樂胃飲對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠＊胃黏膜作用的掃描電鏡觀察

朱飛葉，吳晉蘭，徐 珊

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)分析測(cè)試中心，杭州 310053;2.杭州市余杭區(qū)第五人民醫(yī)院，杭州 311100;3.浙江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，杭州 310053)

樂胃飲是由老中醫(yī)的經(jīng)驗(yàn)方化裁而來，以山藥、薏苡仁、陳皮為主藥，具有清補(bǔ)脾胃、健運(yùn)中州之功效。臨床上，對(duì)慢性萎縮性胃炎具有良好的治療效果［1］。為此，我們通過建立慢性萎縮性胃炎大鼠模型，采用掃描電鏡(SEM)技術(shù)從超微結(jié)構(gòu)進(jìn)一步闡明樂胃飲對(duì)胃黏膜的保護(hù)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、藥物、主要試劑及儀器

健康8周齡雄性Wistar大鼠60只，體質(zhì)量190g～210g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，按清潔級(jí)要求飼養(yǎng)(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SYXK(浙)2008-0115)。

淮山藥、炒薏苡仁、陳皮由浙江中醫(yī)藥大學(xué)第二門診部提供，按2∶2∶1比例水煎濃縮成生藥濃度為0.25g/ml、0.5g/ml、1g/ml的溶液。維酶素片由新鄉(xiāng)恒久遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司提供(批號(hào)20090805)，碾碎后用蒸餾水配制成濃度為0.015g/ml的混懸液。甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(MNNG)由中國藥品生物制品檢定所提供，用蒸餾水配成1g/L的存儲(chǔ)液。水楊酸鈉由上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)五聯(lián)化工廠提供(分析純，批號(hào)20090701)，用蒸餾水配成2%水楊酸鈉溶液。HITACHIS-3000N掃描電子顯微鏡;HITACHI E-1010離子濺射儀。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組、模型制備及藥物干預(yù) 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組、維酶素組、樂胃飲低、中、高劑量組。正常組充足供食，自由飲水。其余大鼠采用多重刺激法制備慢性萎縮性胃炎動(dòng)物模型［2］。MNNG存儲(chǔ)液于臨用前將其稀釋成100μg/ml濃度的飲用液，避光作為大鼠自由飲水，每天更換。水楊酸鈉溶液每周1、4各灌胃1次，2ml/只，灌胃前后禁食禁水1h。第5周起單日禁食，雙日充足供食，連續(xù)8周。每組隨機(jī)抽取1只大鼠進(jìn)行胃黏膜組織學(xué)檢查，確定模型成功后分組治療。維酶素組按0.2g/kg灌胃，樂胃飲低、中、高劑量組分別按4g/kg、8g/kg、16g/kg灌胃，正常組和模型組以等量生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥4周，并記錄各組大鼠飲食、活動(dòng)、毛發(fā)、體重的變化。

1.2.2 標(biāo)本采集和處理 第12周末處死所有大鼠，剖腹，距賁門和幽門1.5cm離斷取出全胃。沿胃大彎側(cè)剖開，冰生理鹽水沖洗后，在胃竇部取5mm×5mm大小胃黏膜組織塊，迅速固定于預(yù)冷的2.5%戊二醛內(nèi)，置4℃冰箱，充分固定后各組抽取2例，用0.1mol的磷酸緩沖液充分沖洗，再用1%鋨酸固定 1.5h，梯度脫水(分別用 50%、70%、80%、90%、95%、100%乙醇、純丙酮、醋酸異戊酯脫水，每次15min)，二氧化碳臨界點(diǎn)干燥、噴金，掃描電鏡下觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用單因素方差分析。組間兩兩比較，方差齊性時(shí)用 LSD檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)用Dunnett’s T3檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 大體觀察

正常組大鼠飲食正常，活動(dòng)自如，毛發(fā)有光澤，體重逐漸增加，肉眼觀察其胃黏膜色澤鮮紅，組織彈性好;模型組大鼠出現(xiàn)食量減少、活動(dòng)減少、毛發(fā)枯槁、弓背、喜扎堆、體重明顯下降、胃黏膜變薄、彈性減弱，可見明顯暴露的血管，局部糜爛;樂胃飲低、中、高劑量組和維酶素組大鼠的一般情況及胃黏膜大體情況隨著治療有不同程度的恢復(fù)。

2.2 各組大鼠體重的比較

表1顯示，與正常組比較模型組大鼠體重明顯下降(P＜0.01)，與模型組比較，樂胃飲各劑量組及維酶素組體重均明顯升高(P＜0.01)，樂胃飲中劑量組體重較維酶素組及樂胃飲高劑量組降低(P＜0.05)。

表1 樂胃飲對(duì)慢性萎縮性大鼠體重變化的影響(±s)

表1 樂胃飲對(duì)慢性萎縮性大鼠體重變化的影響(±s)

注:與正常組比較:☆☆P＜0.01;與模型組比較:△△P＜0.01;與維酶素組比較:○P＜0.05;與樂胃飲中劑量組比較:◇P＜0.05

組別 例數(shù) 體重(g)331.38±22.46模 型 組 8 260.88±18.68☆☆維 酶 素 組 8 310.25±23.46△△樂胃飲低劑量組 8 299.38±16.12△△樂胃飲中劑量組 8 290.00±14.69△△○樂胃飲高劑量組 8 312.12±9.83正常組8△△◇

2.3 掃描電鏡觀察

正常組:大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞緊密相連，沿著胃腺開口環(huán)形排列，結(jié)構(gòu)完整，胃小凹清晰，被覆一層黏液(圖 1-①)。

模型組:大鼠胃黏膜細(xì)胞萎縮，排列紊亂，上皮廣泛破潰、脫落，出現(xiàn)大小不等、形狀不規(guī)則的局灶性黏膜糜爛(圖1-②)。

維酶素組:大鼠胃黏膜細(xì)胞萎縮程度較輕，細(xì)胞表面粗糙，少量破潰(圖③)。

樂胃飲低、中劑量組:大鼠胃黏膜細(xì)胞萎縮程度較輕，細(xì)胞表面粗糙，可見黏液分泌，少量細(xì)胞破潰(圖 1-④⑤)。

樂胃飲高劑量組:大鼠胃黏膜細(xì)胞萎縮不明顯，可見黏液分泌，偶見細(xì)胞破潰(圖1-⑥)。

3 討論

慢性萎縮性胃炎是臨床常見病，中醫(yī)屬“胃痛”、“嘈雜”、“痞滿”等范疇，其發(fā)病與外邪侵襲、飲食不節(jié)、情志不舒、脾胃虛弱有關(guān)，主要病機(jī)為脾運(yùn)不健，水濕不運(yùn)，清陽不升，濁陰不降。臨床胃鏡及組織學(xué)檢查顯示胃黏膜炎癥、糜爛、萎縮、腸上皮化生、異型增生等病理改變［3］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用水楊酸鈉灌胃、自由飲用MNNG水溶液，結(jié)合饑飽失常等綜合因素，可造成大鼠胃黏膜慢性損傷。從大體上看，與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜變薄，組織彈性減弱，可見明顯暴露的血管。SEM進(jìn)一步證實(shí)，模型組上皮層脫落明顯，局部出現(xiàn)糜爛等病變，說明造模成功。

圖1 各組大鼠胃黏膜掃描電鏡觀察

樂胃飲具有健脾理氣之功效，方中淮山藥補(bǔ)脾氣而益胃陰，培補(bǔ)脾胃，性質(zhì)平和;薏苡仁健脾滲濕，性微寒而不傷胃，益脾而不滋膩;陳皮理氣運(yùn)脾，調(diào)中快膈，性溫和且燥而不烈。此方組方思想明確，配伍精煉，補(bǔ)其虛以助其健而無滯脾礙胃之慮，祛其濕以順其性而無傷津耗液之弊，行其氣而和其用而無耗氣傷陰之害，充分體現(xiàn)了“健脾關(guān)鍵在運(yùn)脾”的主旨［4］?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)，組方中山藥具有抗菌消炎作用，且能修復(fù)上皮組織，促進(jìn)皮膚潰瘍面和傷口愈合，具有生肌作用［5］;薏苡仁具有增強(qiáng)機(jī)體體液免疫、鎮(zhèn)痛、解熱、抗炎等作用［6］;陳皮有促進(jìn)小鼠胃排空和腸推進(jìn)的作用，其揮發(fā)油對(duì)消化道有緩和的刺激作用，利于胃腸積氣的排出［7］。既往的臨床研究中，樂胃飲對(duì)慢性萎縮性胃炎有良好的效果。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，樂胃飲能使慢性萎縮性胃炎大鼠體重增加。掃描電鏡觀察顯示，其使裸露的大鼠胃黏膜上皮結(jié)構(gòu)修復(fù)，表面結(jié)構(gòu)基本完整，還可見到黏液分泌，說明樂胃飲保護(hù)了黏膜上皮細(xì)胞的功能，具有促進(jìn)組織修復(fù)的效果。

［1］朱君華，徐 珊.樂胃飲治療慢性萎縮性胃炎臨床研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2007，22(8):526-527.

［2］徐 珊，周嘉鶴，王常松，等.慢性萎縮性胃炎證病結(jié)合模型的復(fù)制［J］. 中國中醫(yī)藥科技，2008，15(1):6-8.

［3］陳新宇，姒健敏，朱有法.給藥條件下表皮生長(zhǎng)因子對(duì)萎縮性胃炎逆轉(zhuǎn)作用研究［J］.中華消化雜志，2003，23(5):312-316.

［4］徐 珊，楊 青，成信法，等.樂胃飲對(duì)脾虛實(shí)驗(yàn)大鼠胃泌素和胃動(dòng)素的影響［J］.中國醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004，19(1):20-22.

［5］李鋒濤，陳 毓.山藥的研究進(jìn)展［J］.海峽藥學(xué)，2008，20(10):91-93.

［6］張明發(fā)，沈雅琴.薏苡仁藥理研究進(jìn)展［J］.上海醫(yī)藥，2007，28(8):360-363.

［7］歐麗娟，劉啟德.陳皮藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2006，17(10):787-789.