山楂葉黃酮類化合物對小鼠血清及肝組織SOD、MDA水平的影響

高天曙，王宏賢

(1．河南省中醫(yī)院，河南鄭州 45000;2．河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州 450000)

山楂葉是薔薇科植物山楂的干燥葉。研究［1］表明，山楂葉具有活血化瘀，擴張及軟化血管，降低血壓、膽固醇等多種作用，而黃酮類化合物是以洋芹素和木犀草素為苷元的一系列苷類，是山楂屬植物最主要的化學成分。有文獻［2］報道，山楂葉黃酮類化合物具有清除羥自由基和超氧自由基、提高機體抗氧化能力、維持體內(nèi)氧化—抗氧化系統(tǒng)平衡作用。本實驗采用超聲乙醇法提取山楂葉黃酮類化合物(以下簡稱HLF)，研究了其對小鼠血清及肝組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影響，以期為山楂葉的臨床及保健應用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 動 物

普通級昆明種小鼠50只，鼠齡3個月，體質量(25±2)g，購自鄭州大學第一附屬醫(yī)院實驗動物中心(醫(yī)動字號2011-036號)。小鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水及進食，房間濕度50%左右，溫度(25±1)℃，實驗室適應性飼養(yǎng)1周后用于實驗。

1．2 藥品、試劑與儀器

山楂葉均自野外采摘。將采摘收集的新鮮山楂葉用自來水清洗晾干后，放置于恒溫干燥箱60℃下干燥、粉碎成40目干粉備用。SOD、MDA試劑盒，購自南京建成生物工程有限公司，批號091223。島津UV-2001型紫外可見分光光度計，產(chǎn)地日本;METTLER AE 240萬分之一精密天平，梅特勒—托利多上海儀器有限公司產(chǎn)品。

1．3 HLF 的提取

精密稱取山楂葉干粉20 g，置于250 mL具塞錐形瓶中，加入800 g/L乙醇50 mL，避光浸泡30 min，450 W超聲提取30 min，過濾，濾液用800 g/L乙醇定容至50 mL，即得。

1．4 動物分組、造模與給藥

將適應性飼養(yǎng)1周后的小鼠隨機分為空白對照組、模型對照組、HLF低劑量組(400 μg/g)、HLF 中劑量組(800 μg/g)及 HLF高劑量組(1 200 μg/g)5組，每組10只。模型對照組和各劑量藥物組小鼠每天頸背部皮下注射50 g/L D-半乳糖0．5 mL，空白對照組注射等量生理鹽水，連續(xù)給藥15 d。各劑量藥物組每天灌胃給以HLF(0．02 mL/g)，空白對照組及模型對照組灌胃給以等量生理鹽水，連續(xù)給藥15 d。

1．5 檢測指標

末次給藥24 h后處死動物，分別取小鼠血液及肝組織(制備10 g/L肝組織勻漿)。小鼠血清及肝組織SOD、MDA水平檢測嚴格按照試劑盒說明進行。

1．6 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13．0統(tǒng)計分析軟件處理。計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)()±標準差(s)表示，組間比較采用t檢驗。以P＜0．05為差別有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 HLF對小鼠肝組織SOD、MDA水平的影響

與空白對照組對比，模型對照組SOD活力下降，MDA水平升高，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．01或P＜0．05)，提示造模成功。與模型對照組對比，HLF高、中、低劑量組小鼠肝組織中SOD活性增加，MDA水平降低，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．01或 P＜0．05)。見表1。

表1 各組小鼠肝組織SOD、MDA水平對比 ±s

表1 各組小鼠肝組織SOD、MDA水平對比 ±s

注：與模型對照組對比，*P ＜0．05，＊＊ P ＜0．05。

組 別 動物數(shù) SOD/(U·mL-1) MDA/(μmol·L-1)空白對照組 10 97．56±5．29＊＊ 6．36±0．52＊＊模型對照組 10 39．32 ±10．18 8．85 ±0．42 HLF 低劑量組 10 76．29 ±11．26* 6．21 ±0．36＊＊HLF中劑量組 10 85．36±12．07＊＊ 6．83±0．31＊＊HLF高劑量組 10 90．05±13．95＊＊ 6．73±0．31＊＊

2．2 HLF對小鼠血清SOD、MDA水平的影響

與模型對照組對比，HLF高、中劑量組小鼠血清SOD水平顯著提高，MDA水平降低，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)，而低劑量組血清SOD、MDA水平與模型對照組對比，差別無統(tǒng)計學意義(P＞0．05)。見表2。

表2 各組小鼠血清SOD、MDA水平對比 ±s

表2 各組小鼠血清SOD、MDA水平對比 ±s

注：與模型對照組對比，*P ＜0．05，＊＊ P ＜0．01。

組 別 動物數(shù) SOD/(U·mL-1) MDA/(μmol·L-1)空白對照組 10 796．38 ±16．25* 671．36 ±41．52*模型對照組 10 439．19 ±25．18 520．85 ±35．42 HLF 低劑量組 10 472．15 ±25．26* 528．39±41．36 HLF中劑量組 10 636．36±31．07＊＊ 736．15±35．31＊＊HLF高劑量組 10 683．56±28．96＊＊ 775．73±42．31＊＊

3 討論

在正常生理情況下，生物體內(nèi)的氧化—抗氧化系統(tǒng)保持著動態(tài)平衡。自由基是最外層軌道上未配對電子的原子、分子、離子或基團，具有較強的氧化能力［3］。在正常情況下，體內(nèi)所需要利用的自由基通常維持在一個有利無害的較低水平的動態(tài)生理濃度，對生物體細胞并無損害，并且生物體內(nèi)同時存在著一個內(nèi)源性的自由基清除系統(tǒng)，如SOD。SOD具有較強的抗氧化作用［4］，能夠清除體內(nèi)過剩的氧自由基及其衍生物，從而有效地防止或減輕體內(nèi)自由基所導致的氧化損傷。但在病理情況下，如腦出血、腦梗死等，機體短時間內(nèi)大量生成的自由基，超出了SOD的清除能力，必然使自由基生成與清除之間的平衡乃至機體氧化—抗氧化系統(tǒng)的動態(tài)平衡遭到破壞。大量自由基的強氧化作用使生物膜中的多不飽和脂肪酸形成脂質過氧化物MDA。MDA水平變化情況能反映出生物體內(nèi)脂質過氧化的程度，間接地反映出機體細胞受自由基攻擊和細胞損傷的嚴重程度。SOD是機體最重要的抗氧化酶，具有有效清除氧自由基、保護細胞膜結構和功能完整使其免于氧化損傷等作用。因此，SOD和MDA的水平變化能夠反映出體內(nèi)自由基的生成與清除，氧化—抗氧化系統(tǒng)平衡的動態(tài)變化情況［5］。

本實驗結果表明，HLF能夠顯著提高模型小鼠血清及肝組織SOD活性，降低模型小鼠血清及肝組織中MDA水平，提示HLF具有提高抗氧化能力、減輕自由基損傷、促進體內(nèi)氧化—抗氧化系統(tǒng)平衡恢復等作用，在臨床、保健等方面值得進一步研究與應用。

［1］張遠榮，蔣企洲．山楂葉黃酮的抗氧化作用［J］．藥學與臨床研究，2011，19(3)：287．

［2］葉希韻，王耀發(fā)．山楂葉總黃酮對血管內(nèi)皮細胞氧化損傷的保護作用［J］．中國現(xiàn)代應用藥學雜志，2002，19(4)：267．

［3］馬新方，李勇．魚腥草多糖體內(nèi)抗氧化活性研究［J］．中醫(yī)研究，2011，24(2)：20．

［4］吳丹，陳凱，王冬梅．腦梗塞病人血漿SOD和MDA水平測定分析［J］．承德醫(yī)學院學報，2006，23(4)：423．

［5］馬琳，張麗娥，劉勇，等．腦梗塞患者血漿β-內(nèi)啡肽及血清 MDA、SOD 的變化［J］．西安醫(yī)科大學學報，2000，21(3)：238．