攻擊行為測試:大鼠怒情緒評價方法的復(fù)測信度檢驗

薄純光 魏 盛 高興笑 張惠云

情志與健康和疾病的關(guān)系，尤其是不良情緒對健康和疾病的影響已成為當(dāng)今全社會關(guān)注的焦點。中醫(yī)七情中怒是不良情緒中最不可忍受、對人際關(guān)系與社會影響最大、與疾病發(fā)生關(guān)系最為密切的情緒反應(yīng)之一［1］。動物的攻擊行為(aggressive behavior)多是由于動物個體之間爭奪領(lǐng)域、食物或巢區(qū)而發(fā)生的相互攻擊，任何動物都有這種行為［2］。攻擊行為測試目前已作為評價大鼠怒情緒經(jīng)典方法得到廣泛應(yīng)用，但是關(guān)于怒情緒在攻擊行為中表達(dá)參數(shù)的穩(wěn)定性考察卻未見報道。本研究利用國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界廣泛應(yīng)用的居住入侵配合社會隔離慢性應(yīng)激造成大鼠出現(xiàn)典型“怒”情緒，通過組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(intraclass correlation coefficient，ICC)和一致性系數(shù)(agreement index，Kappa)兩個統(tǒng)計參數(shù)對怒情緒大鼠攻擊行為表達(dá)參數(shù)進行復(fù)測信度檢驗，以確定較可信的怒情緒大鼠攻擊行為評價方法［3～5］。

材料與方法

1．實驗動物:健康雄性 Wistar大鼠，180～220g，20只。SPF級，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，(許可證編號為SCXK11－00－0008)。另準(zhǔn)備120～150g Wistar大鼠若干作為入侵鼠。

2．實驗步驟及方法:(1)居住入侵配合社會隔離慢性應(yīng)激造模:實驗大鼠于室溫20±2℃，12h/12h明暗周期環(huán)境(8:00～20:00)晝夜顛倒，自由進水飲食飼養(yǎng);預(yù)適應(yīng)環(huán)境2周。居住鼠每籠5只飼養(yǎng)1周，然后單籠飼養(yǎng)1周，進入實驗。所有實驗操作均為暗淡燈光(＜2lux)下進行［6］。居住鼠與入侵鼠隔開單獨的房間另養(yǎng)，飼養(yǎng)條件相同。篩選體重200±5g大鼠20只進入實驗。居住入侵實驗時，將入侵鼠轉(zhuǎn)移引入居住鼠籠中15min。開始5min為雙方互相適應(yīng)期，攻擊行為測定從第6min開始。入侵實驗共進行2次，間隔1周。實驗結(jié)束后由不熟悉實驗設(shè)計人員進行數(shù)據(jù)提取錄入。(2)攻擊行為測定:攻擊行為含兩種類型:正面攻擊(當(dāng)入侵鼠試圖逼進時躍起)和側(cè)旁攻擊(弓背從斜地里竄出將入侵者推出)。觀測者記錄攻擊行為不同方面得分:潛伏期(latent time)、攻擊次數(shù)(number of attacks)、攻擊持續(xù)時間(attack durations)、撕咬次數(shù)(number of bites)、攀壓持續(xù)時間(on－top durations)、混和攻擊行為得分(composite aggression)，另外還記錄豎毛次數(shù)(piloerection)?；旌凸粜袨榈梅钟嬎愎饺缦?混和攻擊行為得分=攻擊次數(shù)+0．2×［攻擊持續(xù)時間(s)］+撕咬次數(shù) +0．2 ×［攀壓持續(xù)時間(s)］+ 豎毛次數(shù)(Albert，et al．1991)［7］。

3．統(tǒng)計學(xué)方法:使用SPSS 17．0軟件進行統(tǒng)計分析，運用GraphPad Prism 5．0軟件進行統(tǒng)計作圖。Kappa參數(shù)由Analyze→ Descriptive statistics→ Crosstabs statistics→ Kappa過程完成得到;ICC參數(shù)由Analyze→Scale→Reliability Analysis過程完成得到。Kappa參數(shù)分析前，先用分位數(shù)法將實驗所得的數(shù)據(jù)分為以下4組:①高分組(＞75%分位數(shù)，計4分);②偏高分組(75%分位數(shù)～中位數(shù)，計3分);③偏低分組(中位數(shù)～25%分位數(shù)，計2分);④低分組(＜25%分位數(shù)，計1分)。當(dāng)參數(shù)ICC和Kappa:①0．81～1．00認(rèn)為可信度極高;②0．61～0．80認(rèn)為可信度高;③0．41 ～0．60 認(rèn)為可信度中;④0．21 ～0．40 認(rèn)為可信度為弱;⑤ ＜0．20 認(rèn)為可信度為極弱［8］。

結(jié) 果

1．大鼠攻擊行為不同實驗參數(shù)分類(高、偏高、偏低、低)一致性檢驗(Kappa):在大鼠攻擊行為不同實驗參數(shù)中，僅混和攻擊行為得分(Kappa=0．662，p＜0．001)具有高度的可信度，攻擊持續(xù)時間(Kappa=0．533，P ＜0．001)具有中等的可信度，其余參數(shù)可信度較弱(表1、表2)。

表1 不同實驗參數(shù)分類初測與復(fù)測Kappa比較，n=40)

表1 不同實驗參數(shù)分類初測與復(fù)測Kappa比較，n=40)

與初測相比較，a P ＜0．05，b P ＜0．01，c P ＜0．001

實驗參數(shù)可信度潛伏期 23．25 35．75 48．75 24．75 35．50 57．25 0．333b初測 復(fù)測25%分位數(shù) 50%分位數(shù) 75%分位數(shù) 25%分位數(shù) 50%分位數(shù) 75%分位數(shù) Kappa弱攻擊次數(shù) 16．50 20．50 38．50 21．50 25．00 43．75 0．267a 弱攻擊持續(xù)時間 6．15 10．35 17．88 7．55 11．50 14．88 0．533c 中撕咬次數(shù) 3．00 8．00 12．75 1．25 5．00 7．75 0．130 極弱攀壓持續(xù)時間 18．38 42．00 56．50 15．50 24．50 45．25 0．133 極弱混和攻擊行為得分 27．93 46．45 80．36 33．60 42．30 69．36 0．662c 高

表2 混和攻擊行為得分參數(shù)分類一致性情況(Kappa=0．662)

2．大鼠攻擊行為不同實驗參數(shù)一致性檢驗(ICC):ICC結(jié)果表明:攻擊次數(shù)(ICC=0．834，p＜0.001)，攻擊持續(xù)時間(ICC=0．898，P ＜0．001)、混和攻擊行為得分(ICC=0．910，P ＜0．001)具有極高的可信度，潛伏期(ICC=0．671，P ＜0．001)具有高度的可信度，其余參數(shù)可信度一般(表3)。

表3 大鼠攻擊行為不同實驗參數(shù)初測與復(fù)測ICC比較，n=40)

表3 大鼠攻擊行為不同實驗參數(shù)初測與復(fù)測ICC比較，n=40)

與初測相比較，a P ＜0．001，b P ＜0．05

可信度潛伏期(s) 41．20 ±30．02 40．35 ±20．89 0．671a實驗參數(shù) 初測 復(fù)測 ICC高攻擊次數(shù) 29．75 ±22．31 33．25 ±18．09 0．834a 極高攻擊持續(xù)時間(s)12．20 ±7．10 11．67 ±5．72 0．898a 極高撕咬次數(shù) 10．50±9．90 4．95±3．98 0．149 極弱攀壓持續(xù)時間(s)41．52 ±29．81 33．25 ±22．24 0．407b 中混和攻擊行為得分 50．99 ±26．56 47．19 ±21．62 0．910a 極高

另外，混和攻擊行為得分參數(shù)初測與復(fù)測具有較好相關(guān)性(圖1)。

圖1 混和攻擊行為得分參數(shù)初測與復(fù)測相關(guān)性

討 論

居住入侵配合社會隔離慢性應(yīng)激造成大鼠出現(xiàn)典型“怒”情緒改變，已在國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界得到廣泛應(yīng)用，且一般認(rèn)為攻擊行為是怒情緒的核心表現(xiàn)［9］。但是關(guān)于攻擊行為測試本身方法學(xué)穩(wěn)定性考察則一直未見相關(guān)報道。因此，本文擬對攻擊行為測試中幾個關(guān)鍵參數(shù)指標(biāo)進行復(fù)測信度考察，進而篩選出可穩(wěn)定反應(yīng)大鼠怒情緒的核心參數(shù)，為攻擊行為測試方法的穩(wěn)定性提供第一手實驗數(shù)據(jù)支撐。

信度是指多次測量結(jié)果的一致程度，其反映了一種測量方法或工具的穩(wěn)定性或可靠性［10］。復(fù)測信度是信度的評價分析方法之一，它考察的是經(jīng)過一段時間后，前后兩次測量結(jié)果的穩(wěn)定程度，復(fù)測信度越高，測量結(jié)果越一致，這也表明評價方法或工具越穩(wěn)定，可信度越高。常用的統(tǒng)計評價參數(shù)有兩種:ICC和Kappa［11］。ICC又稱組內(nèi)相關(guān)系數(shù)，是最先由Bartko于1966年提出的，用于評價連續(xù)變量或等級變量的可信度大?。?0，12，13］。Kappa 又稱一致性系數(shù)，是由 Cohen于1960年提出的，用于評價分類變量的可信度大小。不僅能檢驗兩種方法或兩次調(diào)查之間是否有一致性，而且能給出一個反映一致性大小的“量”值［14］。

通過本研究結(jié)果，系數(shù)Kappa值顯示，在大鼠攻擊行為不同實驗參數(shù)中，僅混和攻擊行為得分(Kappa=0．662，P ＜0．001)具有高度的可信度，攻擊持續(xù)時間(Kappa=0．533，P ＜0．001)的可信度尚可考慮，其余參數(shù)可信度較弱;而系數(shù)ICC值結(jié)果顯示，攻擊次數(shù)(ICC=0．834，P ＜0．001)，攻擊持續(xù)時間(ICC=0．898，P ＜0．001)、混和攻擊行為得分(ICC=0．910，P ＜0．001)均具有極高的可信度，潛伏期(ICC=0.671，p＜0．001)具有高度的可信度，其余參數(shù)可信度一般。而攻擊次數(shù)和攻擊持續(xù)時間前后兩次實驗中kappa系數(shù)沒有保持高度的一致性，這可能和環(huán)境因素和怒情緒本身分為兩種亞型:憤怒和郁怒有關(guān)［15］。環(huán)境方面，可能是由于前后兩次攻擊行為測定實驗中，入侵鼠的改變可能同時會引起攻擊環(huán)境的改變，進而影響大鼠的攻擊行為;怒情緒的兩種亞型在試驗的過程中，是不是存在著變化或彼此轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，從而導(dǎo)致大鼠攻擊行為有關(guān)參數(shù)的不穩(wěn)定，有待于進一步的研究論證。綜上所述，混和攻擊行為得分可作為怒情緒大鼠攻擊行為實驗中一個較穩(wěn)定的參數(shù)，具有較高的可信度。

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3 Siever LJ．Neurobiology of aggression and violence［J］．Am JPsychiatry，2008，165(4):429 －442

4 Pletzer B，Klimesch W，Oberascher－Holzinger K，et al．Corticosterone response in a resident－intruder－paradigm depends on social state and coping style in adolescent male Balb － C mice［J］．Neuro Endocrinol Lett，2007，28(5):585 －590

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11 孫世光，王婧婧，李自發(fā)，等．曠場實驗:昆明小鼠行為學(xué)評價方法的重測信度檢驗［J］．中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志，2010，19(12):1093－1095

12 Bartko JJ．The intraclass correlation coefficient as a measure of reliability［J］．Psychol Rep，1966，19(1):3 －11

13 Konishi S，Gupta AK．Testing the equality of several intraclass correlation coefficients［J］．Journal of Statistical Planning and Inference，1989，21:93 －105

14 王潔貞，韓兢，劉言訓(xùn)，等．Kappa統(tǒng)計量在一致性和重現(xiàn)性檢驗中的應(yīng)用［J］．山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1996，34(3):209 －211

15 Breuer ME，McGinnis MY．Aggression in male rats receiving anabolic androgenic steroids:effects of social and environmental provocation［J］．Hormones and Behavior，2001，40(3):409 －418