]。

1.11 肥大細(xì)胞標(biāo)志物

肥大細(xì)胞來(lái)源于造血干細(xì)胞，早在1982年Glowacki和Mulliken使用Safranin O染色計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)增生期IH肥大細(xì)胞數(shù)量顯著高于消退期IH、血管畸形和正常皮膚[36]。Ki67染色顯示消退期肥大細(xì)胞持續(xù)增生，PCNA染色顯示IH增生期增生的肥大細(xì)胞比例最高，消退完成期最低。增生期肥大細(xì)胞內(nèi)表達(dá)FGF和Ⅷ型膠原，提示增生期肥大細(xì)胞合成活躍，參與細(xì)胞增殖。在激素治療后，肥大細(xì)胞數(shù)量增加4倍，此時(shí)肥大細(xì)胞生成凋亡相關(guān)蛋白clust/apoJ及其他因子，比如IFN-α、IFN-β、IFN-γ和TGF-β等，這些因子同樣在消退期生成增加，從而抑制血管生成[37]。因此，肥大細(xì)胞在IH增生和消退過(guò)程中發(fā)揮雙重作用。

1.12 細(xì)胞外標(biāo)志物

基底膜是毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)完整性的基本要素，其中層黏連蛋白（Laminins）是主要的膜蛋白，含有 α、β、γ 三條鏈，β2 是血管基底膜特有的，IH三期組織中均表達(dá)α1、β2、γ1，顯示IH整個(gè)發(fā)展過(guò)程中血管的同源性，同時(shí)也表達(dá)基底膜特異性的基底膜聚糖（Perlecan）和IV型膠原，提示IH基底膜與正常血管基底膜的成分相同，IH中含有多層基底膜可能是細(xì)胞增殖和死亡的結(jié)果。Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型膠原在三期IH中均表達(dá)，而且越晚期的IH中表達(dá)量越高，也與臨床上IH消退過(guò)程中細(xì)胞成分減少和纖維組織增加的特性相關(guān)。Ⅷ型膠原能促進(jìn)血管生成中內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、平滑肌細(xì)胞的侵入和成纖維細(xì)胞的纖維化，在IH三期中均表達(dá)，而且在增生期表達(dá)于肥大細(xì)胞內(nèi)，由其主動(dòng)合成，在消退過(guò)程中逐漸沉積增加[38]。

1.13 其他

CD146是一種跨膜糖蛋白，是正常血管內(nèi)皮的一種標(biāo)志物，而在hemEC表面不表達(dá)，而且熒光雙染顯示增生期和消退期IH內(nèi)皮表達(dá)CD31和UEA1，周細(xì)胞表達(dá)CD146，與前兩者不重疊，并且體外分離培養(yǎng)HemEC不表達(dá)CD146，真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá) CD146。因此，CD146可用于鑒別HemEC和正常內(nèi)皮細(xì)胞[39]。Wilms tumor 1（WT1）在人內(nèi)皮細(xì)胞中能夠被Ang2刺激后表達(dá)增加，Dhaybi等[40]在126例大樣本研究中證實(shí)，WT1在血管性腫瘤的內(nèi)皮細(xì)胞漿中表達(dá)陽(yáng)性，而在血管畸形中表達(dá)陰性。Trindade等[41]在117例血管性腫瘤（包括 IH、NICH、RICH、TA、PG 和梭形細(xì)胞 IH）和 50例脈管畸形（包括淋巴管畸形、毛細(xì)血管畸形、靜脈畸形、Ⅱ期動(dòng)靜脈畸形）標(biāo)本中研究WT1的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有血管性腫瘤中WT1表達(dá)均陽(yáng)性，脈管畸形中除AVM表達(dá)陽(yáng)性外，其余均為陰性。Mansuet-Lupo1等[42]報(bào)道，在正常皮膚和脈管畸形組織的毛細(xì)血管小動(dòng)脈和動(dòng)脈強(qiáng)表達(dá)WT1，在靜脈中局部弱表達(dá)，在淋巴管畸形中不表達(dá)，在血管性腫瘤中，NICH、TA、血管肉瘤中表達(dá)陽(yáng)性，而在增生期IH和胎盤(pán)絨毛內(nèi)皮細(xì)胞上不表達(dá)，提示W(wǎng)T1在脈管畸形和正常皮膚內(nèi)皮的表達(dá)取決于血管類(lèi)型。因此，WT1作為血管性腫瘤和脈管畸形臨床鑒別指標(biāo)的意義有待進(jìn)一步確認(rèn)。

2 體液標(biāo)志物

盡管IH的組織學(xué)標(biāo)志物研究頗多，但需要通過(guò)活檢或手術(shù)切取的方法來(lái)獲得組織標(biāo)本，對(duì)于臨床上如何確定IH處于增生期或進(jìn)入消退期，臨床是否需要藥物治療以及療效評(píng)價(jià)，不可能通過(guò)反復(fù)的手術(shù)取材的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)，因此體液檢測(cè)無(wú)疑是一種方便、快捷、無(wú)組織損傷的方法。該方法的研究目前主要聚焦在血清學(xué)和尿液方面。

2.1 血清標(biāo)志物

2.1.1 雌激素

流行病學(xué)顯示IH好發(fā)于女?huà)?。IH的嬰幼兒血清中雌二醇－17β水平異常升高，高于對(duì)照組和血管畸形（VM和PWS）患兒的4倍[43]。Yang等[44]使用放射免疫法測(cè)定血清雌二醇（E2）水平，結(jié)果顯示IH患者E2水平顯著高于脈管畸形和正常對(duì)照組，而脈管畸形和正常對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；增生期IH患者E2水平也高于消退期，女?huà)牖純焊哂谀袐耄珶o(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而且雌激素受體存在于IH細(xì)胞內(nèi)，增生期IH雌激素受體結(jié)合位點(diǎn)增加，雌激素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的刺激作用增強(qiáng)，IH快速增生。

2.1.2 細(xì)胞因子

Zhang等[45]使用Elisa法檢測(cè)增生期和消退期IH、血管畸形（毛細(xì)血管畸形和靜脈畸形）、健康對(duì)照組患兒血清VEGF的水平，發(fā)現(xiàn)僅增生期IH患兒血清VEGF水平顯著高于消退期IH、血管畸形和對(duì)照組患兒，而后三組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；另外，還發(fā)現(xiàn)增生期IH患兒激素治療后血清VEGF水平顯著降低。該研究初步確立了IH增殖與血清VEGF濃度的伴隨現(xiàn)象，為IH的臨床鑒別診斷和治療監(jiān)控提供了簡(jiǎn)易的方法，已被國(guó)際血管性疾病協(xié)會(huì)（ISSVA）發(fā)布的血管性疾病分類(lèi)文件所引用。Przewratil等[46]檢測(cè)外周血和IH病灶來(lái)源的血液血清VEGF濃度，發(fā)現(xiàn)增生期IH患者外周血VEGF濃度顯著高于消退期IH、血管畸形和正常兒童對(duì)照組，VEGF濃度與IH病灶大小和患者年齡無(wú)相關(guān)性；而無(wú)論是增生期還是消退期，IH患者病灶局部血液VEGF濃度均顯著低于外周血的VEGF濃度。該結(jié)果一方面證實(shí)了血清VEGF可用于鑒別IH和血管畸形，另一方面IH局部病灶VEGF濃度的意外降低則提示了IH內(nèi)皮細(xì)胞增生的內(nèi)在理論，局部VEGF與IH內(nèi)皮細(xì)胞VEGFR結(jié)合，導(dǎo)致局部濃度降低可能。Przewratil等[47]進(jìn)一步檢測(cè)IH血清VEGF和VEGFR的濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)sVEGFR1輕微降低，提示可能與VEGFR1和VEGFR2失調(diào)有關(guān)，sVEGFR2無(wú)顯著改變，目前sVEGFRs還不能作為IH的診斷工具。

Yang等[44]使用Elisa法檢測(cè)血清bFGF，發(fā)現(xiàn)IH和脈管畸形患者血清bFGF水平顯著高于正常對(duì)照組，而IH和脈管畸形之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，增生期和消退期IH患者之間也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Przewratil等[48]檢測(cè)外周血和IH病灶來(lái)源的血清bFGF濃度，發(fā)現(xiàn)增生期IH患者外周血bFGF濃度顯著低于消退期IH、血管畸形和正常兒童對(duì)照組，bFGF濃度與IH病灶大小和患者年齡無(wú)相關(guān)性；而無(wú)論是增生期和消退期IH患者病灶局部血液bFGF濃度均顯著高于外周血的bFGF濃度。

2.2 尿液的標(biāo)志物

IH患兒尿液中bFGF水平升高[5]。Dosquet等[49]使用Elisa法檢測(cè)顯示增生期IH患兒尿液中bFGF水平升高，而正常兒童和血管畸形患者尿液bFGF水平正常，可作為IH和血管畸形的鑒別指標(biāo)，并用于治療監(jiān)測(cè)。Yang等[44]發(fā)現(xiàn)，IH和脈管畸形患者尿液bFGF水平顯著高于正常對(duì)照組，而且IH患者尿液bFGF水平顯著高于脈管畸形，增生期患者尿液bFGF水平顯著高于消退期IH患者。血清和尿液中bFGF水平不一致的原因目前尚不明了。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）參與細(xì)胞外基質(zhì)的降解和新生血管形成，MMP-2和MMP-9是能夠在尿液中檢測(cè)到的兩種酶，Marler等[50]使用底物凝膠電泳法檢測(cè)尿液MMP的表達(dá)，使用Elisa檢測(cè)尿液bFGF和VEGF水平，發(fā)現(xiàn)53%血管性腫瘤患者、41%脈管畸形患者的尿液MMP-9和bFGF較正常對(duì)照人群顯著升高，且隨疾病范圍和嚴(yán)重程度而增加。MMP-2和VEGF在血管腫瘤和脈管畸形患者尿液中無(wú)顯著差異。在增生期IH患兒尿液中MMP-2的水平顯著低于同年齡的正常對(duì)照組，而MMP-9在兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因此，MMP2/9不能作為增生期IH生長(zhǎng)率的標(biāo)志物。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在增生期IH患兒接受普萘洛爾治療后2周，尿液MMP2水平顯著升高，而在后續(xù)治療后2個(gè)月檢測(cè)尿液發(fā)現(xiàn)無(wú)差異。MMP9在治療過(guò)程中尿液檢測(cè)始終無(wú)差異[51]。該結(jié)果與以前的研究結(jié)論相反，因此需要進(jìn)一步臨床驗(yàn)證，才能分析MMP2是否能作為臨床療效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

總之，目前對(duì)IH標(biāo)志物的研究較多，大部分都是借鑒血管生成、腫瘤、干細(xì)胞等其他領(lǐng)域的研究成果，但至今尚未發(fā)現(xiàn)與IH病程密切相關(guān)、特異度敏感度較強(qiáng)的血清標(biāo)志物。因此，對(duì)IH的細(xì)胞、體液的特異性標(biāo)志物的研究仍需努力。

[1]Holland KE,Drolet BA.Infantile hemangioma[J].Pediatr Clin North Am,2010,57(5):1069-1083.

[2]Itinteang T,Withers AH,Leadbitter P,et al.Pharmacologic therapies for infantile hemangioma:is there a rational basis[J]?Plast Reconstr Surg,2011,128(2):499-507.

[3]Schiest lC,Neuhaus K,Zoller S,et al.Efficacy and safety of propranolol as first-line treatment for infantile hemangiomas[J].Eur J Pediatr,2011,170(4):493-501.

[4]Takahasi K,Mulliken JB,Kozakewich HPW,et al.Cellular markers that distinguish the phases of hemangioma during infancy and childhood[J].J Clin Invest,1994,93(6):2357-2364.

[5]Jinnin M,Medici D,Park L,et al.Suppressed NFAT-dependent VEGFR1 expression and constitutive VEGFR2 signaling in infantile hemangioma[J].Nat Med,2008,14(11):1236-1246.

[6]Kraling BM,Razon MJ,Boon LM,et al.E-selectin is present in proliferating endothelial cells in human hemangiomas[J].Am J Pathol,1996,148(4):1181-1191.

[7]Yu Y,Varughese J,Brown LF,et al.Increased Tie2 expression,enhanced response to angiopoietin-1,and dysregulated angiopoietin-2 expression in hemangioma-derived endothelial cells[J].Am J Pathol,2001,159(6):2271-2280.

[8]Nguyen VA,Furhapter C,Romani N,et al.Infantile hemagioma is a proliferation of β4-negative endothelial cells adjacent to HLA-DR-positive cells with dendritic cell morphology[J].Hum Pathol,2004,35(6):739-744.

[9]Mohamed AM,Elwakil TF,Taher IM,et al.Cyclin D1 gene amplification in proliferating haemangioma[J].Cell Tissue Res,2009,338(1):107-115.

[10]Wu JK,Adepoju O,de Silva D,et al.A switch in Notch gene expression parallels stem cell to endothelialtransition in infantile hemangioma[J].Angiogenesis,2010,13(1):15-23.

[11]North PE,Waner M,Mizeracki A,et al.GLUT-1:a newly discovered immunohistochemical marker for juvenileheangiomas[J].Hum Pathol,2000,31(1):11-22.

[12]Leon-Villapalos J,Wolfe K,Kangesu L.GLUT-1:an extra diagnostic toolto differentiate between haemangiomasand vascular malformations[J].Br J Plast Surg,2005,58(3):348-352.

[13]North PE,Waner M,Mizeracki A,et al.A unique microvascular phenotype shared by juvenile hemangiomas and human placenta[J].Arch Dermatol,2001,137(5):559-570.

[14]Frischer JS,Huang J,Serur A,et al.Biomolecular markers and involution of hemangiomas[J].J Pediatr Surg,2004,39(3):400-404.

[15]Razon MJ,Kraling BM,Mulliken JB,et al.Increased apoptosis coincideswith onset of involution in infantile hemangioma[J].Microcirculation,1998,5(2-3):189-195.

[16]Hasan Q,Rüger BM,Tan ST,et al.Clusterin/apoJ expression during the development of hemangioma[J].Hum Pathol,2000,31(6):691-697.

[17]Ritter MR,Dorell MI,Edmonds J,et al.Insulin-like growth factor 2 and potential regulators of hemangioma growth and involution identified by large-scale expression analysis[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2002,99(11):7455-7460.

[18]Picard A,Boscolo E,Khan ZA,et al.IGF-2 and FLT-1/VEGFR1 mRNA levels reveal distinctions and similarities between congenital and common infantile hemangioma[J].Pediatr Res,2008,63(3):263-267.

[19]Kleinman ME,Greives MR,Churgin SS,et al.Hypoxia-induced mediators of stem/progenitor cell trafficking are increased in children with hemangioma[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2007,27(12):2664-2670.

[20]陳達(dá),林曉曦,李偉.血管瘤中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)和血管生成的研究[J].中華整形外科雜志,2005,21(2):115-118.

[21]Giatromanolaki A,Arvanitidou V,Hatzimichael A,et al.The HIF-2a/VEGF pathway activation in cutaneous capillaryhaemangiomas[J].Pathology,2005,37(2):149-151.

[22]Jia J,Bai Y,Fu K,et al.Expression of allograft inflammatory factor-1 and CD68 in haemangioma:implication in the progression of haemangioma[J].Br J Dermatol,2008,159(4):811-819.

[23]Ritter MR,Moreno SK,Dorrell MI,et al.Identifying potential regulators of infantile hemangioma progression through largescale expression analysis:a possible role for the immune system and indoleamine 2,3 dioxygenase(IDO)during involution[J].Lymphat Res Biol,2003,1(4):291-299.

[24]Dadras SS,North PE,Bertoncini J,et al.Infantile hemangiomas are arrested in an early developmental vascular differentiation state[J].Mod Pathol,2004,17(9):1068-1079.

[25]Nguyen VA,Kutzner H,Fürhapter C,et al.Infantile hemangioma is a proliferation of LYVE-1-negative blood endothelial cells without lymphaticcompetence[J].Mod Pathol,2006,19(2):291-298.

[26]Itinteang T,Tan ST,Brasch H,et al.Haemogenic endothelium in infantile hemangioma[J].J Clin Pathol,2010,63(11):982-986.

[27]Itinteang T,Tan ST,Brasch HD,et al.Primitive erythropoiesis in infantile haemangioma[J].Br J Dermatol,2011,164(5):1097-1100.

[28]Kleinman ME,Tepper OM,Capla JM,et al.Increased circulating AC133+CD34+endothelial progenitor cells in children with hemangioma[J].Lymphat Res Biol,2003,1(4):301-307.

[29]Yu Y,Flint AF,Mulliken JB,et al.Endothelial progenitor cells in infantile hemangioma[J].Blood,2004,103(4):1373-1375.

[30]Khan ZA,Melero-Martin JM,Wu X,et al.Endothelial progenitor cells from infantile hemangioma and umbilical cord blood display unique cellular responses to endostatin[J].Blood,2006,108(3):915-921.

[31]Ritter MR,Reinisch J,Friedlander SF,et al.Myeloid cells in infantile hemangioma[J].Am J Pathol,2006,168(2):621-628.

[32]Yu Y,Fuhr J,Boye E,et al.Mesenchymal stem cells and adipogenesis in hemangioma involution[J].Stem Cells,2006,24(6):1605-1612.

[33]Itinteang T,Tan ST,Brasch H,et al.Primitive mesodermal cells with a neural crest stem cell phenotype predominate proliferating infantile haemangioma[J].J Clin Pathol,2010,63(9):771-776.

[34]Itinteang T,Vishvanath A,Day DJ,et al.Mesenchymal stem cells in infantile haemangioma[J].J Clin Pathol,2011,64(3):232-236.

[35]Boscolo E,Bischoff J.Vasculogenesis in infantile hemangioma[J].Angiogenesis,2009,12(2):197-207.

[36]Glowacki J,Mulliken JB.Mast cells in hemangiomas and vascular malformations[J].Pediatrics,1982,70(1):48-51.

[37]Tan ST,Wallis RA,He Y,et al.Mast cells and hemangioma[J].Plast Reconstr Surg,2004,113(3):999-1011.

[38]Tan ST,Velickovic M,Ruger BM,et al.Cellular and extracellular markers of hemangioma[J].Plast Reconstr Surg,2000,106(3):529-538.

[39]Li Q,Yu Y,Bischoff J,et al.Differential expression of CD146 in tissues and endothelial cells derived from infantile haemangioma and normal human skin[J].J Pathol,2003,201(2):296-302.

[40]Al Dhaybi R,Powell J,McCuaig C,et al.Differentiation of vascular tumors from vascular malformations by expression of Wilms tumor 1 gene:evaluation of 126 cases[J].J Am Acad Dermatol,2010,63(6):1052-1057.

[41]Trindade F,Tellechea O,Torrelo A,et al.Wilms tumor 1expression in vascular neoplasms and vascular malformations[J].Am J Dermatopathol,2011,33(6):569-572.

[42]Audrey ML,Elisabeth S,Michel B,et al.WT1 expression in the endothelial cells of vascular anomalies:A marker of vessel type and not of the tumor/malformation nature of the lesion,with special expression in IH and placenta[C].ISSVA,2012,53.

[43]Sasaki GH,Pang CY,Wittliff JL.Pathogenesis and treatment of infant skin strawberry hemangiomas:clinical and in vitro studies of hormonal effects[J].Plast Reconstr Surg,1984,73(3):359-370.

[44]Yang XJ,Jiang YH,Zheng JW,et al.The role of serum basic fibroblast growth factor,estradiol and urine basic fibroblast growth factorindifferentiating infantile haemangiomas from vascular malformations[J].Phlebology,2011,26(5):191-196.

[45]Zhang L,Lin X,Wang W,et al.Circulating level of vascular endothelial growth factor in differentiating hemangioma from vascular malformation patients[J].Plast Reconstr Surg,2005,116(1):200-204.

[46]Przewratil P,Sitkiewicz A,Andrzejewska E.Local serum levels of vascular endothelial growth factor in infantile hemangioma:intriguing mechanism of endothelial growth[J].Cytokine,2010,49(2):141-147.

[47]Przewratil P,Sitkiewicz A,Andrzejewska E.Soluble receptors for vascularendothelialgrowth factor(sVEGFR1/sVEGFR2)in infantile hemangioma[J].Growth Factors,2010,28(6):417-425.

[48]Przewratil P,Sitkiewicz A,Andrzejewska E.Serum levels of basic fibroblastic growth factor(bFGF)in children with vascular anomalies:Another insight into endothelial growth[J].Clin Biochem,2010,43(10-11):863-867.

[49]Dosquet C,Coudert MC,Wassef M,et al.Importance of bFGF for diagnosis and treatment of hemangiomas[J].Ann Dermatol Venereol,1998,125(5):313-316.

[50]Marler JJ,Fishman SJ,Kilroy SM,et al.Increased expression of urinary matrix metalloproteinases parallels the extent and activity of vascular anomalies[J].Pediatrics,2005,116(1):38-45.

[51]Kleber CJ,Spiess A,Kleber JB,et al.Urinary matrix metalloproteinases-2/9 in healthy infants and haemangioma patients prior to and during propranolol therapy[J].Eur J Pediatr,2012,171(6):941-946.