孟魯司特和布地奈德霧化吸入治療對哮喘患兒血清miR-155、炎癥因子和氣道功能的影響

陳智，魏靜麗，田蕓（廣東省深圳市前海蛇口自貿(mào)區(qū)醫(yī)院，廣東 深圳 518067）

支氣管哮喘（以下簡稱“哮喘”）是呼吸系統(tǒng)十分常見的一類疾病[1-2]。其病理變化表現(xiàn)為支氣管平滑肌出現(xiàn)明顯的痙攣，產(chǎn)生大量的支氣管黏液，和出現(xiàn)過度腫脹的支氣管黏膜[3-4]。目前的治療策略集中在抗炎、解痙和抗過敏[5]。急性哮喘發(fā)作會誘發(fā)患兒血流動力學(xué)紊亂，繼而導(dǎo)致呼吸衰竭[6]。微小RNA（microRNA，miRNA）能通過調(diào)控靶基因而參與機(jī)體的病理、生理過程。近年來，多種miRNA如miR-155等異常表達(dá)被證實與哮喘發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7]。糖皮質(zhì)激素是當(dāng)前治療哮喘患兒的重要藥劑。然而，糖皮質(zhì)激素雖能夠在一定程度上抑制體內(nèi)炎性因子的分泌，緩解臨床癥狀，但仍無法控制白三烯的釋放。因此，在臨床治療哮喘患者時，要科學(xué)、合理地選用藥物。孟魯司特是一種可以產(chǎn)生抗炎作用的白三烯受體阻滯劑。本研究采用孟魯司特和布地奈德霧化吸入來治療支氣管哮喘患兒，監(jiān)測治療前后患兒的療效、氣道功能、miR-155和炎癥因子含量。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2017年1月-2021年12月期間在深圳市前海蛇口自貿(mào)區(qū)醫(yī)院兒科診斷為哮喘的80例患兒為研究對象。通過隨機(jī)數(shù)字表法把入組患兒分成兩組，每組各40例。給予孟魯司特結(jié)合布地奈德霧化吸入治療的患兒列為觀察組，其中男18例、女22例，年齡6-12歲。給予布地奈德霧化吸入治療的患兒列為對照組，其中男21例、女19例，年齡6-11歲。兩組的臨床資料比較，無明顯差異（P＞0.05），未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①支氣管哮喘患兒均符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南（2016年版）》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。②年齡在6-12歲之間。③經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患兒家屬同意參與本次研究，并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他危重疾病需緊急搶救者。②合并存在其他先天性疾病者。③合并存在其他傳染性疾病者。④藥物過敏者。

1.2 醫(yī)治方法 對照組采用布地奈德治療，劑量用法：將1mg布地奈德溶解至2mL、0.9%的NaCl注射液，形成射流霧化劑，患兒通過儀器霧化吸入，每次10min，每天2次。觀察組在對照組的基礎(chǔ)上，加用孟魯司特咀嚼片治療，劑量用法：每晚1次口服，4-5mg/次。醫(yī)治一周后評估兩組患兒臨床癥狀的緩解程度。

1.3 療效標(biāo)準(zhǔn) 顯效：患兒哮鳴體征消失，及患兒喘息等癥狀消失；有效：患兒哮鳴體征改善，及患兒喘息等癥狀改善；無效：患兒哮鳴音體征無改善，及患兒喘息等癥狀無改善[8]。

1.4 氣道功能評價方法 用肺功能測定儀（PowerCube-ST，重慶柯洛德科貿(mào)）測定兩組患兒治療前、治療3個月后的肺功能參數(shù)：第1s用力呼氣容積（FEV1）和用力肺活量（FVC），并計算FEV1/FVC；潮氣量25%、50%、75%時的呼氣流速（TEF25%、TEF50%、TEF75%）。

1.5 血清miR-155含量檢測方法 兩組研究對象治療前及治療3個月后均采集外周血樣本5mL，選用miR-X試劑盒（638314，Clontech）檢測樣本。最后在熒光定量PCR儀上分別對miR-155和U6進(jìn)行擴(kuò)增，采用2-△△Ct計算miR-155的相對表達(dá)量。miR-155上游序列：5’-GCG CGT TAA TGC TAA TTG TGA T-3’；miR-155下游序列：5’-GTG CAG GGT CCG AGG T-3’；U6上游序列：5’-CGG GTT TGT TTT GCA TTT GT-3’；U6下游序列：5’-AGT CCC AGC ATG AAC AGC TT-3’。引物序列交由上海生工合成。

1.6 血清炎癥因子含量測定 兩組研究對象治療前及治療3個月后均采集外周血樣本5mL，離心得到血清后，用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（均購自北京市索萊寶科技有限公司）測定腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（IFN-γ）和白介素-4（IL-4）含量。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 研究數(shù)據(jù)采用SPSS23.0軟件系統(tǒng)完成分析。計數(shù)資料采用“%”表示，組間比較采用χ2檢驗。計量資料均符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組哮喘患兒的治療效果比較 治療后，觀察組患兒的治療總有效率為90.0%，明顯高于對照組的75.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.723，P=0.033）。見表1。

表1 兩組哮喘患兒的治療效果比較[n(%)]

2.2 兩組哮喘患兒氣道功能各項相關(guān)指標(biāo)比較 治療后，兩組氣道功能各項相關(guān)指標(biāo)（包括：FEV1/FVC、25%TEF、50%TEF和75%TEF）與治療前相比均有所改善；觀察組的氣道功能各項相關(guān)指標(biāo)改善情況均顯著優(yōu)于對照組（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患兒治療前后氣道功能參數(shù)比較(±s)

表2 兩組患兒治療前后氣道功能參數(shù)比較(±s)

組別（n=40） 時間 FEV1/FVC 25%TEF（mL/s） 50%TEF（mL/s） 75%TEF（mL/s）觀察組 治療前 75.33±6.76 76.93±3.32 102.98±8.89 113.79±7.97治療后 86.09±5.73 86.56±7.88 118.68±9.01 120.04±6.67對照組 治療前 75.69±7.56 77.02±3.52 105.69±8.52 112.23±6.66治療后 79.09±6.67 80.26±4.45 109.03±8.89 112.41±9.53 t/P觀察組（治療前后） -10.060/＜0.001 -6.857/0.002 -4.638/0.010 -2.912/0.044 t/P對照組（治療前后） -3.477/0.025 -5.860/0.004 -8.499/0.061 -3.818/0.059 t/P組間值（治療后） 3.005/0.040 5.344/0.006 3.290/0.030 4.382/0.012

2.3 兩組哮喘患兒血清miR-155、炎癥因子含量比較 治療后，兩組血清miR-155、IL-4含量與治療前相比均有所降低；TNF-α和IFN-γ含量與治療前相比均有所升高。觀察組的血清miR-155含量降低幅度顯著優(yōu)于對照組；TNF-α和IFN-γ含量升高幅度顯著優(yōu)于對照組（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患兒治療前后血清miR-155、炎癥因子含量比較(±s)

表3 兩組患兒治療前后血清miR-155、炎癥因子含量比較(±s)

組別（n=40） 時間 miR-155 TNF-α（pg/mL） lFN-γ（μg/mL） lL-4（ng/mL）觀察組 治療前 16.19±0.59 13.21±1.09 5.32±0.61 1.98±1.38治療后 9.74±1.36 23.77±2.19 8.97±1.53 1.12±1.86對照組 治療前 16.44±0.80 13.71±1.50 5.33±0.62 1.96±1.32治療后 12.03±1.59 18.32±0.88 6.37±0.77 1.12±0.96 t/P觀察組（治療前后） 9.766/＜0.001 -9.635/＜0.001 -4.966/0.001 6.626/＜0.001 t/P對照組（治療前后） 5.552/＜0.001 -5.927/＜0.001 -2.342/0.047 5.272/＜0.001 t/P組間值（治療后） 2.452/0.040 5.518/＜0.001 3.394/0.009 3.206/0.063

3 討論

哮喘是一類免疫功能失調(diào)的慢性炎癥性疾病。該病發(fā)生時主要富集氣道黏膜下層CD4+T 淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞等，其炎癥反應(yīng)進(jìn)展與氣道重塑、大量黏液的產(chǎn)生和氣道的高變異性呈正相關(guān)[9]。研究報告顯示，我國20歲以上國民哮喘發(fā)病率為4.2%，患者數(shù)量能達(dá)到4570萬例[10]。而近期我國學(xué)者M(jìn)eta分析結(jié)果顯示，我國0-14歲兒童哮喘患病率為2.6%，患病率總體呈上升趨勢[11]。哮喘患兒的主要臨床特征有咳嗽、氣促和喘息等。因此，哮喘治療策略上應(yīng)以及時高效地抗炎、止咳、平喘為主。

布地奈德是一類常見哮喘治療藥物，功效是能顯著抑制炎癥反應(yīng)，及降低相關(guān)炎癥因子的分泌，從而有效地控制哮喘，是臨床常用的治療哮喘藥物[12]。孟魯司特是一類特異性白三烯受體抑制劑，能抑制白三烯受體的生物學(xué)功能，從而高效地降低白三烯所誘發(fā)的氣道炎癥反應(yīng)和降低炎癥因子的分泌。為了明確孟魯司特和布地奈德霧化吸入對哮喘患兒的療效，本研究首先評估了兩組患兒的臨床療效，研究發(fā)現(xiàn)，治療后，觀察組患兒的治療總有效率為90.0%，明顯高于對照組的75.0%，P＜0.05。哮喘患兒最顯著的臨床癥狀是氣流受限和氣道痙攣，其中氣流受限程度常用FEV1/FVC指標(biāo)顯示，小氣道痙攣程度常用25%TEF、50%TEF和75%TEF指標(biāo)顯示。本研究經(jīng)分析上述氣道功能參數(shù)后發(fā)現(xiàn)：治療后，兩組氣道功能各項相關(guān)指標(biāo)（包括：FEV1/FVC、25% TEF、50%TEF和75% TEF）與治療前相比均有所改善；觀察組的氣道功能各項相關(guān)指標(biāo)改善情況均顯著優(yōu)于對照組（P＜0.05），提示孟魯司特和布地奈德霧化吸入聯(lián)合治療哮喘患兒在改善氣道痙攣和氣流受限上顯著優(yōu)于單獨(dú)使用布地奈德霧化等吸入治療，這可能與孟魯司特能抑制白三烯受體，繼而抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)。臨床研究顯示，孟魯司特可直接抑制半胱氨酸白烯和白三烯受體，從而阻斷生物活性物質(zhì)（超敏C反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白E）的釋放，進(jìn)而減輕患兒的氣道高反應(yīng)性，發(fā)揮強(qiáng)效抗炎作用，從而改善哮喘患兒氣道痙攣，緩解臨床癥狀[13]；另有研究者發(fā)現(xiàn)孟魯司特能高效減輕由血清炎癥因子分泌異常所誘發(fā)的免疫病理損傷，下調(diào)氣道高反應(yīng)性，降低了炎癥細(xì)胞堆聚于氣管，進(jìn)而抑制了炎癥反應(yīng)的發(fā)生，從而有效緩解哮喘癥狀[14]，以上研究結(jié)論與本研究基本一致。

miRNA是一種小非編碼單鏈RNAs，作為DNA表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控分子，已被證實和過敏性哮喘有關(guān)[15]。眾多研究表明，哮喘患者均存在miRNA表達(dá)失調(diào)情況，這些miRNA與哮喘的發(fā)生過程密切相關(guān)[16]。miR-155是其中研究者關(guān)注的非編碼RNA之一，其位于人類第21號染色體上，高表達(dá)于人類脾臟、胸腺、肝臟、肺臟以及腎臟中[17]，其功能與免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化、活化、增殖及免疫應(yīng)答等生物學(xué)過程有關(guān)。miR-155在多類激活的免疫細(xì)胞中高表達(dá)，能通過多條信號通路調(diào)控哮喘的進(jìn)展[18]。研究表明，在過敏性鼻炎患者中，miR-155上調(diào)能提升ILC2表達(dá)，繼而提高IL-4表達(dá)，從而誘發(fā)Th2的炎癥反應(yīng)[19]。轉(zhuǎn)錄因子T-bet是一類具有高度選擇性加快Th1細(xì)胞分化功能的分子，在Th1細(xì)胞的分化中發(fā)揮不可或缺的作用。T-bet可促使IFN-γ等Th1型細(xì)胞因子的分泌，并促使Th2細(xì)胞向Th1方向分化。而轉(zhuǎn)錄因子GATA-3則是一類具有高度選擇性促進(jìn)Th2細(xì)胞分化功能的因子。GATA-3可高度選擇性地促進(jìn)Th2細(xì)胞發(fā)育、誘導(dǎo)產(chǎn)生Th2細(xì)胞分子和阻遏Th1細(xì)胞特異分子。Th1/Th2的免疫平衡對維持氣道正常生理功能具有重要意義。Th1細(xì)胞分泌的特異性細(xì)胞因子有IL-2、IFN-γ和TNF-α等，可調(diào)控局部組織中的細(xì)胞免疫應(yīng)答。Th2細(xì)胞分泌的特異性細(xì)胞因子有IL-4、IL-6等，能抑制Th1細(xì)胞的分化，同時能提升體液免疫應(yīng)答和IgE的合成，從而讓氣道呈現(xiàn)致敏及高反應(yīng)性狀態(tài)[20]。在哮喘發(fā)病過程中，Th1/Th2平衡開始向Th2漂移，增強(qiáng)Th2細(xì)胞功能會提高氣道炎癥反應(yīng)和氣道敏感性，從而加重哮喘癥狀。目前，孟魯司特治療支氣管哮喘的效果得到了越來越多的肯定。然而，該藥對哮喘患兒miR-155及炎癥反應(yīng)的影響尚未見相關(guān)報道。因此，本研究進(jìn)一步測定了哮喘患兒治療前后血清中miR-155和Th1、Th2細(xì)胞特異性釋放的細(xì)胞因子發(fā)現(xiàn)：治療后，兩組血清miR-155、IL-4含量與治療前相比均有所降低；TNF-α和IFN-γ含量與治療前相比均有所升高。觀察組的血清miR-155含量降低，顯著優(yōu)于對照組；TNF-α和IFN-γ含量升高，顯著優(yōu)于對照組（P＜0.05），提示miR-155高表達(dá)時，Th1細(xì)胞比例降低，Th2細(xì)胞比例升高，布地奈德霧化吸入和孟魯司特可能通過抑制miR-155高表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控Th1/Th2平衡，從而改善患兒哮喘。筆者推測miR-155高表達(dá)能直接或間接促進(jìn)GATA-3表達(dá)，從而造成哮喘患兒Th1/Th2細(xì)胞失衡的新機(jī)制，該具體機(jī)制需進(jìn)一步通過體內(nèi)外實驗闡明。

綜上所述，用布地奈德霧化吸入聯(lián)合孟魯司特口服治療哮喘患兒療效滿意，能有效地下調(diào)血清中miR-155表達(dá)、抑制Th1/Th2失衡介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和改善氣道功能，有助于患者的康復(fù)，值得臨床應(yīng)用推廣。本研究還存在一些不足之處，如選入樣本量總體偏少，指標(biāo)觀察時間較短，仍需在后續(xù)工作中作多中心、多樣本深入研究，以提供更可靠的研究數(shù)據(jù)。