高效液相色譜法測(cè)定熱毒平顆粒中梔子苷的含量

溫琰

高效液相色譜法測(cè)定熱毒平顆粒中梔子苷的含量

溫琰

目的建立以高效液相色譜法測(cè)定熱毒平顆粒中梔子苷的含量測(cè)定方法。方法 用C18柱，流動(dòng)相為乙腈-水(13∶87)，檢測(cè)波長為238nm，流速為1.0 ml/min，柱溫：30℃。結(jié)果梔子苷進(jìn)樣量在0.221μg～4.420μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9994)，回收率為100.6%(RSD=0.6%)。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于熱毒平顆粒中梔子苷的含量測(cè)定。

高效液相色譜法;熱毒平顆粒;梔子苷;含量測(cè)定

熱毒平顆粒是由生石膏、金銀花、玄參、地黃、連翹、梔子、甜地丁、黃芩、龍膽、板藍(lán)根、知母和麥冬十二味藥材組成的中藥復(fù)方制劑，具有治療呼吸道感染、流感引起的頭痛、發(fā)熱、咳嗽、咽痛、多痰等的對(duì)癥治療，或化膿性扁桃體炎，急性涸炎，急性支氣管炎，單純性肺炎以及慢性上呼吸道炎癥等功效。梔子［2］含有多種環(huán)烯醚萜苷類化合物，包括梔子苷、羥異梔子、京尼平-1-B-龍膽雙糖苷、梔子苷酸和京尼平等。而梔子苷是主要的環(huán)烯醚苷類化合物，為梔子的主要有效成分，現(xiàn)采用高效液相色譜法測(cè)定熱毒平顆粒中的梔子苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器：Waters515高效液相色譜儀(515泵、2487雙波長紫外檢測(cè)器);BP211D電子天平。

1.2 試藥 梔子苷對(duì)照品(由中國藥品生物制品檢定所提供);3批熱毒平顆粒樣品(市售);水(超純水)，乙腈(色譜純)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［1］色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相：乙腈-水(13∶87);流速：1.0 ml·min;檢測(cè)波長：238nm;進(jìn)樣量：20.0μl;柱溫：30℃。理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。在此色譜條件下，梔子苷對(duì)照品及供試品溶液在相同的保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照溶液無吸收峰，說明陰性對(duì)照對(duì)試驗(yàn)無干擾。色譜見圖1。

2.2 溶液的制備 對(duì)照品溶液：精密稱取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，加水40 ml，振搖使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，每次30 ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，并轉(zhuǎn)移至25 m l量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

陰性對(duì)照溶液：取按處方及工藝制備的不含梔子藥材的樣品，同法制備陰性對(duì)照溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 線性關(guān)系與考察 取梔子苷對(duì)照品用甲醇分別制成每1 m l含 11.05μg、55.25μg、110.5μg、165.75μg、221.0μg 的溶液，精密吸取上述5種溶液各20μl，在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣，每種溶液進(jìn)樣2次，記錄色譜圖，測(cè)定梔子苷峰面積，以濃度(X)為橫坐標(biāo)，梔子苷峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，線性回歸方程為：Y=1364369.8 X+56688.1，相關(guān)系數(shù)：r=0.9994，結(jié)果表明梔子苷進(jìn)樣量在0.221μg～4.420μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性考察 精密度考察：精密吸取“2.3”項(xiàng)下的梔子苷對(duì)照品溶液20μl，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定梔子苷峰面積值，結(jié)果峰面積的RSD為0.4%，表明測(cè)定方法的精密度良好。

重現(xiàn)性考察：取同一批號(hào)的樣品，照“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定梔子苷峰面積值。結(jié)果含量的RSD為0.5%，表明測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性考察：取同一供試品溶液，分別于配制后第0、2、4、6和8小時(shí)按上述色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定梔子苷峰面積值。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為0.6%。結(jié)果表明該溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定，可滿足實(shí)驗(yàn)的要求。

2.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的供試品約1 g，共6份，分別精密加入梔子苷對(duì)照品溶液5 ml(濃度為：221μg/ml)。照“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制得供試品液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定梔子苷峰面積值，并計(jì)算梔子苷的含量。結(jié)果方法的回收率為100.6%，RSD=0.6%，表明方法準(zhǔn)確度良好(表1)。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 提取溶劑和提取方法的選擇［3］實(shí)驗(yàn)分別采用以50%甲醇為溶劑超聲處理30 min、以水溶劑溶解樣品后再用乙酸乙酯進(jìn)行提取及以水溶劑溶解樣品后再用水飽和正丁醇進(jìn)行提取。結(jié)果以水溶劑溶解樣品后再用水飽和正丁醇進(jìn)行提取，梔子苷的提取率最高。

3.2 流動(dòng)相的選擇［2］實(shí)驗(yàn)分別采用乙腈-水(13∶87)、乙腈-0.2%磷酸溶液(13∶87)和甲醇-水-醋酸(80∶20∶0.1)為流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-水(13∶87)為流動(dòng)相，分離效果最好。

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：231-232.

［2］王宇曉，李來生，任宇紅.梔子中梔子甙的高效液相色譜分析.江西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2001，25(4)：310-311.

［3］謝海青，陳斌，王彥，等.龍薈丸中梔子苷、龍膽苦苷、蘆薈苷和黃芩苷的多波長HPLC法測(cè)定.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2011，42(1)：48-50.

341000 贛州市食品藥品檢驗(yàn)所

2.6 樣品測(cè)定 取3批樣品，分別按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制得供試品液。按上述色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量為20.0μl，測(cè)定樣品梔子苷的含量。結(jié)果3批樣品每袋含梔子苷的平均含量分別為6.4 mg、6.0 mg、5.8 mg(n=3)。