伴微乳頭成分的肺腺癌EGFR KRAS基因突變和臨床病理學(xué)特征相關(guān)研究

王 靜 孫蕾娜 戰(zhàn)忠利

非小細(xì)胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）是目前世界上發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，肺腺癌作為NSCLC的一種重要亞型，近年來其發(fā)病率在大多數(shù)國家中處于上升趨勢，其臨床、放射學(xué)、病理學(xué)和分子學(xué)的異質(zhì)性被廣泛研究。國際肺癌研究協(xié)會/美國胸科協(xié)會/歐洲呼吸協(xié)會對肺腺癌進行新分類，相關(guān)文獻于2011年2月發(fā)表，其中一個大的變動新增加一個組織學(xué)類型：肺微小乳頭狀腺癌［1］。在本文中，我們對這一獨特亞型的肺腺癌EGFR，KRAS基因突變情況和臨床病理學(xué)特征進行討論。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選擇2009年2月至2010年10月天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院經(jīng)手術(shù)治療有完整臨床病理資料的肺部原發(fā)腫瘤病例共144例，患者年齡32～75歲，平均年齡58.44歲，腫瘤大小0.5～9.0 cm，平均大小3.591 cm，見表1、2。

表1 EGFR突變與144例肺腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性 例（%）Table1 Relationship ofEGFRmutation with the clinicopathological parameters of 144 cases of lung adenocarcinoma n（%）

表2 MPP陽性組和MPP陰性組臨床病理特征 例Table2 Clinicopathological features of MPP-positive group and MPP-negative group n（%）

1.2 方法

1.2.1 病理資料 手術(shù)標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，記錄腫瘤大小，依據(jù)腫瘤大小，病變?nèi)〔?～6個組織塊不等，石蠟包埋，切片HE染色。顯微鏡下全面觀察病理形態(tài)特征并根據(jù)2011年發(fā)表的肺腺癌新分型標(biāo)準(zhǔn)：MPP成分＞5%則診斷為伴微乳頭成分的肺腺癌，MPP陽性組中又按MPP所占的百分比不同分為三亞組：MPP+（5%～10%）、MPP++（11%～30%）、MPP+++（＞30%），以上所有診斷均由2名病理醫(yī)師獨立完成。

1.2.2 DNA提取 每例病例均取新鮮的腫瘤組織凍存標(biāo)本25 mg研磨并用蛋白酶K消化，于56℃條件下?lián)u浴過夜，用Roche MagNA Pure LC DNA isolation kitⅢ-Tissue試劑盒在Roche MagNA Pure LC 2.0全自動核酸提取儀上提取DNA，并于-20℃保存。

1.2.3 RT-PCR 采用北京雅康博生物科技有限公司人EGFR、KRAS基因突變定性檢測試劑盒（實時熒光PCR法）在Roche LightCycler480Ⅱ檢測EGFR基因18、19、20、21外顯子KRAS12、13密碼子突變情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，組間數(shù)據(jù)比較采用卡方檢驗，以P＜0.05作為統(tǒng)計學(xué)差異顯著性測定界限。

2 結(jié)果

144例EGFR突變62例，突變率為43.1%，其中2例18位點突變，37例19位點突變，5例20位點突變，21例21位點突變（3例雙突變）。EGFR突變在女性（P=0.018），腫瘤體積較大（P=0.016）的病例中高發(fā)；EGFR突變與年齡、吸煙狀況、有無侵犯、臨床分期（P＞0.05）無明顯相關(guān)性。

患者的性別、年齡、吸煙狀況、腫瘤大小、轉(zhuǎn)移浸潤情況、臨床分期（P＞0.05）等相關(guān)臨床病理學(xué)特征在MPP陽性組和MPP陰性組間沒有統(tǒng)計學(xué)差異，見表2。MPP陽性組EGFR基因突變43例（55.8%）KRAS突變1例（1.3%）。MPP陰性組EGFR基因突變19例（24.6%）KRAS基因突變8例（10.4%）。MPP陽性組EGFR突變率高于MPP陰性組（P＜0.001），KRAS突變率低于MPP陰性組（P=0.016）。

MPP陽性組中EGFR突變與腫瘤體積（P=0.002）有關(guān)，與性別、年齡、吸煙狀況、有無侵犯、臨床分期（P＞0.05）無關(guān)，見表3。MPP（+、++、+++）三亞組間患者的性別、發(fā)病年齡、吸煙狀況、腫瘤大小、浸潤轉(zhuǎn)移情況、臨床分期（P＞0.05）相關(guān)臨床病理學(xué)特征沒有統(tǒng)計學(xué)差異，見表4。MPP（+、++、+++）三亞組EGFR基因突變分別為9例（42.9%）、21例（60.0%）、12例（57.1%），P=0.932；KRAS突變例數(shù)太少差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表5。

表3 EGFR突變與MPP陽性組臨床病理參數(shù)的相關(guān)性 例（%）Table3 Relationship ofEGFRmutation with clinicopathological parameters in MPP-positive group n（%）

表4 MPP（+,++,+++）三組間臨床病理特征 例Table4 Clinical and pathological features of MPP（+,++,+++）subgroups n（%）

表5 MPP（+,++,+++）三組的EGFR基因突變狀況 例Table5 EGFR mutation status of MPP（+,++,+++）subgroups（n）

3 討論

WHO2004版肺癌組織學(xué)分類僅簡單描述了伴微乳頭成分的肺腺癌（pulmonary adenocarcinoma with a micropapillary pattern，MPPAC），國內(nèi)外學(xué)者對其開展了大量研究并逐漸認(rèn)識到伴MPP成分的肺腺癌侵襲性強易轉(zhuǎn)移［2］，有獨特的分子生物學(xué)行為。國際肺癌研究協(xié)會/美國胸科協(xié)會/歐洲呼吸協(xié)會對肺腺癌進行新的分類，增加了“肺微小乳頭狀腺癌”這一亞型，按照新分類的定義MPP所占比例＞5%時診斷為“伴微乳頭成分的肺腺癌”，MPP所占比例＞40%且為主導(dǎo)成分時診斷為“以微乳頭成分為主型肺腺癌”［2］。

EGFR基因突變自從作為臨床EGFR-TKIs靶向藥物的預(yù)測因素后，國內(nèi)外對其開展了大量的研究，多項研究表明EGFR基因在亞裔、女性、非吸煙、腺癌患者中突變率高［3］。我們對144例肺腺癌EGFR突變研究發(fā)現(xiàn)其在女性（P=0.018），腫瘤體積較大（P=0.016）的病例中突變率明顯增高；EGFR突變百分比在較年輕患者、非吸煙病例中高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義?？赡艿脑蚴菍嶒灢±龜?shù)少并在選擇病例時把形態(tài)學(xué)上不能肯定辨別為微乳頭結(jié)構(gòu)的病例剔除。

國際肺癌研究協(xié)會/美國胸科協(xié)會/歐洲呼吸協(xié)會對肺腺癌進行新的分類后，進一步研究了按照新分類標(biāo)準(zhǔn)分類后的肺腺癌各亞型和EGFR突變的相關(guān)性［4］，研究發(fā)現(xiàn)EGFR突變同微乳頭為主導(dǎo)的亞型和非實性亞型相關(guān)，他們的研究發(fā)現(xiàn)“伴微乳頭成分的肺腺癌”EGFR突變率為73%，“以微乳頭成分為主導(dǎo)型的肺腺癌”EGFR突變率為83%。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)伴微乳頭成分的肺腺癌基因突變率為55.8%，這可能是我們對微乳頭形態(tài)學(xué)上的判別誤差，肺腺癌的異質(zhì)性，取材的局限性，實驗儀器誤差等原因。MPP陽性組EGFR突變頻率高于MPP陰性組，這進一步說明微乳頭為主導(dǎo)成分的組織學(xué)特點可以作為對EGFR突變的預(yù)測指標(biāo)［5］。

KRAS突變已被證實是厄洛替尼或吉非替尼治療預(yù)后的負(fù)相關(guān)因素［6］。有研究表明KRAS突變與患者的性別、病理分型、種族有關(guān)，而與患者是否吸煙無關(guān)［7］。本研究顯示KRAS在伴微乳頭成分的肺腺癌這一病理學(xué)亞型中突變率低，由于KRAS基因突變例數(shù)少，其突變情況和患者的性別、年齡、腫瘤大小、吸煙情況等臨床病理學(xué)特征有無相關(guān)性的研究沒有意義，有待國內(nèi)外學(xué)者進一步研究。

有文獻報道MPPAC腫瘤侵襲性強，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管侵犯、肺內(nèi)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯及遠處轉(zhuǎn)移［8-9］，可能由于我們選擇的都是臨床病理分期早手術(shù)治療的病例，因此研究沒有得出和文獻報道一致的結(jié)論。

MPPAC侵襲性強、預(yù)后差［10］EGFR突變頻率高于肺腺癌其它亞型，KRAS突變頻率低于肺腺癌其它亞型。我們推測臨床靶向藥物EGRR-TKIs應(yīng)用于MPPAC臨床受益人群療效更為明顯。

1 Travis WD,Brambilla E,Noguchi M,et al.International Association for the Study of Lung Cancer/American Thoracic Society/European Respiratory Society International Multidisciplinary/Classification of lung adenocarcinoma[J].J of Thorac Oncol,2011,6(2):244—285.

2 張 靜,梁智勇,劉彤華,等.伴微乳頭結(jié)構(gòu)的肺腺癌臨床病理特征及研究進展[J].中華病理學(xué)雜志,2011,40(3):202-205

3 Gupta R,Dastane AM,Mckenna R Jr,et al.The predictive value of epidermal growth factor receptor tests in patients with pulmonary adenocarcinoma:review of current"best evidence"with meta-analysis[J].Hum Pathol,2009,40(3):356-365.

4 Shim HS,Lee daH,Park EJ,et al.Histopathologic Characteristics of lung adenocarcinomas with epidermal growth factor receptor mutations in the International Association for the Study of Lung Cancer/American Thoracic Society/European Respiratory Society[J].Arch Pathol Lab Med,2011,135(10):1329-1334.

5 Borczuk AC.Micropapillary histology:a frequent morphology of mutation-associated lung adenocarcinoma[J]?Am J Pathol,2009,131(5):615-617.

6 Marks JL,Broderick S,Zhou Q,et al.Prognostic and the rapeutic implication of EGFR and KRAS mutations in resected lung adenocarcinoma[J].J Thorac Oncol,2008,3(2):111-116.

7 李 洋.KRAS突變在非小細(xì)胞肺癌中的研究進展[J].中國肺癌雜志,2009,12(12):1369-1373.

8 Russell PA,Wainer Z,Wright GM,et al.Does lung adenocarcinoma subtype predict patient survival?A clinicopathologic study based on the New International Association for the Study of Lung Cancer/American Thoracic Society/European Respiratory Society International Multidisciplinary Lung Adenocarcinoma Classification[J].J of Thorac Oncol,2011,6(2):1496-1506.

9 Kamiya K,Hayashi Y,Dougnchi J,et al.Histopathological features and prognostic significance of the micmpapillary pattern in lung adenocercinoma[J].Mod Pathol,2008,21(8):992—1001.

10 發(fā) 文,曾郁伴.伴有浸潤微乳頭狀結(jié)構(gòu)肺腺癌病理診斷與預(yù)后[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院報,2011,36(4):370-373.