玫瑰保春膠囊對更年期大鼠T-AOC、GSH-Px影響的研究*

陳雪娟，倪志宏

(甘肅中醫(yī)學院，甘肅 蘭州 730000)

更年期綜合征是婦女在絕經(jīng)前后由于雌激素水平波動或下降所致的以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主，伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群［1］。目前主要采用激素治療，但禁忌癥、副作用較多，長期替代治療可引起子宮內(nèi)膜增殖，大大增加了癌變的危險性。中醫(yī)學治療該病有較好療效。本研究小組在傳統(tǒng)驗方的基礎上，結合我院多年臨床經(jīng)驗研發(fā)了玫瑰保春膠囊。該藥主要由當歸、紅芪、百合、紅玫瑰、地龍、公丁香等按一定的工藝制成。本研究以去勢更年期大鼠為模型，通過觀察玫瑰保春膠囊對大鼠血清中GSH-Px活力、T-AOC含量及子宮指數(shù)的影響，以期探討玫瑰保春膠囊對更年期大鼠體內(nèi)抗氧化作用的影響，及其對內(nèi)分泌、卵巢功能和下丘腦—垂體—性腺軸的調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1．1 動物

健康Wistar雌性大鼠30只，11～12月齡，體質量180～200 g，由甘肅中醫(yī)學院實驗動物中心提供，質量合格證號：scxk(甘)2011-0001。

1．2 藥品、試劑與儀器

玫瑰保春膠囊濃度為0．5g生藥/mL;大豆異黃酮，南寧富萊欣生物科技有限公司產(chǎn)品，批號DL03118。水合氯醛，青島宇龍海藻有限公司產(chǎn)品，批號2010052501;T-AOC(批號20111027)和 GSHPx(批號20111107)檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。CT14RD臺式高速冷凍離心機，上海天美生化儀器設備工程有限公司產(chǎn)品;可見分光光度計(VIS-723N)，北京瑞利分析儀器公司產(chǎn)品;數(shù)顯恒溫水浴鍋，鄭州杜甫儀器廠產(chǎn)品。

1．3 模型的建立

采用切除雙側卵巢法建立更年期大鼠模型。用100 g/L水合氯醛按0．3 mg/g腹腔注射麻醉大鼠;將大鼠放在解剖板上，腹部向上，剪去腹部毛，用碘伏消毒后，依次剪開腹部皮膚和肌肉;用眼科鑷沿子宮角找到卵巢，結扎子宮角后，摘除卵巢(假手術組只切除少量脂肪組織);依次縫合肌肉和皮膚，縫合結束后用碘伏消毒、750 g/L酒精脫碘;用16萬單位/mL青霉素鈉清洗刀口，連續(xù)5 d。第6天開始做陰道細胞涂片：將無菌棉簽用生理鹽水浸濕后，伸入大鼠陰道，順時針方向旋轉1周;將棉簽上的分泌物涂在干凈的載玻片上，晾干，滴加美藍染液;染色15 min后，洗片，晾干后二甲苯樹脂封片;光學顯微鏡下觀察，隨機選擇5個視野，計算陰道脫落細胞角化細胞指數(shù)(CI)。以CI＜50%作為造模成功的標準。

1．4 動物分組與藥物干預

將30只大鼠隨機分為假手術組、去勢空白組(去勢組)、去勢+大豆異黃酮組(大豆異黃酮組)、去勢+玫瑰保春膠囊小劑量組(玫瑰保春膠囊小劑量組)和去勢+玫瑰保春膠囊大劑量組(玫瑰保春膠囊大劑量組)5組，每組6只。假手術組和去勢組給予生理鹽水0．01 mL/g體質量，大豆異黃酮組給予大豆異黃酮0．4 mg/g體質量，玫瑰保春膠囊小、大劑量組依次給予2．5，7．5 mg生藥/g體質量。每天灌胃1次，連續(xù)15 d。

1．5 檢測指標

大鼠干預結束后，腹主動脈取血，2 500 r/min、離心10 min取血清，-20℃保存?zhèn)溆?采用分光光度法、嚴格按試劑盒說明書測定血清中T-AOC和GSH-Px水平。稱取子宮濕質量并計算子宮指數(shù)，計算公式為：子宮指數(shù)=子宮濕質量(g)/體質量(g)×100%。

1．6 統(tǒng)計學方法

2 結果

2．1 玫瑰保春膠囊對更年期大鼠子宮指數(shù)的影響

與假手術組對比，其余各組子宮指數(shù)明顯下降，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)。與去勢組對比，各藥物干預組子宮指數(shù)增加，其中玫瑰保春膠囊大劑量組較之差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)。與大豆異黃酮組對比，玫瑰保春膠囊大劑量組子宮指數(shù)增加，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)。見表1。

表1 各組大鼠子宮指數(shù)對比 ±s

表1 各組大鼠子宮指數(shù)對比 ±s

注：與假手術組對比，* P ＜0．05;與去勢組對比，#P ＜0．05;與大豆異黃酮組對比，△△ P＜0．01。

組 別 動物數(shù) 子宮指數(shù)假手術組5 0．226 ±0．069去勢組 6 0．043 ±0．008*大豆異黃酮組 6 0．046 ±0．003*玫瑰保春膠囊小劑量組 5 0．051 ±0．005*玫瑰保春膠囊大劑量組 6 0．059 ±0．005*#△△

2．2 玫瑰保春膠囊對更年期大鼠血清 T-AOC、GSH-Px的影響

與假手術組對比，其余各組血清T-AOC含量降低，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．01);與去勢組對比，各藥物干預組血清T-AOC含量增加，其中玫瑰保春膠囊大劑量組較之差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．01);與大豆異黃酮組對比，玫瑰保春膠囊大劑量組TAOC含量高，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)。

與假手術組對比，其余各組血清GSH-Px活力下降，其中去勢組、大豆異黃酮組和玫瑰保春膠囊小劑量組差別有統(tǒng)計學意義(P＜0．05或P＜0．01);與去勢組對比，各藥物干預組血清中GSH-Px活力增加，但差別無統(tǒng)計學意義;與大豆異黃酮組對比，玫瑰保春膠囊大劑量組GSH-Px高，差別有統(tǒng)計學意義(P ＜0．01)。見表2。

表2 各組大鼠血清T-AOC及SH-Px對比U·mL-1，±s

表2 各組大鼠血清T-AOC及SH-Px對比U·mL-1，±s

注：與假手術組對比，*P ＜0．05，＊＊ P ＜0．01;與去勢組對比，##P ＜0．01;與大豆異黃酮組對比，△△ P＜0．01。

組 別 動物數(shù)T-AOC GSH-Px假手術組5 10．422 ±0．830 1 607．619 ±50．238去勢組 6 6．907±0．685＊＊ 1 280．714±163．86*大豆異黃酮組 6 7．297±0．766＊＊ 1 380．952±26．255＊＊玫瑰保春膠囊小劑量組 5 7．104±0．650＊＊ 1 374．286±31．515＊＊玫瑰保春膠囊大劑量組 6 8．757±0．614＊＊##△△ 1 553．175±22．420△△

3 討論

玫瑰保春膠囊主要由當歸、紅芪、百合等組方而成。方中當歸，主要成分為多種有機酸、脂類、糖和多種氨基酸［2］，具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、養(yǎng)血滋補和抗氧化等功能［3-5］;紅芪主要活性成分為紅芪多糖，具有增強機體免疫力、抗衰老、抗氧化和清除自由基等作用［6-8］;百合主要活性成分為百合多糖，可增強機體免疫調(diào)節(jié)作用、抗腫瘤和抗氧化活性等［9-11］。

更年期的最早變化是卵巢功能衰退，然后才表現(xiàn)為下丘腦和垂體功能退化。內(nèi)分泌和臨床方面的變化均源于卵巢的衰老。體內(nèi)自由基的含量與組織器官衰老有密切關系，體內(nèi)氧自由基含量增多，組織抗氧化酶活性下降，導致卵巢組織衰老，雌激素分泌下降是一個重要因素［12-13］。自由基與體內(nèi)物質(如核酸、蛋白質和脂質等)發(fā)生反應，生成氧化物或過氧化物，對機體造成損害，導致生物體衰老死亡。T-AOC從總體上反映機體防御系統(tǒng)抗氧化能力的水平;GSH-Px可阻斷線粒體在呼吸鏈電子傳遞過程中產(chǎn)生各種自由基的鏈式反應，使細胞免受過氧化物的損傷［14-15］。

本研究結果顯示，去勢更年期大鼠子宮指數(shù)、血清中GSH-Px活力和T-AOC含量明顯減少，機體抗氧化能力顯著降低，其機制有待于進一步探討;去勢組給予大豆異黃酮和玫瑰保春膠囊后，血清中GSHPx活力和T-AOC含量得到一定程度提高，且玫瑰保春膠囊大劑量組效果較為顯著。綜上可知，玫瑰保春膠囊具有較強的抗氧化和清除自由基作用，可增強更年期大鼠抗氧化能力，從而在一定程度上延緩和改善了卵巢功能衰退。

［1］衛(wèi)生部繼續(xù)教育委員會．女性生殖內(nèi)分泌性激素補充療法［M］．北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社，1999．

［2］韋偉，龔蘇曉，張鐵軍，等．當歸多糖成分及其藥理作用研究進展［J］．藥物評價研究，2009，32(2)：130-134．

［3］萬曉青，張偉．當歸對血液系統(tǒng)的藥理作用研究進展［J］．中草藥，2009，40(12)：6-8．

［4］Xu SF，Ye YP，Li XY，et al．Chemical composition and antioxidant activities of different polysaccharides from the roots of Angelica dahurica［J］．Chem Biodivers，2011，8(6)：1121-1131．

［5］黃桂香．當歸生物學效應研究［J］．時珍國醫(yī)國藥，2001，12(3)：262-263．

［6］Liu Y，Chen HB，Zhao YY，et al．Quantification and stability studies on the flavonoids of Radix hedysari［J］．J Aqric Food Chem，2006，54(18)：6634-6639．

［7］惠和平，封士蘭，胡芳弟，等．紅芪多糖的體外抗氧化活性研究［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學，2010，38(8)：4056-4957．

［8］劉毅，張征，張慶英，等．紅芪化學成分及其抗氧化活性研究［J］．中國藥事，2010，24(6)：543-545，549．

［9］滕利榮，孟慶繁，劉培源，等．酶法提取百合多糖及其體外抗氧化活性［J］．吉林大學學報：理學版，2003，41(4)：538-542．

［10］Mucaji P，Haladova M，Eisenreichova E，et al．Constituents of Lilium candidum L．a(chǎn)nd their antioxidative activity［J］．Ceska Slov Farm，2007，56(1)：27-29．

［11］胡敏敏，蔡寶昌，張志杰，等．百合多糖的藥效學研究［J］．中藥新藥與臨床藥理，2007，18(2)：107-109．

［12］Gurdol F，Oner-yyidothan Y，Yalcyn O，et al．Changes in enzymatic antioxidant defense system in blood and endometrial tissues of women after menopause［J］．Res Commun Mol Pathol Pharmacol，1997，97(1)：38-46．

［13］Bednardk-Tupikowska G，Bohdanowicz-Pawlak A，Bidzinska B，et al．Serum lipid peroxide levels and erythrocyte glutathione peroxidase and superoxide dismutase activity in premenopausal and postmenopausal women［J］．Gynecol Endocrimol，2001，15(4)：298-303．

［14］Nie J，Close G，George KP，et al．Temporal association of elevations in serum cardiac troponin T and myocardial oxidative stress after prolonged exercise in rats［J］．Eur J Appl Physiol，2010，110(6)：1299-1303．

［15］Kim MY，Kim EJ，Kim YN，et al．Effects of α-lipoic acid and L-carnosine supplementation on antioxidant activities and lipid profiles in rats［J］．Nutr Res Pract，2011，5(5)：421-428．