白飯樹(shù)總生物堿的提取分離與鑒定

秦貽強(qiáng)，鄧俊剛，鄧立東

（桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西 桂林541001）

白飯樹(shù)為大戟科白飯樹(shù)屬（Flueggea）植物，生于丘陵地的山坡，路旁和曠野灌木叢中。產(chǎn)于廣西各地區(qū)。全株入藥，味苦、微澀，性涼，有小毒，具清熱解毒、消腫止痛、止癢止血等功效，外用可治療濕疹、膿皰瘡、過(guò)敏性皮炎、瘡癤及燒燙傷［1，2］等。白飯樹(shù)在民間做為傳統(tǒng)的藥用植物單味及復(fù)方內(nèi)服或外用治療風(fēng)濕性疾病較早，但對(duì)白飯樹(shù)的應(yīng)用研究始于20世紀(jì)60年代，日本、印度、德國(guó)等學(xué)者在化學(xué)和藥理等方面作了一些研究［3，4］，白飯樹(shù)含有多種化合物，且有多種生理活性，被各國(guó)藥學(xué)和化學(xué)工作者所關(guān)注。本文對(duì)白飯樹(shù)生物堿進(jìn)行提取分離，并作出了鑒定，為白飯樹(shù)在藥物制劑研究中質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 試藥與儀器

1.1 試藥

白飯樹(shù)藥材，由桂林醫(yī)藥公司提供購(gòu)，經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科蔡小玲副主任中藥師鑒定，為大戟科植物白飯樹(shù)Fluggea virosa（Roxb.Ex Willd.）Voigt.干燥全株。硅膠G（青島海洋公司，批號(hào)：1984211）；羧甲基纖維素（青島海洋公司，批號(hào)：0908011）；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE－52AA（上海亞榮生化儀器廠）；DZF－250真空干燥器（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；B2500S－M7超聲波清洗器（必能信超聲有限公司產(chǎn)品）；HANGPING FA2004電子天平（上海精科天平儀器廠）；SHZ－Ⅲ循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；YOKO－SY 紫外線分析儀（武漢藥科新技術(shù)開(kāi)發(fā)公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 原料的預(yù)處理

取白飯樹(shù)藥材1kg，洗凈后，水浸泡靜置過(guò)夜，備用。

2.2 白飯樹(shù)總生物堿的提取分離

2.2.1 提取

取預(yù)處理好的白飯樹(shù)藥材1kg，加入5 000mL水采用水煎煮法進(jìn)行提取，煮沸后保持微沸繼續(xù)煎煮4h后，倒出煎煮液。藥渣再加3 000mL 水繼續(xù)煎煮，煮沸后保持微沸繼續(xù)煎煮3h后，倒出煎煮液，合并兩次煎煮液，將煎煮液放入圓底燒瓶中在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸餾，得到兩次煎煮白飯樹(shù)總水提濃縮液，保存，備用。

2.2.2 大孔樹(shù)脂的預(yù)處理

在柱底端放少許棉花，用適量蒸餾水浸潤(rùn)，然后將大孔吸附樹(shù)脂用水邊攪拌下轉(zhuǎn)移到樹(shù)脂柱中，然后用蒸餾水淋洗至柱子緊實(shí)，再在柱子上端放一層薄薄的棉花。將500mL的5%HCL以30d·min－1的流速通過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行活化，然后用蒸餾水以30d·min－1的流速洗至中性；再將500mL的5%NaoH 以30d·min－1的流速通過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行活化，再用蒸餾水以30d·min－1流速洗至中性；最后用75%乙醇洗脫雜質(zhì)，洗至與水無(wú)白色渾濁現(xiàn)象；再用蒸餾水洗至無(wú)有機(jī)溶劑味即可，備用。

2.2.3 分離

將白飯樹(shù)總水提濃縮液一半經(jīng)上樣預(yù)處理活化過(guò)的D101型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水洗脫至洗脫液無(wú)色，收集洗脫液，再用75%乙醇進(jìn)行洗脫至醇液無(wú)色，收集洗脫液。分別得到了上樣收集液、水洗脫液、乙醇洗脫液，將上述液體分別濃縮后真空干燥。上樣流出物和水洗脫物為粘稠狀黃色物體。乙醇洗脫物為褐色固體，即白飯樹(shù)總生物堿，稱重得，干燥物3.75g。

2.3 生物堿的鑒定

2.3.1 生物堿的沉淀反應(yīng)（試管法）

取少量水洗脫液、乙醇洗脫液、上樣收集液分別置于5支干凈的試管中，分別加入以下已配制好的生物堿沉淀試劑中：碘化鉍鉀、改良的碘化鉍鉀、硅鎢酸、碘－碘化鉀、鞣酸，觀察其現(xiàn)象與結(jié)果。結(jié)果如表1所示。

表1 企業(yè)家試管法鑒定結(jié)果

表1結(jié)果顯示，只有乙醇洗脫液樣品跟生物堿沉淀試劑有顏色反應(yīng)，可知白飯樹(shù)生物堿主要在乙醇洗脫液中，而較少或沒(méi)有生物堿成分在水洗脫液和上樣收集液中，然而由于該方法本身靈敏度較差有一定局限性，需要用薄層層析法來(lái)進(jìn)一步判斷。

2.3.2 生物堿的薄層色譜定性鑒別

取少量的上樣收集液樣品、水洗脫液樣品、乙醇洗脫液樣品。用毛細(xì)管從中取大約4μL 溶液點(diǎn)在分別點(diǎn)于同一CmC－Na為粘合劑的含2%NaOH 的硅膠G 薄層板硅膠G薄層板同一起跑線上。以氯仿：正丁醇：甲醇（3：5：2）為展開(kāi)劑，于室溫（25℃）上行法展開(kāi)，展程約15cm，取出晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，只有乙醇洗脫液樣品有熒光顯示，而上樣收集物及水洗脫物相應(yīng)位置未發(fā)現(xiàn)有熒光斑點(diǎn)。然后噴以改良的碘化鉍鉀顯色，可見(jiàn)只有乙醇洗脫濃縮液樣品的最上方有黃褐色斑點(diǎn)，由以上的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象可以推斷出白飯樹(shù)中的生物堿主要在乙醇洗脫液中，為進(jìn)一步研究白飯樹(shù)生物堿的藥理活性做好準(zhǔn)備。

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)采用打孔樹(shù)脂對(duì)白飯樹(shù)生物堿進(jìn)行了分離，結(jié)果顯示分離效果良好，去除了提取物中的大部分雜質(zhì)，得到了固體狀的總生物堿，為下一步進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)做好準(zhǔn)備，為白飯樹(shù)在制劑中的利用提供了有效途徑。

本實(shí)驗(yàn)首次利用薄層色譜法鑒定了白飯樹(shù)提取物，所用分離系統(tǒng)分離效果良好，在紫外燈下可見(jiàn)清晰的熒光斑點(diǎn)，對(duì)白飯樹(shù)在制劑研發(fā)中的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

［1］ 中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志［M］.北京：科學(xué)出版社，1997：68－72.

［2］ 中華本草編委會(huì).中華本草［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：858－859.

［3］ 張慶榮，夏光成.有毒中草藥彩色圖鑒（第二版）［M］.天津科技翻譯出版公司，2006：112.

［4］ 陳夢(mèng)青，侯林林.白飯樹(shù)化學(xué)成分的研究［J］.植物學(xué)報(bào)，1985：228.