黃連酊對107株致病菌株體外抑菌實驗的觀察報告

劉旭琴，邱連利，喬登嫣

（甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050）

黃連酊是甘肅省中醫(yī)院研制的中藥制劑，具有清熱燥濕、瀉火解毒、解毒療瘡和緩解局部腫脹的作用[1]。臨床上用于點滴或濕敷骨外固定器皮膚針眼[2]和治療Ⅲ～Ⅳ期壓瘡[3]，以達到防治針眼局部炎癥和治療壓瘡的目的。我院創(chuàng)傷二骨科自制黃連酊，廣泛應(yīng)用于骨科護理工作中取得了滿意的護理和治療效果。本研究通過黃連酊對質(zhì)控菌株及從臨床分泌物標(biāo)本中分離的107株致病菌株的體外抑菌實驗觀察，驗證黃連酊的消毒功能。

參照《醫(yī)院消毒技術(shù)規(guī)范》（2009）中消毒產(chǎn)品檢驗技術(shù)規(guī)范，《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB15982-1995），考慮到黃連酊以75%乙醇為溶劑，故選用標(biāo)準(zhǔn)中要求的乙醇中和劑為消毒過程中殘留黃連酊的中和劑，通過篩選，鑒定合格，進行黃連酊體外抑菌實驗。

1 實驗材料[4]

（1）乙醇中和劑（普通營養(yǎng)肉湯）。

（2）0.5 麥?zhǔn)媳葷峁堋?/p>

（3）實驗菌種：質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC 6538、銅綠假單胞菌ATCC 15442、大腸桿菌8099、白色念珠菌ATCC 10231，臨床分泌物標(biāo)本中分離出的107株致病菌。

（4）生理鹽水。

（5）細菌培養(yǎng)基：胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA），胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）等。

（6）革蘭染色液。

（7）恒溫箱。

（8）5.0 ml注射器。

（9）數(shù)字可調(diào)移液器（500 μl，1000 μl）及配套用一次性塑料吸頭。

（10）漩渦震蕩儀。

2 實驗方法[5]與結(jié)果

2.1 菌懸液的制備

取凍干質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 6538菌種管，在無菌操作下打開，以注射器加入適量營養(yǎng)肉湯，振搖混勻，使菌種溶化分散。取含5.0 ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，置35℃培養(yǎng)24 h。用接種環(huán)取菌懸液，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，于35℃培養(yǎng)24 h。刮取菌落至5 ml生理鹽水中，制備成0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，用漩渦震蕩儀振蕩20 s，以使細菌懸浮均勻。

2.2 中和劑鑒定實驗

2.2.1 初選實驗 （1）將0.5 ml實驗菌懸液加入含 4.5 ml乙醇中和劑試管中，混勻，作用30 min后，取1.0 ml接種平皿，用TSA傾注法培養(yǎng)。

（2）將 0.5 ml實驗菌懸液加入含 4.5 ml中和產(chǎn)物（黃連酊與乙醇中和劑1∶9混合液）試管中，混勻，作用30 min后，取1.0 ml接種平皿，用TSA傾注法培養(yǎng)。

（3）實驗同時設(shè)陽性對照組。陽性對照組以0.5 ml菌懸液加入含 4.5 ml生理鹽水試管中，混勻，作用30 min后，取1.0 ml接種平皿，用TSA傾注法培養(yǎng)。

24 h后平板上長出的菌落數(shù)分別為46、58、66，如果以陽性對照組66為標(biāo)準(zhǔn)，前兩組長菌數(shù)為（66±50%×66）以內(nèi)，初選合格，下面進行正式的鑒定實驗。

2.2.2 正式的鑒定實驗 按照表1分組實驗，加入量分別為黃連酊 0.5 ml，菌懸液 0.5 ml，中和劑 4.5 ml，第二組和第四組實驗中前兩種成分作用30 min后加入最后一種試劑，最后經(jīng)振蕩混勻，吸取1.0 ml接種平皿，用TSA傾注法培養(yǎng)48 h觀察結(jié)果（見表 1）。

表1 黃連酊體外抑菌實驗方法

結(jié)果顯示：第二組菌落數(shù)超過第一組，第三組、第四組、第五組組間結(jié)果差異＜15%，符合規(guī)范要求。連續(xù)3次實驗均合格。

2.3 黃連酊對質(zhì)控菌的抑菌實驗

將質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 6538、銅綠假單胞菌ATCC 15442、大腸桿菌8099、白色念珠菌ATCC 10231如前所述制備成0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，各抽?.5 ml于無菌試管中，分別加入0.5 ml黃連酊，振蕩混勻作用30 min后，加入4.5 ml乙醇中和劑，再次振蕩混勻，吸取1.0 ml接種平皿，用TSA傾注法培養(yǎng)，每株菌做雙份平行檢測，培養(yǎng)48 h觀察結(jié)果，8個平板均無菌生長（見表2）。

表2 黃連酊對質(zhì)控菌的抑菌實驗

2.4 黃連酊對臨床分離致病菌的抑菌實驗

同樣的方法對從臨床送檢的分泌物標(biāo)本中分離出的107株細菌進行抑菌實驗。參照醫(yī)院衛(wèi)生消毒劑標(biāo)準(zhǔn)，＜100 cfu/ml為合格，證明黃連酊對以上菌種均有消毒作用。

3 結(jié)論

通過黃連酊對質(zhì)控菌株及臨床分泌物標(biāo)本中分離的107株致病菌株的體外抑菌實驗觀察，發(fā)現(xiàn)黃連酊對葡萄球菌、腸桿菌科細菌、非發(fā)酵細菌、弧菌科細菌、酵母樣真菌均有抑制作用，尤其對令臨床頭痛的產(chǎn)ESBLS的肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌、變形桿菌、產(chǎn)頭孢菌素酶的產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、產(chǎn)MBL酶的銅綠假單胞菌、不動桿菌、耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌抑制效果明顯。

4 討論

4.1 必要性

黃連酊制劑在我院已應(yīng)用于外固定針眼的換藥，壓瘡的換藥等骨科護理工作中，并取得滿意的護理效果。黃連酊中黃連具有清熱燥濕、瀉火、解毒療瘡和緩解局部腫脹的作用，現(xiàn)代藥理研究表明其有抗微生物和抗原蟲作用[6]。通過黃連酊對家兔急性皮膚刺激性實驗、破損皮膚刺激性實驗及多次皮膚刺激性實驗[7]，進一步證明，黃連酊對家兔無明顯急性毒性作用，對家兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性，是一種毒性小、安全性較高的外用制劑。通過黃連酊對質(zhì)控菌株及臨床分泌物標(biāo)本中分離的107株致病菌株的體外抑菌實驗觀察，發(fā)現(xiàn)黃連酊抑菌效果明顯，可以在臨床推廣。

4.2 優(yōu)點

我院自制中藥黃連酊能促進組織細胞增長、增強自身免疫力，加速傷口的愈合，使炎性滲出明顯減少，促進肉芽組織生長，節(jié)約護士換藥時間，既縮短了療程，又減輕了患者的經(jīng)濟負擔(dān)。通過臨床長期實踐證明，該藥療效顯著，抑菌作用明顯，價格低廉，經(jīng)濟實惠，毒副作用小，安全性較高，受到廣大患者的好評，對我院自制藥的發(fā)展起到促進作用，并且提高了我院自制藥物的經(jīng)濟效益及社會效益。

4.3 意義

我們通過質(zhì)量監(jiān)控和體外抑菌實驗等方法進一步明確了黃連酊的藥用價值，它用于熱毒之癰疽疔疥中療效顯著。用75%酒精浸泡黃連，藥效易出，既發(fā)揮了酒精活血化淤、消腫止痛、使感染被局限的作用，又可利用黃連清熱燥濕、瀉火解毒、減少滲出、抗感染的功效。

黃連酊外用治療壓瘡有藥源廣泛，使用方便，副作用少，老少皆宜的特點。我們通過使用黃連酊解決了外固定針眼炎癥及Ⅲ～Ⅳ期壓瘡給患者帶來的痛苦，為進一步治療創(chuàng)造了條件，也給臨床用藥提供了理論依據(jù)。黃連酊配制方便，療效確定，抑菌作用明顯，價格低廉，經(jīng)濟實惠[8]，無毒副作用，便于攜帶，也適合家庭使用，值得深入研究。

[1]馮玉香，申建軍，劉旭琴，等.黃連酊防治骨外固定器針孔炎癥80例效果分析[J].中華實用中西醫(yī)雜志，2009，22（4）：200-201.

[2]劉旭琴，燕中，馮玉香.黃連酊預(yù)防骨外固定針眼炎癥的臨床護理觀察[J].中華實用中西醫(yī)雜志，2006，19（20）：2435.

[3]劉旭琴，王彩霞，劉葉榮，等.濕性換藥治療壓瘡的療效探討[J].衛(wèi)生職業(yè)教育，2011，29（18）：9.

[4]衛(wèi)生部.消毒技術(shù)規(guī)范[S].2009.

[5]衛(wèi)生部.醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB15982-1995[S].1995.

[6]亓丹.黃連的藥理作用及臨床使用研究[J].中華醫(yī)藥雜志，2004（9）：30.

[7]馮玉香，劉旭琴.黃連酊防治骨外固定針眼炎癥臨床護理研究[J].中華實用中西醫(yī)雜志，2007，20（12）：1077.

[8]申建軍，劉旭琴，馮玉香.黃連酊治療骨外固定器針眼炎癥臨床療效觀察[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，28（10）：947.■