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    啤特果粗多糖提取工藝優(yōu)化*

    2012-11-28 07:32:58楊明俊吳婧王永剛李志忠
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2012年1期
    關(guān)鍵詞:液料乙醇多糖

    楊明俊,吳婧,王永剛,李志忠

    1(蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅 蘭州,730050)2(蘭州金川新材料股份有限公司,甘肅金昌,730000)

    啤特果粗多糖提取工藝優(yōu)化*

    楊明俊1,吳婧2,王永剛1,李志忠1

    1(蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅 蘭州,730050)2(蘭州金川新材料股份有限公司,甘肅金昌,730000)

    優(yōu)化啤特果粗多糖的提取工藝。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,采用三因素三水平響應(yīng)面分析法,依據(jù)回歸分析確定各工藝條件的影響因素。結(jié)果表明:啤特果粗多糖提取的最佳工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)為72%,液料比為15∶1(mL:g),提取溫度83℃,多糖最大提取率為7.49%。響應(yīng)面優(yōu)化法能夠提高啤特果的粗多糖提取率。

    啤特果,粗多糖,提取,響應(yīng)面分析法

    啤特果原名皮囊果,又名“酸巴梨”,屬薔薇科蘋果亞科新疆梨系統(tǒng)(Pyrus sinkiangensis),生長(zhǎng)在甘肅省和政縣海拔約為2 100~2 400 m的千年古老樹種,品味酸甜、性溫,含有多種氨基酸、糖類、維生素和鉀、鈣、鐵等微量元素,是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極其豐富的綠色水果[1]。

    多糖是水果中一類重要的功能因子,具有抗腫瘤[2]、抗疲勞[3]、抗損傷[4]、抗氧化[5-6],增強(qiáng)人體免疫力和抗癌的作用。

    鑒于目前對(duì)啤特果多糖研究甚少,本實(shí)驗(yàn)研究了乙醇濃度、液料比、提取時(shí)間和浸提溫度對(duì)啤特果多糖提取率的影響,利用響應(yīng)面分析法對(duì)其提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,以獲得啤特果多糖提取的最佳工藝條件,為啤特果多糖的應(yīng)用研究提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    啤特果,于2010年10月采自甘肅省和政縣;無水乙醇、三氯乙酸等藥品均為分析純。

    1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

    ALC-110.4電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司),TGL-16C高速臺(tái)式離心機(jī)(上海安亨科學(xué)儀器廠),RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮儀器有限公司),F(xiàn)D-1型冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 工藝路線

    稱取定量新鮮啤特果清洗去皮→破碎打漿→熱水浸提→去除蛋白→離心分離上清液→真空濃縮→醇沉→真空冷凍干燥得啤特果粗多糖→溶解定容→苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量

    1.3.2 蛋白去除方法

    參照 Sevag 法[8]。

    1.3.3 多糖含量與提取率的計(jì)算

    1.3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    參照苯酚-硫酸法[9],以葡萄糖濃度X為橫坐標(biāo)(μg/mL),吸光度Y為縱坐標(biāo),在485 nm處測(cè)定吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為Y=0.060 7x-0.056 9,R2=0.997 7,說明葡萄糖 0 ~100 μg內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

    1.3.3.2 樣品多糖含量的測(cè)定

    將凍干的多糖樣品溶解,定容至100 mL,精密吸取1 mL樣品溶液,采用苯酚-硫酸法[9],在480 nm處測(cè)定吸光值,從而利用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中多糖的含量。多糖提取率用下式計(jì)算:

    1.3.4 單因素及響應(yīng)面分析

    取一定量的啤特果,破碎勻漿,取樣4份,每份約80 g,按一定的液固比量取一定量的蒸餾水于250 mL回流錐形瓶中,在一定溫度下進(jìn)行回流提取,濃縮提取液,采用不同濃度乙醇進(jìn)行醇沉,離心分離,冷凍干燥,稱重,溶解定容至100 mL,測(cè)定多糖含量,計(jì)算多糖提取率。分別確定最佳提取時(shí)間、液料比、溫度及乙醇濃度。在單因素基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)化最佳提取工藝。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

    2.1.1 不同濃度乙醇對(duì)多糖提取率的影響

    啤特果中含單糖、雙糖、低聚糖、氨基酸及醇溶性蛋白質(zhì)等物質(zhì),由于多糖溶于水而不溶于高濃度乙醇,根據(jù)此原理先用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇80℃回流1 h,提取1次,除去單糖、低聚糖等對(duì)多糖提取率有影響的物質(zhì),然后在浸取溫度為80℃,料水比15∶1,提取2h,采用不同濃度乙醇進(jìn)行沉淀,結(jié)果見圖1。從圖1中可知,隨著乙醇濃度的增加,醇析程度亦有所提高,但是當(dāng)乙醇濃度從67%增加到75%時(shí),多糖提取率變化趨緩,而且當(dāng)乙醇濃度增加到80%時(shí),析出效果不好,究其原因可能是高濃度醇對(duì)多糖構(gòu)象有影響,因此選用67%(即濃縮液與乙醇體積比為1.0∶2.0)的乙醇醇析啤特果多糖。

    圖1 乙醇濃度對(duì)多糖提取率的影響

    2.1.2 不同液料比對(duì)多糖提取率的影響

    液料比對(duì)提取率具有重要影響,水量多有利于多糖的擴(kuò)散傳質(zhì),但水量過多增加蒸發(fā)處理的困難。在浸提溫度80℃、浸提時(shí)間2 h,醇析濃度為67%條件下,改變液料比進(jìn)行多糖提取,結(jié)果見圖2。

    圖2 液料比對(duì)多糖提取率的影響

    由圖2可知,隨著液料比的增加多糖的提取率有所提高,但是當(dāng)液料比達(dá)到17∶1時(shí),隨著液料比的增加提取率反而降低,沒有明顯的增高,因此選用17∶1的液料比較為合適。

    2.1.3 不同溫度對(duì)多糖提取率的影響

    提取溫度是影響啤特果多糖提取率的重要因素。溫度的升高有助于多糖的有效提取,在液料比15∶1,浸提時(shí)間2h,醇析濃度為67%條件下,改變浸提溫度比進(jìn)行多糖提取,溫度對(duì)多糖提取率影響曲線見圖3。由圖3可知,隨著溫度的升高,多糖的提取率有所提高,但是達(dá)到80℃以后提取率的增加程度不是很明顯,考慮到設(shè)備及能耗的情況,因而選用80℃較為合適。

    圖3 溫度對(duì)多糖提取率的影響

    2.1.4 不同提取時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響

    為了保證多糖的充分提取,在液料比15∶1,浸提溫度為80℃,醇析濃度為67%條件下,改變提取時(shí)間進(jìn)行多糖提取,由圖4可知,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),啤特果多糖的提取率有所提高,但是提取率增加的程度變化不是很明顯,因此提取時(shí)間對(duì)啤特果多糖的影響不大,出于經(jīng)濟(jì)考慮一般選用1 h的時(shí)間較為合適。

    圖4 提取時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響

    2.2 響應(yīng)面法提取條件的優(yōu)化

    2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

    根據(jù)Box-Behnken[10]中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果,選取提取時(shí)間為1h,對(duì)啤特果多糖提取影響顯著的3個(gè)因素 (乙醇濃度、液料比、浸提溫度),設(shè)計(jì)了3因素3水平的響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn),水平及編碼表見表1。

    表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平編碼表

    表2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

    使用Design Expert7.0軟件,以乙醇濃度、液料比、提取溫度為響應(yīng)變量,以啤特果多糖提取率為響應(yīng)值對(duì)表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,得到表3回歸方程方差分析表,利用軟件進(jìn)行非線性回歸的二次多項(xiàng)式擬合,得到預(yù)測(cè)模型如下:

    表3 回歸方程方差分析表

    由表3回歸方差分析顯著性檢驗(yàn)表明,該模型回歸顯著(P<0.000 1),失擬項(xiàng)顯著,模型 R2=0.995 2,R2Adj=0.989 1,說明該模型與實(shí)際實(shí)驗(yàn)擬合較好,自變量與響應(yīng)值之間線性關(guān)系顯著,可以用于啤特果多糖提取工藝實(shí)驗(yàn)的預(yù)測(cè)。

    2.2.2 各因素之間的交互作用

    圖5 液料比和乙醇濃度對(duì)多糖提取率影響的響應(yīng)面圖

    圖6 溫度和乙醇濃度對(duì)多糖提取率影響的響應(yīng)面圖

    圖7 溫度和液料比對(duì)多糖提取率影響的響應(yīng)面圖

    根據(jù)回歸方程,做出響應(yīng)面分析圖,如圖5~圖7,結(jié)合方差分析結(jié)果表明:FA=3.91,F(xiàn)B=70.89,F(xiàn)C=106.97,各因素的F值越大,表明對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)的影響越大,即重要性越大。由此,各因素對(duì)啤特果多糖提取率的影響程度大小順序?yàn)?C(提取溫度)﹥B(液料比)﹥A(乙醇體積分?jǐn)?shù))。

    2.2.3 最佳工藝條件及其驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

    為進(jìn)一步確定最佳點(diǎn),在模型濃度范圍內(nèi)選擇出發(fā)點(diǎn),使用快速上升法進(jìn)行優(yōu)化得到的啤特果多糖提取的最佳方案為:乙醇體積分?jǐn)?shù)為72.77%,液料比為15.33∶1(mL:g),提取溫度83.06℃。啤特果多糖提取率7.229 34%??紤]到實(shí)際操作的便利,將提取工藝參數(shù)修正為乙醇體積分?jǐn)?shù)為72%,液料比為15∶1,提取溫度為83℃。以上述條件進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果的驗(yàn)證,重復(fù)3次實(shí)際測(cè)得的多糖提取率分別為7.15%、7.01%、8.31%,平均多糖提取率為7.49%。與理論預(yù)測(cè)值相比,其相對(duì)誤差約為3.61%。說明通過響應(yīng)面優(yōu)化后得出的回歸方程具有一定的實(shí)踐意義。

    4 結(jié)論

    通過單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),及在此基礎(chǔ)上的三因素三水平響應(yīng)面分析法試驗(yàn),確定了啤特果多糖提取的最佳工藝參數(shù)為:提取溫度83℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)72%、液料比15∶1(mL:g),在此條件下多糖提取率為7.49%。

    [1] 安樹康.皮胎果梨營(yíng)養(yǎng)成分定量分析[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng).2005(6):43-46.

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    Optimization of Extraction Processing of Polysaccharide from Piteguo by Response Surface Methodology

    Yang Ming-jun1,Wu Jing2,Wang Yong-gang1,Li Zhi-zhong1
    1(School of Life Science and Engineering,Lanzhou University of Technology,Lanzhou 730050,China)2(Lanzhou Jinchuan New Meterials Co.,Ltd.,Jinchang 730000,China)

    To optimize the extraction processing of polysaccharide from Piteguo.Based on single-factor experiments and the principles of Box-Behnken central composite experimental design,response surface methodology(RSM)with 3 factors and 3 levels was used to explore the effect of each factor on extraction rate of polysaccharide.The optimal extraction processing conditions of polysaccharide were Ethanol concentration of 72%,water-material ratio of 15:1(mL/g)and extraction temperature of 83℃.Under the optimal extraction conditions,the extraction rate of polysaccharide was up to 7.49%.Conclusion:RSM can improve extraction rate of polysaccharide from Piteguo.

    Piteguo,polysaccharide,extraction,response surface methodology(RSM)

    博士,副教授。

    *甘肅省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(0908ZTB090),蘭州理工大學(xué)博士基金項(xiàng)目(0908ZXC129)

    2011-07-13,改回日期:2011-10-23

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