復(fù)方紅景天制劑提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的實(shí)驗(yàn)研究

徐 榮，葛 華，王永新 （. 空軍總醫(yī)院藥學(xué)部，北京 004；. 空軍航空醫(yī)學(xué)研究所，北京 004）

紅景天為景天科紅景天屬多年生草本植物，是我國(guó)藏民族著名的傳統(tǒng)藥材之一，具有扶正固本、理氣養(yǎng)血、健腦益智和滋補(bǔ)強(qiáng)身的功效[1]。近年來(lái)研究表明，紅景天能增強(qiáng)人體對(duì)不利環(huán)境的抵抗力，具有抗疲勞、抗寒冷、抗衰老等多種生理活性，具有明顯增強(qiáng)機(jī)體抗逆性和適應(yīng)性作用[2]；刺五加具有抗疲勞、抗衰老、提高機(jī)體免疫力等藥理活性[3]；黃芪具有顯著的抗疲勞作用，且具有一定的劑量依賴(lài)性[4]。我們根據(jù)中藥的配伍原則，將紅景天與刺五加、黃芪相配伍研制成復(fù)方紅景天制劑，并以小鼠為對(duì)象進(jìn)行藥效學(xué)研究，觀察該產(chǎn)品提高運(yùn)動(dòng)耐力的效果。

1 材料與方法

1.1 儀器

CHE360全自動(dòng)生化分析儀（上海寶特生命科學(xué)發(fā)展有限公司）；YSI1500乳酸鹽分析儀（上海益聯(lián)科教設(shè)備有限公司）；721分光光度計(jì)（南京艾賽特科技發(fā)展有限公司）；HT電子天平（上海信衡電子有限公司）。

1.2 藥品與試劑

復(fù)方紅景天制劑（北京長(zhǎng)城制藥廠，0.25 g/粒，批號(hào)20100701）；乳酸儀酶膜、破膜液、5 mmol·L-1乳酸標(biāo)準(zhǔn)液、緩沖液（上海博蘊(yùn)生物科技有限公司）；肌糖原及肝糖原測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20101125）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年健康昆明種雌性小鼠（SPF級(jí)）由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重19 ～ 21 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK-（軍）2007-004。實(shí)驗(yàn)室溫度為20 ～ 24 ℃，相對(duì)濕度為40% ～ 70%RH，群籠飼養(yǎng)，10只/籠。

1.4 劑量設(shè)計(jì)及藥液配置

按推薦日攝入量（25 mg·kg-1）的1、10、30倍即25、250、750 mg·kg-1為三個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組，按0.1 mL/10 g灌胃給予復(fù)方紅景天制劑，每天1次，連續(xù)35 d。陰性對(duì)照組給予去離子水。

精密稱(chēng)取復(fù)方紅景天制劑7.5 g，加去離子水至100 mL，即為高劑量組（750 mg·kg-1），將高劑量組用去離子水稀釋3倍為中劑量組（250 mg·kg-1），將中劑量組用去離子水稀釋10倍為低劑量組（25 mg·kg-11）。

1.5 小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

取小鼠40只，按體重隨機(jī)分為4組，每組10只，低、中、高劑量組和陰性對(duì)照組。末次給藥30 min后，置于游泳箱中游泳，水深約30 cm，水溫（25±0.5） ℃，小鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮。記錄小鼠自游泳開(kāi)始至死亡的時(shí)間，作為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。

1.6 血清尿素測(cè)定

取小鼠40只，分組同“1.5”項(xiàng)下，末次給藥30 min后，在30 ℃的水中游泳90 min，休息60 min后立即內(nèi)眥采血0.5 mL。于4 ℃靜置3 h后3000 r·min-1離心15 min，取血清，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清尿素值。

1.7 肝糖原測(cè)定

取小鼠40只，分組同“1.5”項(xiàng)下，末次給藥30 min后，立即處死，取肝臟經(jīng)0.9%氯化鈉注射液漂洗后用濾紙吸干，精確稱(chēng)取肝臟100 mg，用肌糖原及肝糖原測(cè)定試劑盒測(cè)定肝糖原含量。

1.8 血乳酸測(cè)定

取小鼠40只，分組同“1.5”項(xiàng)下，末次給藥30 min后，采血20 μL加入40 μL破膜液中，振蕩均勻。然后讓小鼠在溫度為30 ℃的水中游泳10 min后取出立即采血20 μL，加入40 μL破膜液中，振蕩均勻。休息20 min后，再采血20 μL，加入40 μL破膜液中，振蕩均勻。用乳酸鹽分析儀測(cè)定上述3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血乳酸含量，所得值乘3即為血乳酸值。血乳酸變化值 = 1/2×（游泳前血乳酸值+游泳后的血乳酸值）×10 + 1/2×（游泳后的血乳酸值+休息20 min后的血乳酸值）×20。

1.9 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)分別以（±s）表示。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表示差異極顯著。根據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版），負(fù)重游泳試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原3項(xiàng)生化指標(biāo)中任2項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，即可判定該受試物具有緩解體力疲勞的作用。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方紅景天制劑對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

按實(shí)驗(yàn)方案灌胃給藥35 d，進(jìn)行負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)與方差分析結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，復(fù)方紅景天制劑中劑量組負(fù)重游泳時(shí)間明顯長(zhǎng)于陰性對(duì)照組，且差異顯著（P ＜ 0.05）。

表1 復(fù)方紅景天制劑對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響. n = 10, ±sTab 1 Effect of Rhodiola Compound on the swimming time of mice bearing a load. n = 10, ±s

表1 復(fù)方紅景天制劑對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響. n = 10, ±sTab 1 Effect of Rhodiola Compound on the swimming time of mice bearing a load. n = 10, ±s

注：與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05Note: compared with the control group, *P＜0.05

組別 劑量/mg·kg-1 負(fù)重游泳時(shí)間/min陰性對(duì)照組 0 47.58±7.95低劑量組 25 46.83±9.42中劑量組 250 61.43±11.24*高劑量組 750 48.01±16.91

2.2 復(fù)方紅景天制劑對(duì)血清尿素含量的影響

與陰性對(duì)照組相比，復(fù)方紅景天制劑各劑量組不能減少疲勞小鼠血清尿素的產(chǎn)生，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。復(fù)方紅景天制劑對(duì)血清尿素含量影響的結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 復(fù)方紅景天制劑對(duì)血清尿素的影響. n = 10, ±sTab 2 Effect of Rhodiola Compound on the serum urea content of the mice. n = 10, ±s

表2 復(fù)方紅景天制劑對(duì)血清尿素的影響. n = 10, ±sTab 2 Effect of Rhodiola Compound on the serum urea content of the mice. n = 10, ±s

組別 劑量/mg·kg-1 血清尿素/mmol · L-1陰性對(duì)照組 0 10.65±0.80低劑量組 25 10.74±0.79中劑量組 250 10.63±1.03高劑量組 750 10.49±1.11

2.3 復(fù)方紅景天制劑對(duì)肝糖原含量的影響

按實(shí)驗(yàn)方案灌胃給藥35 d，末次給藥30 min后取肝臟測(cè)定肝糖原含量，統(tǒng)計(jì)與方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，與陰性對(duì)照組相比，復(fù)方紅景天制劑各劑量組具有提高肝糖原的作用，且差異極顯著（P＜0.01）。

表3 復(fù)方紅景天制劑對(duì)肝糖原含量的影響. n = 10，±sTab 3 Effect of Rhodiola Compound on the hepatic glycogen content of the mice. n = 10, ±s

表3 復(fù)方紅景天制劑對(duì)肝糖原含量的影響. n = 10，±sTab 3 Effect of Rhodiola Compound on the hepatic glycogen content of the mice. n = 10, ±s

注：與陰性對(duì)照組比較，**P＜0.01Note: compared with the control group, **P＜0.01

組別 劑量/mg·kg-1 肝糖原/mg·g-1陰性對(duì)照組 0 53.89 ± 16.26低劑量組 25 72.11 ± 9.66**中劑量組 250 69.16± 11.38**高劑量組 750 83.82 ± 11.81**

2.4 復(fù)方紅景天制劑對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸的影響

游泳前，各劑量組小鼠血乳酸水平與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05）；游泳后，各組小鼠血乳酸值與運(yùn)動(dòng)前相比都有不同程度的升高，中、高劑量組的血乳酸值明顯低于對(duì)照組（P＜0.01）。與陰性對(duì)照組相比，復(fù)方紅景天制劑中、高劑量組具有降低疲勞時(shí)乳酸含量的作用，且差異極顯著（P＜0.01）。

表4 復(fù)方紅景天制劑對(duì)血乳酸的影響. n = 10，±sTab 4 Effect of Rhodiola Compound on the lactic acid of the mice. n = 10, ±s

表4 復(fù)方紅景天制劑對(duì)血乳酸的影響. n = 10，±sTab 4 Effect of Rhodiola Compound on the lactic acid of the mice. n = 10, ±s

注：與陰性對(duì)照組比較，**P＜0.01Note: compared with the control group, **P＜0.01

血乳酸變化值/mmol·L-1陰性對(duì)照組 0 2.70±0.47 4.79±0.66 2.49±0.69 110.20±12.10低劑量組 25 2.12±0.56 4.85±1.04 2.37±0.88 107.10±19.70中劑量組 250 1.85±0.42 3.11±0.57 1.56±0.37 71.60±10.10**高劑量組 750 2.25±0.56 2.61±0.84 1.89±0.49 69.30±14.40**組別 劑量/mg·kg-1運(yùn)動(dòng)前血乳酸值/mmol·L-1運(yùn)動(dòng)后血乳酸值/mmol·L-1休息20 min后血乳酸值/mmol·L-1

3 討論

體力疲勞是指機(jī)體生理過(guò)程不能將其功能維持在一個(gè)特定水平，或各器官不能維持其預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。所謂抗疲勞、提高運(yùn)動(dòng)耐力就是延緩疲勞的產(chǎn)生或加速疲勞的消除[5]。目前體力疲勞的評(píng)價(jià)方法主要有兩個(gè)：運(yùn)動(dòng)耐力實(shí)驗(yàn)和生化指標(biāo)的檢測(cè)。負(fù)重游泳時(shí)間一直以來(lái)被作為反映運(yùn)動(dòng)耐力的重要指標(biāo)[6]。在反映疲勞的生化指標(biāo)中，血清尿素、肝糖原含量、血乳酸等生化指標(biāo)的改變最具代表性。血清尿素濃度與機(jī)體疲勞程度及機(jī)體機(jī)能密切相關(guān)，隨著機(jī)體負(fù)荷的增加而升高；機(jī)體劇烈運(yùn)動(dòng)后，糖原被大量消耗，通過(guò)測(cè)定運(yùn)動(dòng)后肝糖原含量，可以評(píng)價(jià)耐疲勞發(fā)生的程度；血乳酸水平可以反映有氧代謝能力、疲勞的產(chǎn)生和消除速度[7]。本研究結(jié)果表明，復(fù)方紅景天制劑可以明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，增加小鼠肝糖原含量，降低運(yùn)動(dòng)后血乳酸值，提示復(fù)方紅景天制劑具有一定的抗疲勞作用。

復(fù)方紅景天制劑中的紅景天具有扶正固本、補(bǔ)氣養(yǎng)血的功效，可用于緩解各種原因引起的疲勞癥狀。研究[8-9]表明，紅景天可以通過(guò)預(yù)防毛細(xì)血管的收縮而加快血液循環(huán)，提高機(jī)體對(duì)低氧環(huán)境的適應(yīng)；紅景天還可以使機(jī)體更節(jié)省地利用糖原和ATP，增加糖原儲(chǔ)備，減少運(yùn)動(dòng)時(shí)肝糖原的消耗，及時(shí)消除由于劇烈運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的乳酸。乳酸脫氫酶（LDH）活性升高可以加快乳酸的清除，刺五加的主要成分刺五加總苷通過(guò)提高代謝條件物質(zhì)LDH的活力使血乳酸水平降低可能是其提高抗疲勞能力的一個(gè)重要途徑[10]；黃芪可以加快運(yùn)動(dòng)過(guò)程中血清和骨骼肌中自由基的清除，從而減少氧自由基對(duì)人體的損害，延緩疲勞的發(fā)生[11]。刺五加、黃芪均有抗疲勞、抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功能，與紅景天配伍，可以增強(qiáng)其抗疲勞的效果，其機(jī)制可能與改善機(jī)體物質(zhì)代謝、提高機(jī)體有氧代謝能力有關(guān)，但具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。