• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    滅活的雙歧桿菌對小鼠腸液中分泌型IgA水平的影響

    2012-12-27 02:43:54王麗紅
    大連大學學報 2012年3期
    關鍵詞:腸液活菌菌液

    孫 杰,王麗紅,官 娜,黃 敏*

    (1. 大連港醫(yī)院 檢驗科,遼寧 大連 116013;2. 大連醫(yī)科大學 微生物學教研室,遼寧 大連 116027)

    滅活的雙歧桿菌對小鼠腸液中分泌型IgA水平的影響

    孫 杰1,王麗紅1,官 娜1,黃 敏2*

    (1. 大連港醫(yī)院 檢驗科,遼寧 大連 116013;2. 大連醫(yī)科大學 微生物學教研室,遼寧 大連 116027)

    為觀察滅活的雙歧桿菌對小鼠腸液中SIgA水平的影響,將小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺造成免疫抑制動物模型,分別以新鮮BS肉湯培養(yǎng)基、耗盡培養(yǎng)上清(SCS)以及死、活雙歧桿菌菌液進行灌胃。采用雙抗體夾心法合并間接法檢測腸液中SIgA的含量。結果顯示滅活的雙歧桿菌與雙歧桿菌活菌均可提高免疫抑制小鼠腸液中SIgA的含量, 二者的作用效果差異無顯著性(P>0.05),SCS也具有一定的免疫促進作用,但與雙歧桿菌活菌相比差異有顯著性(P<0.05)。滅活的雙歧桿菌具有與雙歧桿菌活菌相同或相近的免疫學活性,兩者均可提高小鼠腸液中SIgA水平。

    雙歧桿菌;滅活;免疫抑制;分泌型IgA

    雙歧桿菌作為人和動物腸道中最重要的生理性細菌之一,在腸道內(nèi)參與宿主的消化、營養(yǎng)、代謝、吸收、免疫及抗感染過程。將雙歧桿菌作為生物反應調(diào)節(jié)劑經(jīng)口服或經(jīng)非胃腸道途徑給予宿主,可激活機體免疫系統(tǒng)中的淋巴細胞、巨噬細胞及NK細胞等多種免疫效應細胞,使之分泌IL-21、IL-22、IL-26、IFN-2[1]等多種細胞因子以及在粘膜表面產(chǎn)生分泌型IgA(Secretory IgA, SIgA)[2],從而提高機體局部或全身的防御功能,發(fā)揮自穩(wěn)調(diào)節(jié)、抗感染、抗腫瘤效應。目前廣泛使用的雙歧桿菌活菌制劑存在著有效期短、含菌量不穩(wěn)定、易被其他細菌污染等缺點。本文主要通過研究滅活的青春雙歧桿菌DM8504對Balb/c小鼠腸液中SIgA水平的影響,以確定滅活的雙歧桿菌是否具有與活菌相同或相近的免疫學效應。

    1 材料與方法

    1.1 菌種

    雙歧桿菌DM8504菌株為大連醫(yī)科大學微生態(tài)學研究所保存菌種。經(jīng)中國科學院微生物研究所鑒定,該菌株屬于青春型雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)。

    1.2 實驗動物

    純系Balb/c小鼠,6~8周齡,體重18~22g,雌雄各半,購自大連醫(yī)科大學實驗動物中心。

    1.3 主要試劑

    Purified Mouse IgA、Rat Anti-Mouse IgA、Goat Anti-Mouse IgA、Rabbit Anti-Goat IgG-HRP均購自美國BD公司,其它試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.4 雙歧桿菌培養(yǎng)

    將雙歧桿菌接種至BS肉湯培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)48h。將菌液4 000 rpm離心10 min,分離得到耗盡培養(yǎng)上清(Spent Culture Supernatant,SCS)備用。用PBS重懸雙歧桿菌沉淀,所得菌懸液分為活菌(Bifidobacteria, Bif)組和滅活菌(Heatkilled Bifidobacteria, HBif)組。將HBif組置于65℃水浴,30 min滅活處理(經(jīng)BS肉湯檢菌,證明無活菌存在,并且仍保持正常細菌形態(tài))。將處理后的HBif組和Bif組菌液4 000 rpm離心10 min,棄上清,用SCS重懸雙歧桿菌沉淀,調(diào)整兩組菌懸液濃度均為1×109CFU/mL。

    1.5 實驗動物分組與造模

    將50只純系Balb/c小鼠隨機分為5組,每組10只,雌雄各半,分別為生理鹽水(NS)組、環(huán)磷酰胺(CTX)組、耗盡培養(yǎng)上清(SCS)組、滅活菌(HBif)組、活菌(Bif)組。NS組小鼠腹腔注射無菌NS 0.3mL/只,其余四組小鼠分別腹腔注射CTX溶液(5 mg/mL)0.3 mL/只,1次/天,連續(xù)3天。從第4天起NS組和CTX組小鼠用新鮮BS肉湯培養(yǎng)基灌胃,SCS組小鼠用SCS灌胃,HBif組和Bif組小鼠分別用1×109CFU/mL滅活的雙歧桿菌菌液和雙歧桿菌活菌液灌胃,均為0.5 mL/只,連續(xù)14天。

    1.6 檢測小鼠腸液中SIgA水平

    將免疫后的小鼠摘眼球處死,取盲腸和回腸末端5 cm腸段。將腸管內(nèi)翻暴露腸內(nèi)壁,用5mLNS沖洗腸內(nèi)壁20次。將所得沖洗液3000 rpm離心10 min,取上清,分裝5個冷凍真空干燥小瓶,1mL/瓶,經(jīng)冷凍真空干燥得粉末。測定時每瓶中加入0.5mLNS,使粉末完全溶解,得到檢測樣品。以雙抗體夾心法合并間接法檢測SIgA,具體操作按余賀等方法[3],個別步驟略有改動。將200 ng/mL的Rat-Anti-Mouse IgA加入96孔板中,100 uL/孔,4℃ 24h。洗板3次,每孔中加入100 uL1%牛血清白蛋白(BSA)封閉板,37℃ 2h。洗板3次,將檢測樣品和不同稀釋度的標準品(0、5、10、20、40、80、160、320、640 ng/mL)加入相應的孔中,100 uL/孔,室溫(20~25℃)2h。洗板3次,每孔中加入100 ng/mL的Goat-Anti-Mouse IgA100 uL,室溫(20~25℃)1h。洗板3次,每孔中加入稀釋度為1:6000的檢測工作液即Rabbit-Anti-Goat IgG-HRP 100uL,室溫(20~25℃)1h。洗板3次,每孔中加入底物液TMB100 uL,避光,室溫放置15 min。加入50 uL終止液(2mol/LH2SO4),混勻后即刻(5 min內(nèi))測量OD值(測定波長為450 nm)。

    1.7 統(tǒng)計方法

    所有結果均以均值±標準誤(X±SE)表示,多組間兩兩比較用q-test。所有數(shù)據(jù)均用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行分析。

    2 結果

    結果表明(見表1),CTX可降低小鼠腸液中SIgA的含量,與NS組相比具有顯著性差異(P<0.01)。SCS、HBif和Bif均可提高免疫低下小鼠腸液中SIgA的含量,與SCS組相比,HBif和Bif的作用效果較強,具有顯著性差異(P<0.01)。HBif與Bif相比,后者對SIgA含量的提高效果更明顯,但兩者無顯著性差異(P>0.05)。

    表1 滅活的雙歧桿菌對小鼠腸液中SIgA水平的影響

    3 討論

    雙歧桿菌作為一種革蘭氏陽性益生菌,是人和動物腸道中正常菌群的重要組成部分。雙歧桿菌具有明顯的免疫賦活作用,可提高機體局部或全身的防御功能,發(fā)揮自穩(wěn)調(diào)節(jié)、抗感染、抗腫瘤效應。雙歧桿菌粘附于腸上皮細胞后,可穿越M細胞,從而激活免疫系統(tǒng),引發(fā)一系列免疫反應。目前已有實驗證實滅活的雙歧桿菌具有與活菌相同的粘附于腸上皮細胞的能力[4]。

    分泌型SIgA作為粘膜免疫系統(tǒng)中的主要抗體類型之一,能抵抗腸道蛋白酶的分解作用,在粘膜免疫中起著重要的作用。然而除了母乳喂養(yǎng)嬰兒之外,機體獲得外源性SIgA的方式是非常有限的。主要是通過激活機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生內(nèi)源性SIgA,這種方式對宿主免疫系統(tǒng)的發(fā)育和成熟是非常有效的,而且其效應是長期的。由結果可知,小鼠經(jīng)雙歧桿菌灌胃后可刺激腸粘膜分泌大量的SIgA。E-JKO等認為雙歧桿菌對腸粘膜中的B細胞具有促有絲分裂活性,從而提高B細胞合成分泌SIgA的能力,這一過程需要CD4+T細胞及其分泌的多種細胞因子的參與[5]。研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)65℃30 min熱處理滅活的雙歧桿菌提高機體免疫力的能力絲毫不遜于雙歧桿菌活菌,表明雙歧桿菌作為益生菌制劑的常用菌種, 并非必須采用活菌,而且死菌本身具有極高的穩(wěn)定性和安全性, 這就為死菌制劑的廣泛應用奠定了基礎。此外,不僅雙歧桿菌可提高機體的免疫力,雙歧桿菌的SCS對機體的免疫力也有一定的調(diào)節(jié)作用,這與前期研究結果相一致[6]。

    已有研究表明,在對數(shù)期時活菌的免疫活性高于死菌,而在靜止期時死菌的免疫活性高于活菌,但若想達到相同的免疫效應水平,死菌的濃度一般都需高于活菌[7]。由此可以推測,細菌的生長階段對其生物學活性有著較強的影響。細菌與細胞間的相互作用是由菌體表面的熱敏感結構介導的,然而其作用的強弱程度可能是由其中的耐熱成分決定的。因此,在靜止期經(jīng)熱處理滅活的較高濃度的死菌可具有與活菌相同的免疫學效應。

    [1] PLANTINGA TS, VAN MAREN WW, VAN BERGENHENEGOUWEN J, et al. Differential Toll-like receptor recognition and induction of cytokine profile by Bifidobacterium breve and Lactobacillus strains of probiotics [J]. Clinical and Vaccine Immunology, 2011, 18(4): 621-628.

    [2] YANG H, LIU A, ZHANG M, et al. Oral administration of live Bifidobacterium substrains isolated from centenarians enhances intestinal function in mice [J]. Current Microbiology, 2009, 59(4): 439-445.

    [3] 余賀, 謝少文, 楊貴貞, 等. 臨床免疫技術[M]. 上??茖W技術出版社, 1982: 210-213.

    [4] 倫永志, 黃敏, 袁杰利, 等. 滅活的青春雙歧桿菌對人大腸癌細胞的粘附[J]. 微生物學通報, 2003, 30(4): 55-59.

    [5] KO E J, GOH JS, LEE B J, et al. Bifidobacterium bifidum exhibits a Lipopolysaccharide-like mitogenic activity for murine B lymphocytes[J]. Journal of Dairy Science, 1999, 82(9): 1869-1876.

    [6] 紀芳, 黃敏, 倫永志, 等. 滅活的雙歧桿菌對小鼠血清中細胞因子水平的影響[J]. 中國微生態(tài)學雜志, 2003, 15(2): 78-79.

    [7] HALLER D, BODE C, HAMMES WP. Cytokine secretion by stimulated monocytes depends on the growth phase and heat treatment of bacteria: A comparative study between Lactic Acid Bacteria and invasive pathogens [J]. Microbiology and Immunology, 1999, 43(10): 925-935.

    Effect of Heat-killed Bifidobacterium on the Production of SIgA in Intestinal Juice of Mice

    SUN Jie1, WANG Li-hong1, GUAN Na1, HUANG Min2*

    (1.Department of Clinical Laboratory, Dalian Port Hospital, Dalian 116013, China; 2. Department of Microbiology, Dalian Medical University, Dalian 116027, China)

    To explore the effect of heat-killed bifidobacteria on the production of SIgA in intestinal juice of mice. Got immunosuppressing mice by intraperitoneally in jecting CTX. Five groups of mice were administrated orally with fresh BS culture medium、SCS、heat-killed bifidobacteria and live bifidobacteria. Evaluated the production SIgA of by double antibody sandwich methods and indirect of ELISA assay. Both heat-killed bifidobacteria and live bif ido bacteria could increase the production of SIgA, but there was no significant difference between two groups (P>0.05). SCS could improve the immunity of immunosuppressing mice in some degree, bu t it was a little weaker (P<0.05). Heat-killed bifidobacteria and live bifidobacteria had the same or similar biological activity and both could improve the production of SIgA in intestinal juice of mice.

    Bifidobacterium; heat-killed; immunosuppression; secretory IgA

    Q939.9

    A

    1008-2395(2012)03-0053-03

    2012-04-10

    孫杰(1978-),女,主管檢驗師,研究方向:臨床微生物檢驗。

    黃敏(1955-),男,教授,博士生導師,研究方向:生物因素抗腫瘤研究。

    猜你喜歡
    腸液活菌菌液
    多糖微生物菌液對油菜吸收養(yǎng)分和土壤氮磷淋失的影響
    運用OD值法快速進行乳酸菌活菌計數(shù)的研究
    Bonfire Night
    鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗中通過吸光度值測定菌液濃度的方法研究
    藏藥佐太在模擬胃液、腸液中的汞溶出差異
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:28
    復合微生物菌液對黃瓜生長和抗病蟲性效應研究
    上海蔬菜(2015年2期)2015-12-26 05:03:40
    生長豬空腸液中主要消化酶活性與飼糧養(yǎng)分消化率的相關性研究
    雙歧三聯(lián)活菌聯(lián)合硝苯地平治療腹瀉型腸易激綜合征的臨床效果
    雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合多潘立酮治療新生兒喂養(yǎng)不耐受40例
    口服洗腸液在結腸鏡檢查前腸道準備中的應用及護理進展
    国产日韩欧美亚洲二区| 国产成人精品无人区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 久久九九热精品免费| av福利片在线| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 日韩免费高清中文字幕av| 久久久久久久国产电影| 久久女婷五月综合色啪小说| 性少妇av在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 丝袜美足系列| 国产高清视频在线播放一区 | 欧美乱码精品一区二区三区| 丝袜喷水一区| 男女下面插进去视频免费观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 99久久综合免费| 午夜精品国产一区二区电影| 国产男女超爽视频在线观看| 成人国语在线视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 99久久综合免费| www.自偷自拍.com| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 悠悠久久av| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 亚洲黑人精品在线| 欧美另类一区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 他把我摸到了高潮在线观看 | 男女国产视频网站| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲国产成人一精品久久久| 色播在线永久视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 午夜91福利影院| 黄色视频在线播放观看不卡| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成人国产一区最新在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 美国免费a级毛片| 国产日韩欧美亚洲二区| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产真人三级小视频在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 午夜成年电影在线免费观看| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲久久久国产精品| 大香蕉久久成人网| xxxhd国产人妻xxx| 国产深夜福利视频在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 欧美黄色淫秽网站| 老司机在亚洲福利影院| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲精品久久午夜乱码| 国产在线一区二区三区精| videosex国产| 国产成人欧美在线观看 | 久久青草综合色| 悠悠久久av| 国产三级黄色录像| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 午夜福利影视在线免费观看| 国产免费av片在线观看野外av| 一级,二级,三级黄色视频| 中文字幕最新亚洲高清| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产三级黄色录像| 女人精品久久久久毛片| 欧美精品亚洲一区二区| 国产91精品成人一区二区三区 | av在线播放精品| 久久久久久久国产电影| 国产亚洲精品久久久久5区| 婷婷丁香在线五月| 国产精品一二三区在线看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 精品久久久久久电影网| 成人黄色视频免费在线看| 天堂中文最新版在线下载| 久久精品人人爽人人爽视色| 大型av网站在线播放| 成人黄色视频免费在线看| 色综合欧美亚洲国产小说| 脱女人内裤的视频| 精品久久久精品久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产欧美日韩一区二区三 | 精品国产乱码久久久久久男人| 国产精品亚洲av一区麻豆| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 日韩三级视频一区二区三区| 女人精品久久久久毛片| 亚洲五月色婷婷综合| 人妻一区二区av| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 嫩草影视91久久| 91av网站免费观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 日本一区二区免费在线视频| www日本在线高清视频| 国产av一区二区精品久久| a在线观看视频网站| 国产99久久九九免费精品| 自线自在国产av| 最近中文字幕2019免费版| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 91麻豆av在线| 动漫黄色视频在线观看| 91av网站免费观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 成年av动漫网址| 免费观看av网站的网址| 天堂8中文在线网| 久久人人97超碰香蕉20202| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产激情久久老熟女| 激情视频va一区二区三区| www.av在线官网国产| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产又爽黄色视频| 美女中出高潮动态图| 大香蕉久久网| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 这个男人来自地球电影免费观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| av国产精品久久久久影院| 午夜两性在线视频| 在线观看免费视频网站a站| 日韩视频一区二区在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 9色porny在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 啦啦啦免费观看视频1| 男女之事视频高清在线观看| 女人精品久久久久毛片| 色播在线永久视频| 亚洲三区欧美一区| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 大香蕉久久成人网| 91麻豆av在线| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 精品视频人人做人人爽| 五月开心婷婷网| 国产精品成人在线| 亚洲国产欧美在线一区| 久久久久久久精品精品| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 老司机靠b影院| 大码成人一级视频| 久久久久久久久免费视频了| 99久久综合免费| 久久久久网色| 老熟女久久久| 久久中文看片网| 国产黄色免费在线视频| 国产精品免费大片| 色老头精品视频在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 91成年电影在线观看| 女警被强在线播放| 脱女人内裤的视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 男女床上黄色一级片免费看| 黄片大片在线免费观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 一级a爱视频在线免费观看| 午夜免费观看性视频| 国产av精品麻豆| 视频区图区小说| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 青春草亚洲视频在线观看| 手机成人av网站| 一区福利在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| av在线app专区| 中国美女看黄片| 精品少妇内射三级| 国产精品二区激情视频| 多毛熟女@视频| 成年av动漫网址| a级毛片在线看网站| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲人成电影观看| 精品久久蜜臀av无| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 精品一区二区三卡| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 性色av乱码一区二区三区2| 叶爱在线成人免费视频播放| 一级片免费观看大全| 欧美中文综合在线视频| 亚洲中文字幕日韩| 午夜福利在线免费观看网站| 老司机午夜十八禁免费视频| 91大片在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产精品久久久久久精品古装| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品福利永久在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 男女国产视频网站| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产一卡二卡三卡精品| 男女免费视频国产| 久久ye,这里只有精品| 婷婷成人精品国产| 大陆偷拍与自拍| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美成人午夜精品| avwww免费| 日韩大码丰满熟妇| svipshipincom国产片| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 乱人伦中国视频| 99国产精品免费福利视频| 黄频高清免费视频| 日韩大码丰满熟妇| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 在线观看免费视频网站a站| 日韩视频一区二区在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 在线观看舔阴道视频| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲视频免费观看视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 后天国语完整版免费观看| 99久久综合免费| 国产在线一区二区三区精| 男女免费视频国产| 日本av免费视频播放| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 99国产精品免费福利视频| 操美女的视频在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 老司机深夜福利视频在线观看 | 黑人猛操日本美女一级片| 午夜激情av网站| 日韩视频在线欧美| 伊人亚洲综合成人网| 国产成人免费观看mmmm| www.熟女人妻精品国产| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 中亚洲国语对白在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲 国产 在线| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 免费不卡黄色视频| 色播在线永久视频| 欧美性长视频在线观看| 黄色 视频免费看| 亚洲av美国av| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 正在播放国产对白刺激| 色播在线永久视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 考比视频在线观看| 久久久国产成人免费| 窝窝影院91人妻| 免费在线观看影片大全网站| 国产一区二区激情短视频 | 黄色 视频免费看| 香蕉丝袜av| 一区在线观看完整版| 久久影院123| 高清在线国产一区| 免费在线观看日本一区| 精品欧美一区二区三区在线| 超碰成人久久| 少妇 在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 久久国产精品大桥未久av| 国产成人影院久久av| 亚洲综合色网址| 欧美人与性动交α欧美软件| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 18在线观看网站| 91精品伊人久久大香线蕉| avwww免费| 99精品久久久久人妻精品| 久久久久网色| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲黑人精品在线| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲男人天堂网一区| 国产成人影院久久av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 正在播放国产对白刺激| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产91精品成人一区二区三区 | 成年人黄色毛片网站| 中文字幕高清在线视频| tube8黄色片| 日韩人妻精品一区2区三区| 91大片在线观看| 老熟女久久久| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲,欧美精品.| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲成人手机| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 满18在线观看网站| 国产成人免费无遮挡视频| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美中文综合在线视频| 老司机靠b影院| 免费观看人在逋| www.熟女人妻精品国产| av免费在线观看网站| 考比视频在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 人妻 亚洲 视频| 国产一区二区在线观看av| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 午夜福利在线免费观看网站| 国产区一区二久久| 亚洲精品第二区| 性色av乱码一区二区三区2| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产av又大| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品人妻在线不人妻| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久青草综合色| 亚洲精品中文字幕在线视频| 黄片小视频在线播放| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产男人的电影天堂91| 久久精品国产综合久久久| 免费黄频网站在线观看国产| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 天堂8中文在线网| h视频一区二区三区| 国产成人av教育| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 亚洲国产av新网站| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 超色免费av| 搡老熟女国产l中国老女人| 在线永久观看黄色视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 一边摸一边抽搐一进一出视频| www.av在线官网国产| 多毛熟女@视频| av在线app专区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 十分钟在线观看高清视频www| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 成年动漫av网址| √禁漫天堂资源中文www| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 老司机福利观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 搡老乐熟女国产| 久热这里只有精品99| 亚洲精品国产色婷婷电影| 18禁国产床啪视频网站| 国产99久久九九免费精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 丰满少妇做爰视频| 永久免费av网站大全| 欧美日韩精品网址| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲专区中文字幕在线| 国产97色在线日韩免费| 国产主播在线观看一区二区| 搡老乐熟女国产| 99re6热这里在线精品视频| 日日夜夜操网爽| 国产精品一区二区在线观看99| 一本综合久久免费| 老鸭窝网址在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 久久精品亚洲av国产电影网| 老熟妇仑乱视频hdxx| 极品人妻少妇av视频| 波多野结衣av一区二区av| 欧美一级毛片孕妇| kizo精华| 午夜福利视频精品| 大陆偷拍与自拍| 老司机亚洲免费影院| 亚洲精华国产精华精| 国产精品国产三级国产专区5o| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 窝窝影院91人妻| 老司机影院毛片| 高清欧美精品videossex| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产欧美日韩一区二区精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 少妇的丰满在线观看| 日韩电影二区| 9色porny在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 午夜精品国产一区二区电影| 女人精品久久久久毛片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 欧美久久黑人一区二区| 午夜福利免费观看在线| 热99国产精品久久久久久7| 久久久久久久久久久久大奶| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日韩视频在线欧美| 精品第一国产精品| 五月开心婷婷网| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精品福利永久在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 性少妇av在线| 欧美黑人精品巨大| 淫妇啪啪啪对白视频 | 淫妇啪啪啪对白视频 | 国产av国产精品国产| 叶爱在线成人免费视频播放| av免费在线观看网站| 亚洲熟女精品中文字幕| 涩涩av久久男人的天堂| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲精品粉嫩美女一区| av不卡在线播放| 久久精品成人免费网站| 中文字幕制服av| 中文字幕色久视频| 亚洲,欧美精品.| 精品高清国产在线一区| 国产福利在线免费观看视频| 国产精品一二三区在线看| 午夜老司机福利片| 精品一品国产午夜福利视频| 黄片播放在线免费| 亚洲九九香蕉| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产淫语在线视频| 久久青草综合色| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| av免费在线观看网站| 99香蕉大伊视频| 亚洲第一av免费看| 精品第一国产精品| 国产精品av久久久久免费| 国产精品1区2区在线观看. | 黄色视频,在线免费观看| 午夜激情av网站| 69精品国产乱码久久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲国产av新网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产1区2区3区精品| 大型av网站在线播放| 999精品在线视频| 各种免费的搞黄视频| 宅男免费午夜| 丰满少妇做爰视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| av线在线观看网站| 精品一区在线观看国产| 91成年电影在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久9热在线精品视频| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美久久黑人一区二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美国产精品va在线观看不卡| 成年人黄色毛片网站| av在线老鸭窝| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲欧美精品自产自拍| 悠悠久久av| 人妻久久中文字幕网| 亚洲精品美女久久av网站| www日本在线高清视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 美女午夜性视频免费| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲七黄色美女视频| 热re99久久精品国产66热6| av片东京热男人的天堂| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲av成人一区二区三| 1024视频免费在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 久久影院123| 欧美激情高清一区二区三区| 热re99久久精品国产66热6| 国产成人欧美在线观看 | 精品视频人人做人人爽| 免费在线观看日本一区| 交换朋友夫妻互换小说| 嫩草影视91久久| av一本久久久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 国产在线免费精品| 久热爱精品视频在线9| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲精品一二三| 午夜福利影视在线免费观看| 后天国语完整版免费观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久 成人 亚洲| 久久久久久久久久久久大奶| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 青春草亚洲视频在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 少妇粗大呻吟视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 女人久久www免费人成看片| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲国产av影院在线观看| 久久久欧美国产精品| 一本久久精品| 一区在线观看完整版| 精品一品国产午夜福利视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 91国产中文字幕| 国产成人系列免费观看| 一区二区三区四区激情视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 97在线人人人人妻| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| cao死你这个sao货| 亚洲伊人色综图| 青春草亚洲视频在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久久久久大尺度免费视频| 黑人猛操日本美女一级片| 俄罗斯特黄特色一大片| 老司机靠b影院| svipshipincom国产片| 亚洲九九香蕉| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 老司机影院毛片| 欧美日韩黄片免| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 老司机深夜福利视频在线观看 | 青春草视频在线免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品成人在线| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲欧美一区二区三区久久| 男人操女人黄网站| 午夜福利一区二区在线看| 一本大道久久a久久精品| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产一卡二卡三卡精品| 老司机影院成人| 国产一区二区在线观看av| 91精品三级在线观看| 国产精品免费视频内射| 一本色道久久久久久精品综合| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美黄色淫秽网站| 国产一区二区激情短视频 | e午夜精品久久久久久久| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美精品亚洲一区二区|