白芷提取物歐前胡素對急性胸膜炎大鼠抗炎作用研究

胡 榮 李祖?zhèn)?楊 露 楊金榮

（成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075）

中藥白芷臨床應(yīng)用廣泛，具有抗炎等多種藥理作用［1］，其所含的白芷香豆素也被證實具有抗炎作用［2］。歐前胡素為白芷中含量相對較高的香豆素類成分之一。為深入認識白芷效應(yīng)物質(zhì)及其作用機制，本文在前期研究已證實歐前胡素抗炎作用的基礎(chǔ)上，選用角叉菜膠致大鼠急性胸膜炎模型進行抗炎實驗，并對炎性滲出液中炎癥介質(zhì)和過氧化物進行檢測，以進一步明確其抗炎作用和揭示其作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 雄性SD大鼠，體質(zhì)量（200±20）g。購于成都碩達生物科技公司，合格證號：SCXK（川）2008-24。

1.2 試劑與儀器 角叉菜膠，美國Sigma公司產(chǎn)品，批號17H1148；地塞米松磷酸鈉注射液，西南藥業(yè)股份有限公司，批號 060419；二甲苯，成都科龍化工試劑公司，批號20 060514；大鼠前列腺素 E2（PGE2）、白細胞介素（IL）-1β、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒，大連泛幫生物制品公司提供（美國RD公司生產(chǎn)，進口分裝），批號0741TS；一氧化氮試劑盒（批號20070124）、丙二醛（MDA）試劑盒（批號 20070320）、髓過氧化物酶（MPO）試劑盒（批號20070213），南京建成生物工程研究所提供；全自動多功能酶標儀，Bio-Rad公司。

1.3 藥物 白芷購于銀發(fā)集團遂寧白芷GAP種植基地，由成都中醫(yī)藥大學(xué)嚴鑄云教授鑒定為傘形科植物杭白芷Angelica dahurica （Fisch.exHoffm.）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）shanet Yuan 的干燥根。歐前胡素（imperatorin，又名歐芹素乙［3］）參照文獻方法［4］制備，用稀釋液配制成高、中、低質(zhì)量濃度（0.62、0.31、0.16 mg/mL）受試藥。阿司匹林（西安博華制藥有限責(zé)任公司，批號 061012）：取10 g溶解于5 mL DMSO中，加入 50 mL聚乙二醇混勻，逐漸加入蒸餾水混勻并定容至500 mL，制成2%溶液備用。稀釋液：5 mL DMSO與聚乙二醇50 mL混勻后，加入蒸餾水混勻并定容至500 mL。

1.4 造模及給藥 將大鼠按體質(zhì)量分層隨機分為正常對照組、模型對照組、陽性藥物對照組、溶劑對照組、受試藥高、中、低劑量組，每組10只。陽性藥物對照組于致炎前注射地塞米松（5mg/kg），受試藥高、中、低劑量組（15、7.5、3.8 mg/kg）分別灌胃相應(yīng)質(zhì)量濃度受試藥物，正常對照組和模型對照組灌胃等體積蒸餾水，溶劑對照組灌胃等體積稀釋液。連續(xù)給藥3 d。末次給藥后30 min，用乙醚輕度麻醉動物，于右胸膜腔內(nèi)注射1%角叉菜膠0.2 mL/100 g體質(zhì)量，正常對照組注入等體積生理鹽水。致炎后4 h各組動物灌胃相應(yīng)藥物或生理鹽水。

1.5 標本采集與檢測 致炎后5 h處死動物，剪開腹部皮膚暴露膈肌。于胸腔內(nèi)注入2 mL PBS液（含肝素50 U/mL）與胸腔內(nèi)液體混合均勻，收集洗液并測定體積。2000 r/min離心10 min，取上清液分別測定以下指標：雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量，按試劑盒說明硝酸還原酶法測定NO含量；ELISA法測定PGE2、IL-1、及TNF-α含量。沉淀物以生理鹽水稀釋至3 mL混勻進行白細胞計數(shù)。同時分離大鼠肺組織，加入生理鹽水勻漿為10%組織勻漿，按試劑盒說明測定過氧化脂質(zhì)產(chǎn)物MDA與MPO含量。

2 結(jié) 果

2.1 歐前胡素對大鼠胸膜炎模型的抗炎作用 見表1。與模型對照組比較，陽性藥物對照組和受試藥高劑量組滲出液體積、白細胞（WBC）計數(shù)及蛋白質(zhì)含量均有明顯降低（P<0.05或0.01）；受試藥中劑量組滲出液體積和WBC計數(shù)有明顯降低 （P<0.05或0.01）；受試藥低劑量組僅有滲液體積有顯著降低（P<0.05）。

表1 各組抗炎作用比較（）

表1 各組抗炎作用比較（）

與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

蛋白質(zhì)含量（mg/mL）正常對照組 10 0.11±0.01**1.04±1.20**86.21±5.22 12.17±0.63**0.83±0.07模型對照組 10 0.86±0.16 10.74±3.05 91.34±5.31 7.67±0.23 0.99±0.12陽性藥物對照組10 0.53±0.27**4.13±1.83**90.53±5.20 8.45±0.28 0.85±0.03*溶劑對照組 10 0.85±0.21 11.16±0.72 90.64±3.25 8.34±0.43 0.99±0.07受試藥高劑量組10 0.59±0.18**6.14±1.70**93.82±3.80 5.67±0.07 0.89±0.05*受試藥中劑量組10 0.65±0.12**7.21±1.17*92.42±6.30 6.54±0.04 0.93±0.06受試藥低劑量組10 0.68±0.27* 8.74±1.41 93.81±2.15 6.09±0.53 0.95±0.20組 別 n 滲出液體積（mL）WBC計數(shù)（×109）中性粒細胞（%）淋巴細胞（%）

2.2 歐前胡素對大鼠胸膜炎模型炎性滲出液中炎癥介質(zhì)的影響 見表2。與模型對照組比較，陽性藥物對照組和受試藥高劑量組滲出液中 PGE2、IL-1、TNF-α 有極顯著降低（P<0.01）；受試藥中劑量組滲出液中PGE2、IL-1顯著降低（P<0.05）；受試藥低劑量組滲出液中PGE2降低顯著（P<0.05）。

表2 各組滲出液中炎性介質(zhì)含量比較（）

表2 各組滲出液中炎性介質(zhì)含量比較（）

組別 n PGE2（pg/mL） IL-1（pmol/L） TNF-α（pmol/L）正常對照組 10 27.12±2.94**77.21±24.10 130.80±16.41**模型對照組 10 71.03±3.75 178.14±46.70 264.41±24.80陽性藥物對照組 10 51.43±7.62**128.68±41.14**148.18±23.03**溶劑對照組 10 70.46±5.87 171.22±27.08 282.21±20.17受試藥高劑量組 10 61.04±4.54**161.20±41.28**186.27±18.39**受試藥中劑量組 10 64.13±6.85* 168.91±36.48* 221.62±23.30受試藥低劑量組 10 67.05±7.41* 170.57±27.45 241.78±30.52

2.3 歐前胡素對大鼠胸膜炎模型肺組織中MDA、MPO的影響見表3。與模型對照組比較，陽性藥放對照組和受試藥高劑量組MDA含量均有極顯著降低（P<0.01），受試藥中劑量組有顯著降低（P<0.05）；受試藥各劑量組MPO含量有下降的趨勢。

3 討 論

白芷為常用中藥之一，具有發(fā)散風(fēng)寒，燥濕止癢、止痛通竅，消腫排膿的功效?？捎糜陲L(fēng)寒表證、疼痛證、鼻淵、濕濁證、瘡瘍、蟲蛇咬傷等多種病證的治療［5］。其中白芷的醚提液、醇提液、水煎液均有抗炎的作用，且脂溶性成分為有效部位［6］。歐前胡素為中藥白芷中含量相對較高的香豆素成分之一，其抗炎作用較為全面系統(tǒng)的研究尚未見報道。本文在前期采用大鼠足腫脹法、小鼠耳腫脹法及小鼠腹腔毛細血管通透性亢進法已證實歐前胡素抗炎作用的基礎(chǔ)上，選用大鼠急性胸膜炎模型進行實驗研究，以進一步明確歐前胡素的抗炎作用及作用機制。所選用模型為急性炎癥模型，與白芷主治病證多為驟感外邪所致的特點一致，與中醫(yī)藥研究特色相符。

表3 各組肺組織中MDA、MPO含量比較（）

表3 各組肺組織中MDA、MPO含量比較（）

組別 n MDA（nmol/mL） MPO（U/g）正常對照組 10 1.15±0.67** 0.56±0.14**模型對照組 10 7.16±1.43 1.34±0.39陽性藥物對照組 10 2.34±1.70** 0.98±0.11溶劑對照組 10 7.20±1.36 1.33±0.58受試藥高劑量組 10 2.98±1.52** 1.01±0.14受試藥中劑量組 10 4.87±1.10* 1.13±0.23受試藥低劑量組 10 5.84±2.03 1.20±0.37

實驗結(jié)果顯示，歐前胡素對大鼠胸膜炎模型胸膜腔內(nèi)炎性滲出、WBC增多、蛋白質(zhì)滲出有抑制作用，進一步證實其抗炎作用；能降低PGE2在炎性滲出液中含量，提示歐前胡素抗炎作用機制可能與抑制環(huán)氧化酶減少PGE2生成有關(guān)。TNF-α是炎癥調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵介質(zhì)，可直接操作血管內(nèi)皮細胞，誘導(dǎo)IL-1、IL-6等釋放，從而激活更多的炎性細胞，釋放更多的炎癥介質(zhì)，引發(fā)一系列失控的炎癥反應(yīng)。歐前胡素能降低炎性滲出液中IL-1、TNF-α的含量，表明抑制促炎細胞因子的分泌也是其抗炎作用機制之一。

炎癥的發(fā)生發(fā)展與自由基的損傷關(guān)系密切，氧自由基與不飽和脂肪酸形成的過氧化脂質(zhì) （LOP）。MDA為LOP的代謝產(chǎn)物，其含量可反映體內(nèi)自由基與脂類反應(yīng)的情況。歐前胡素能抑制大鼠胸膜炎模型肺組織中MDA的升高，提示其抗炎作用與抗氧化作用有關(guān)。MPO是炎癥反應(yīng)中活化的中性粒細胞、單核細胞、組織巨噬細胞分泌和一種過氧化物酶，其可催化氧化物的產(chǎn)生，破壞一氧化氮的調(diào)節(jié)作用，放大炎癥局部反應(yīng)。研究中，歐前胡素對肺組織中MPO含量有降低趨勢，但無統(tǒng)計意義，尚需進一步研究予以證實。

本研究證實了歐前胡素的抗炎作用，明確了其作用機制與抑制花生四烯酸代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生、抑制促炎細胞因子釋放以及抗氧化作用相關(guān)。研究結(jié)果為闡明歐前胡素為白芷效應(yīng)物質(zhì)之一提供了實驗依據(jù)，也為進一步相關(guān)深入研究奠定了一定基礎(chǔ)。

［1］李永超.白芷的藥理作用研究進展［J］.國外醫(yī)藥：植物藥分冊，2007，22（4）：161-164.

［2］王德才.杭白芷香豆素組分解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2005，12（11）：36-37.

［3］楊云，張晶，陳玉婷.天然藥物化學(xué)成分提取分離手冊［M］.2版.中國中醫(yī)藥出版社，2003：204.

［4］周繼銘.白芷的研究Ⅷ歐芹素乙的大量制備法［J］.瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1989，12（6）：429-430.

［5］雷載權(quán)，張廷模.中華臨床中藥學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：218-225.

［6］李宏宇，戴躍進，張海波，等.中藥川白芷的藥理研究［J］.華西藥學(xué)雜志，1991，6（1）：16.