漢、回及維吾爾三民族紅細(xì)胞CR1基因點(diǎn)突變差異的研究

洪 煒 馬洪濱 朱劍功 劉立明 李永利 王雪飛 王大剛 龐君麗 楊 寧 李 妍 王海濱

紅細(xì)胞CR1基因密度相關(guān)基因多態(tài)性分為3種類(lèi)型，即高表達(dá)型(HH)、中表達(dá)型(HL)和低表達(dá)型，不同CR1基因型與紅細(xì)胞膜CR1數(shù)量表達(dá)及其黏附活性密切相關(guān)。研究業(yè)已清楚，紅細(xì)胞CR1數(shù)量及其活性在循環(huán)病原微生物的清除、機(jī)體整體免疫功能的調(diào)節(jié)等具有非常重要的作用［1～5］。不同疾病情況下，機(jī)體紅細(xì)胞CR1數(shù)量及活性有不同程度的變化，其基因多態(tài)性分布與不同的疾病的易感性密切相關(guān)，表明確定人群紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性基因點(diǎn)突變狀況，對(duì)疾病易感性的判斷、疾病機(jī)制探討及病情評(píng)估具有重要意義。本文對(duì)漢、回及維吾爾族三民族正常人群460人的紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性進(jìn)行研究，探討其流行病學(xué)意義。

對(duì)象與方法

1．研究對(duì)象:隨機(jī)選擇漢族、回族及維吾爾族三民族正常人群共460人，其中漢族157人，男性111人，女性46人，平均年齡30．8±13．4歲;回族149人男性87人，女性62人平均年齡27．9±11．9歲;維吾爾族154人，男性93人，女性61人，平均年齡28．6±11．8歲，三民族年齡之間比較無(wú)差異。

2．研究方法:紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性測(cè)定:根據(jù)紅細(xì)胞CR1基因中1個(gè)內(nèi)含子點(diǎn)突變可使紅細(xì)胞表達(dá)CR1分子減少，而通過(guò)HindⅢ酶切引物擴(kuò)增的1．8kb的DNA片段，可獲得0．5kb和1．3kb兩條片段。據(jù)文獻(xiàn)［4］設(shè)計(jì)引物 1:5'－CCTTCAATGGAATGGTGCAT－3'(4415～4435);引物 2:5'－CCCTTGTAAGGCAAGTCTGG－3'(引物3'端距結(jié)構(gòu)基因內(nèi)含子HindⅢ酶切位點(diǎn)25～55bp)建立PCR技術(shù)加HindⅢ酶切技術(shù)。取EDTA抗凝全血提取DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行HindⅢ酶切，可將CR1分子密度相關(guān)基因分為高表達(dá)(HH，1．8kb 一條帶)、中表達(dá)(HL，1．8kb、1．3kb 和 0．5kb 三條帶)和低表達(dá)(LL，1．3kb和0．5kb兩條帶)3種基因表達(dá)形式(圖1)。

結(jié) 果

1．三民族紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性分布比較:三民族紅細(xì)胞CR1基因突變率分別為:漢族32．5%，維吾爾族24．0%，回族23．5%，統(tǒng)計(jì)學(xué)比較雖無(wú)顯著性差異(χ2=4．62，P ＞0．05)，但漢族人群的突變率明顯高于其他兩個(gè)民族，三者比較的χ2=4．62，已經(jīng)接近顯著差異值(χ2=5．99，P ＜0．05)，如果差異研究例數(shù)，可能得出更有意義的結(jié)論(表1)。三民族女性紅細(xì)胞CR1基因總突變率(32．5%)明顯高于男性(23．7%)，雖無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=3．71，P ＞0.05)，但其 χ2=3．71 已經(jīng)接近差異臨界(χ2=3.84)，如果擴(kuò)大例數(shù)研究可能存在女性CR1基因突變率高于男性的結(jié)果，這在研究女性人群容易患自身免疫性疾病有重要意義(表2)。

表1 三民族紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性分布比較［n(%)］

表2 三民族正常人群男性與女性紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性分布差異比較［n(%)］

2．三民族男性和女性之間CR1基因多態(tài)性差異比較:三民族男性和女性之間紅細(xì)胞CR1基因突變率分別為:維吾爾族女性32．8%，男性18．3%，男性、女性比較 χ2=4．25，P ＜0．05;漢族男性 31．5%，女性34．8%，男性、女性比較 χ2=0．69，P ＞ 0．05;回族男性 19．6%，女性 29．0%，男性、女性比較 χ2=1．82，P＞0．05。以上結(jié)果表明，維吾爾族女性紅細(xì)胞CR1基因突變率顯著高于男性，這對(duì)探討維吾爾族女性自身免疫性疾病易感性的具有重要意義。

3．三民族中漢族男性CR1基因突變率顯著高于回族和維吾爾族男性:漢族男性紅細(xì)胞CR1基因突變率最高(31.5%)，顯著高于維吾爾族男性(18．3%)和回族男性(19．6%)，χ2=6．1，P ＜ 0．05。三民族女性之間紅細(xì)胞CR1基因突變率比較無(wú)顯著差異(χ2=1．44，P ＞0．05)，見(jiàn)表3、表4。

表3 女性紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性分布［n(%)］

表4 男性紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性分布［n(%)］

討 論

紅細(xì)胞CR1介導(dǎo)循環(huán)天然免疫黏附功能，在機(jī)體循環(huán)免疫復(fù)合物、病源顆粒及代謝產(chǎn)物等物質(zhì)的清除及免疫調(diào)節(jié)具有重要作用［2］。紅細(xì)胞表達(dá)的CR1，是紅細(xì)胞介導(dǎo)天然免疫黏附的物質(zhì)基礎(chǔ)，而CR1數(shù)量表達(dá)是由其基因多態(tài)性類(lèi)型(點(diǎn)突變)決定的，因此研究紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性，對(duì)探討疾病CR1數(shù)量及活性的變化及機(jī)制有重要意義;研究不同民族正常人群紅細(xì)胞CR1基因多態(tài)性的分布的差異，對(duì)探討易感疾病的流行病學(xué)有重要參考價(jià)值。白細(xì)胞也表達(dá)CR1，但其基因無(wú)點(diǎn)突變發(fā)生，本研究采用提取有核細(xì)胞人基因組DNA為擴(kuò)增模板，用CR1特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后采用限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行酶切分析其多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)，該方法較Southern blotting更快速，適合臨床大量標(biāo)本的研究。

本研究表明，漢族紅細(xì)胞 CR1基因突變率(32.5%)明顯高于維吾爾族(24．0%)和回族(23.5%);三民族女性紅細(xì)胞 CR1基因突變率(32.5%)明顯高于男性(23．7%)，以上比較雖然無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=4．62，P ＞ 0．05;χ2=3．71，P ＞0.05)，但其χ2已經(jīng)接近統(tǒng)計(jì)學(xué)差異臨界值，若擴(kuò)大研究例數(shù)或許會(huì)有新的結(jié)論。維吾爾族女性突變率(32．8%)顯著高于男性(18．3%，χ2=4．25，P ＜0.05)，漢族男性的紅細(xì)胞CR1基因點(diǎn)突變顯著高于維吾爾族和回族男性(χ2=6．1，P ＜0．05)，這對(duì)探討以上人群自身免疫相關(guān)性疾病的發(fā)生及發(fā)展具有重要意義。三民族正常人群女性紅細(xì)胞CR1基因突變率有高于男性的趨勢(shì)，這可能是女性易患自身性免疫性疾病的重要原因之一;漢族男性紅細(xì)胞CR1基因突變率高于其他兩個(gè)民族，以及維吾爾族女性紅細(xì)胞CR1突變率顯著高于維吾爾族男性這一現(xiàn)象，值得人們進(jìn)一步研究其差異的臨床意義。

1 Awandare GA，Spadafora C，Moch JK，et al，Plasmodium falciparum field isolates use complement receptor 1(CR1)as a receptor for invasion of erythrocytes［J］．Mol Biochem Parasitol，2011，177(1):57 －60

2 Congbin Y，Aibin L，Congli Y，et al．Overexpression of complement receptor type I(CR1，CD35)on erythrocytes in patients with hemoplasma infection［J］．Microbiol Immunol，2010，54(8):460 － 465

3 Li J，Wang JP，Ghiran I，et al．Complement receptor 1 expression on mouse erythrocytes mediates clearance of Streptococcus pneumoniae by immune adherence［J］．Infect Immun，2010，78(7):3129 －3135

4 Pham BN，Kisserli A，Donvito B，et al．Analysis of complement receptor type 1 expression on red blood cells in negative phenotypes of the Knops blood group system，according to CR1 gene allotype polymorphisms［J］．Transfusion，2010，50(7):1435 － 1443

5 王海濱，張景萍，郭峰，等．紅細(xì)胞CR1分子的定量測(cè)定及其臨床意義［J］．中華微生物學(xué)與免疫學(xué)雜志，2000，20(4):381－384