乙肝病毒攜帶者Pre-S1抗原與HBeAg、HBV-DNA相關(guān)性探討

張春雷

(沭陽縣中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇沭陽 223600)

乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者在HBV感染者中占大多數(shù)，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全國(guó)約有1.2億人[1]。雖然HBV攜帶者沒有臨床癥狀，但部分?jǐn)y帶者的肝臟存在HBV復(fù)制，如果不治療，最終可發(fā)展為肝硬化和肝癌。目前，乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測(cè)方法有多種，尋求快速、敏感和特異性檢測(cè)手段具有十分重要的意義。HBV前S1(Pre-S1)抗原檢測(cè)已成為HBV感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)，HBV-DNA檢測(cè)是判斷病毒復(fù)制活躍和具有傳染性的直接可靠依據(jù)。本研究觀察了HBV攜帶者Pre-S1抗原與HBeAg、HBV-DNA之間的相關(guān)性，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 我院325例HBV攜帶者的血清，入選標(biāo)準(zhǔn):沒有肝炎癥狀和體征，肝功能等各項(xiàng)檢查正常，1年內(nèi)連續(xù)隨訪3次以上，肝部B超檢查無明顯異常，HBsAg陽性。其中男213例、平均年齡30歲，女112例、平均年齡32歲。所有患者留取晨起空腹靜脈血，分離血清，-20℃保存。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 HBeAg檢測(cè):采用ELISA方法，試劑由上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司提供。嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作，并按照說明書給出的公式計(jì)算出臨界值(cut-off value)以判讀結(jié)果。

1.2.2 Pre-S1抗原檢測(cè):采用雙抗體夾心ELISA法，試劑由上海阿爾法生物技術(shù)有限公司提供。嚴(yán)格按照試劑盒說明書的檢測(cè)步驟進(jìn)行操作，根據(jù)酶底物反應(yīng)后的呈色吸光值，測(cè)定血清中乙肝病毒Pre-S1抗原。

1.2.3 HBV-DNA定量測(cè)定:采用PCR法結(jié)合熒光探針體外擴(kuò)增和檢測(cè)技術(shù)，試劑由廈門安普利生物工程股份有限公司提供，該試劑盒的檢測(cè)下限為5.0×100 copies/ml。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 計(jì)數(shù)資料采用Kappa統(tǒng)計(jì)量分析。

2 結(jié)果

2.1 各指標(biāo)檢測(cè)陽性率 325例HBV攜帶者血清中，HBeAg陽性率為26.5%(86/325)，HBV-DNA 陽性率為40.6%(132/325)，Pre-S1 抗原陽性率為37.2%(121/325)。

2.2 HBeAg陽性和陰性組HBV-DNA、Pre-S1抗原的檢測(cè)情況86例HBeAg陽性標(biāo)本，HBV-DNA陽性率90.7%(78/86)，Pre-S1抗原陽性率87.2%(75/86);239例HBeAg陰性標(biāo)本，HBV-DNA陽性率22.6%(54/239)，Pre-S1抗原陽性率19.2%(46/239)。HBeAg與Pre-S1抗原具有良好的一致性(Kappa=0.61，P＜0.05),HBeAg與HBV-DNA一 致 性 較差(Kappa=0.17，P＞0.05)。見表1。

表1 HBeAg陽性和陰性組HBV-DNA、Pre-S1抗原的檢測(cè)情況

2.3 HBV-DNA陽性和陰性組Pre-S1抗原檢測(cè)情況 132例HBV-DNA陽性標(biāo)本中Pre-S1陽性102例，陽性率為77.3%(102/132)，HBV-DNA陰性組中Pre-S1抗原陽性19例，陽性率為9.8%(19/193)，檢測(cè)HBV-DNA與Pre-S1具有良好的一致性(Kappa=0.67，P＜0.05)。見表2。

表2 HBV-DNA陽性和陰性組Pre-S1抗原檢測(cè)情況

3 討論

近年來，臨床一直以檢測(cè)HBV-DNA和Pre-S1抗原作為診斷和治療乙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)。熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)HBV-DNA雖然存在假陽性，但可直接檢測(cè)病毒基因片段，解決了病原體感染后發(fā)病時(shí)間、病情輕重與病原體數(shù)量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，是目前HBV診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[2]。HBV前S1(Pre-S1)抗原由HBV前s1基因編碼，具有很強(qiáng)的免疫原性，對(duì)HBV附著肝細(xì)胞誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)有重要作用，因其含有肝細(xì)胞膜受體，與病毒侵入肝細(xì)胞以及HBV復(fù)制關(guān)系密切[3-4]。因此，Pre-S1抗原已成為HBV感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的一個(gè)重要標(biāo)志。

本研究中，HBV攜帶者血清標(biāo)本檢測(cè)肝功能的指標(biāo)都是正常的，但檢測(cè)肝功能指標(biāo)并不能完全反映病毒在體內(nèi)的復(fù)制情況。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，325例標(biāo)本中HBV-DNA陽性率40.6%、Pre-S1抗原陽性率37.2%、HBeAg陽性率28.9%，表明肝功能正常的部分HBV攜帶者體內(nèi)仍存在病毒復(fù)制，檢測(cè)HBV-DNA和Pre-S1抗原比HBeAg更能反映這一情況。HBeAg陰性標(biāo)本中有19.2%的Pre-S1抗原陽性，22.6%的HBV-DNA陽性，說明HBeAg轉(zhuǎn)陰并不能代表HBV從體內(nèi)清除或復(fù)制終止，這與Pichoud等[5]的報(bào)道基本相同。部分HBeAg陰性者HBV-DNA和Pre-S1抗原呈陽性，原因可能有兩個(gè)方面:①可能由于HBV基因的前C區(qū)發(fā)生變異導(dǎo)致HBeAg表達(dá)受限，而病毒本身復(fù)制不受影響[6-8];②可能是病毒釋放到血液中的量較少，ELISA法檢測(cè)抗原需要1015-1017個(gè)病原體才能出現(xiàn)陽性反應(yīng)。本研究結(jié)果中，HBeAg陽性和陰性組HBV-DNA、Pre-S1抗原檢測(cè)結(jié)果的差異性，可能與HBV-DNA整合于宿主肝細(xì)胞基因組或由于基因變異而未能檢出有關(guān)。HBV-DNA陽性組Pre-S1抗原的陽性率明顯高于HBV-DNA陰性組，說明HBV-DNA檢測(cè)的敏感性高于Pre-S1抗原;HBV-DNA陰性組中檢測(cè)出Pre-S1抗原呈陽性表達(dá)，可能由于Pre-S1不僅表達(dá)在HBV Dane顆粒上、還表達(dá)在管型顆粒表面，當(dāng)HBV生成較多的管型顆粒，即使病毒復(fù)制不活躍，也可能出現(xiàn)Pre-S1抗原陽性。

雖然HBeAg、HBV-DNA與Pre-S1抗原在檢出率上存在差異，但本研究結(jié)果顯示，HBV攜帶者HBeAg與Pre-S1抗原具有良好的相關(guān)一致性、與HBV-DNA的一致性較差，說明HBeAg與HBV-DNA存在一定差異，檢測(cè)HBeAg不能完全反應(yīng)病毒在體內(nèi)的復(fù)制情況。另外，本研究結(jié)果顯示，Pre-S1抗原與具有病毒復(fù)制意義的金標(biāo)準(zhǔn)HBV-DNA具有良好的相關(guān)一致性，說明Pre-S1抗原比HBeAg更能反應(yīng)病毒在體內(nèi)的復(fù)制情況。因此，聯(lián)合檢測(cè)Pre-S1抗原和乙肝病毒標(biāo)志物對(duì)HBV攜帶者具有越來越重要的臨床意義。

[1]王建福.兩種不同試劑檢測(cè)前S1抗原結(jié)果比較[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(5):505-509

[2]姚磊，潘海龍，張征，等.59434例就診者血清乙肝病毒標(biāo)志物的檢出與分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2003，32(4):469-470.

[3]胡曉琳，張海燕，焦連亭.乙型肝炎病毒前S1抗原在乙肝臨床診斷中的意義[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2005，23(1):92-93.

[4]盧建華，宋晨朝，郎振為，等.前S1蛋白檢測(cè)在慢性乙型肝炎患者病理診斷中的價(jià)值[J].中華傳染病雜志，2006，24(1):60-62.

[5]Pichoud C,Berby F,Stuyver L, et al.Persistence of viral replication after anti-HBe seroconversion during antiviral therapy for chronic hepatitis B[J].J Hepatol, 2000,32(2):307-316.

[6]Ikeda K, Arase Y, Saitoh S, et al.Long term outcome of HBV carriers with negative HBe antigen and normal aminotransferase[J].Am J Med, 2006,119(11): 977-985.

[7]Funk ML,Rosenberg DM,Lok AS.World-wide epidemiology of HBeAg-negative chronic hepatitis B and associated percore and core promomr variants[J].J Viral Hepat, 2002,9(1):52-61.

[8]邊廣珠,焦賢春,劉曉云,等.乙肝標(biāo)志物模式與病毒載量的相關(guān)性研究[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2011，9(5):709-710.