養(yǎng)殖河豚魚的海洋尾絲蟲病病例

麻麗丹，王殿夫，于曉婕，吳 斌

（1.丹東出入境檢驗(yàn)檢疫局，遼寧 丹東118000；2.遼東學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系，遼寧 丹東118000；3.四川大學(xué)生命科學(xué)院，四川 成都610207；4.遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局，遼寧 大連116001）

2007年，遼寧丹東河豚魚養(yǎng)殖場時(shí)常發(fā)生一種由盾纖毛蟲感染導(dǎo)致的寄生蟲病，造成河豚不同程度的死亡，而且該病每年反復(fù)發(fā)作，給該產(chǎn)業(yè)帶來一定的經(jīng)濟(jì)損失，本文介紹了對該寄生蟲的分離培養(yǎng)和鑒定結(jié)果［1－2］。

1 材料與方法

1.1 材料 患病河豚魚取自遼寧丹東東港的河豚魚養(yǎng)殖場，患病河豚魚臨床表現(xiàn)為攝食不佳，病魚浮游水表面，不底棲，病魚體色發(fā)黑，黏液增多，體表潰爛，肌肉出現(xiàn)潰爛出血，背部白濁、脫皮，頭部紅腫，鰓蓋內(nèi)側(cè)腫脹、充血、積水，鰓褪色或糜爛，腹部膨脹，局部紅腫、出血或潰爛，鰭出血或潰爛，嚴(yán)重時(shí)腹腔積水，腹腔壁潰爛，肝臟出血或糜爛，腸道松弛、擴(kuò)張、透明、積水，腎臟液化。

1.2 寄生蟲的分離鑒定

1.2.1 寄生蟲的活體觀察和培養(yǎng) 寄生蟲的活體觀察：本病可根據(jù)外觀癥狀初步診斷后，從病魚或?yàn)l死魚的病灶組織上取少許樣品，制成水封片，在顯微鏡下觀察到大量蟲體，進(jìn)行觀察和拍照。

寄生蟲的培養(yǎng)：取健康的河豚魚1條，去內(nèi)臟去皮后取肌肉并用剪刀絞成細(xì)小的塊狀，放入玻璃燒杯內(nèi)并加入一定量的已滅菌海水，加熱煮沸30 min，用滅菌4層紗布過濾后放4℃冰箱保存?zhèn)溆?。培養(yǎng)基為海水：魚肉湯的比例為10∶1進(jìn)行配制，同時(shí)在培養(yǎng)基中加入一定量的青霉素（終濃度為25 mg／L）和鏈霉素（終濃度為25mg／L）。接種時(shí)用滅菌鑷子刮取魚病料部位的黏液，接完種后蓋上硅膠塞，并置于15℃～20℃的130r／min震蕩水域中震蕩培養(yǎng)24h，爾后室溫放置保存。

1.2.2 Wilbert之蛋白銀法染色觀察［3］蛋白銀染色技術(shù)最早為一組織染色法，Bodion（1937）首先將之應(yīng)用于原生動(dòng)物上，經(jīng)過幾十年來不斷的改進(jìn)，已成為纖毛蟲纖毛圖示顯示的最重要和最基本的方法。主要用以顯示蟲體的皮層及內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如纖毛下器、毛基體、核器及各種表膜下纖維系統(tǒng)等，而銀線系統(tǒng)則不被染色。具體步驟為：（1）蟲體于胚胎皿中用Bouin液或飽和升汞（HgCl2）固定20min左右，固定過程中可每隔0.5min將胚胎皿輕輕同方向旋轉(zhuǎn)以便蟲體集中在中央。（2）蒸餾水洗3～4次（Bouin液以水洗至無色為準(zhǔn)），操作時(shí)用粗口吸管自固定液表面小心吸去上層液，為防止蟲體浮起，應(yīng)至少留1mL余液于胚胎皿中，后用大口吸管（保持吸管垂直位）逐滴加入蒸餾水（應(yīng)靠近水面，并環(huán)繞四周但離開凹槽壁小心滴入，注意勿使水滴沿胚胎皿壁切入水底面攪動(dòng)蟲體）。（3）以最細(xì)微吸管小心將蟲體“吹”至皿中心。（4）用0.1%～0.2%次氯酸鈉或次氯酸鉀微量直接供到蟲體處以漂白至“透明”（約1～2min）。（5）蒸餾水洗2次（以完全清洗為度）。（6）將胚胎皿中蛋白銀濃度控制在約0.5%，加蓋后于50℃～60℃的恒溫箱底板上保持30～50 min（視不同種類的嗜染狀況及蟲體大小而調(diào)整時(shí)間）。（7）室溫下用0.1%～0.2%的顯影液顯影1～5min（或更短）。（8）鏡檢后用5%硫代硫酸鈉定影約5min。（9）蒸餾水洗1次（此時(shí)應(yīng)清潔蟲體），將蟲體轉(zhuǎn)入載玻片上并與等量的戴白膠混勻，用眉毛筆調(diào)體位（在必要時(shí)，如需腹面朝上等），除去余液，至溫箱烘片約10min。（10）常規(guī)脫水封片（70%酒精起－80%－90%－95%－100%－無水酒精和二甲苯混合液（1∶1）－二甲苯－二甲苯，以上過程每步約2～5min。其中在無水酒精中每步應(yīng)不少于5min，以確保徹底脫水）。

2 結(jié)果

2.1 寄生蟲的活體觀察結(jié)果 在顯微鏡下蟲體略成葵花籽形，長50～75μm，寬20～50μm，內(nèi)質(zhì)不透明，常有多個(gè)食物泡及內(nèi)儲顆粒，初步判斷為盾纖毛蟲，患病魚體和寄生蟲分別見圖1、2。

2.2 盾纖毛蟲的Wilbert之蛋白銀法染色結(jié)果蟲體的前半部稍向內(nèi)側(cè)彎曲，頂端裸毛區(qū)形成明顯的喙?fàn)钔黄?，呈指狀或尖角狀。體被纖毛，后端有1根較長的尾毛，大核位于身體的中央，近球形，被鑒定為海洋尾絲蟲。蛋白銀法染色結(jié)果分別見圖2。

該蟲可在魚體外行兼性寄生，通常是機(jī)會性地聚集在河豚魚體因損傷而潰爛的體表部位并大量繁殖，從而對宿主產(chǎn)生進(jìn)一步的協(xié)同加害作用，造成河豚魚類大量死亡，對養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)造成巨大的損失。

3 討論

盾纖毛蟲屬兼性寄生蟲，一般情況下營自由生活，以懸浮的微小顆粒物質(zhì)（細(xì)菌、微藻、原蟲等）為食；但在某些環(huán)境下，這些纖毛蟲可以表現(xiàn)為寄生性，吞噬某些軟體動(dòng)物、甲殼類及魚類的細(xì)胞和組織殘?jiān)⒃谄浣M織內(nèi)生長、繁殖。蟲體呈瓜子形，體表被有均勻一致的纖毛，大小大約為20～45μm（根據(jù)不同種類略有區(qū)別）。由于寄主生活的環(huán)境各不相同，因此盾纖毛蟲病的病原在不同的魚上也不盡相同。日本Ototake首次從以部分體表發(fā)白為特征而大批死亡的發(fā)病牙鲆魚群患病稚魚體表和內(nèi)臟大量檢出膜口類纖毛蟲，即盾纖類纖毛蟲。目前我國海水魚工廠化養(yǎng)殖中所發(fā)現(xiàn)的盾纖類纖毛蟲主要有能夠寄生于養(yǎng)殖大菱鲆的各組織器官的蟹棲異阿腦蟲、可引發(fā)牙鲆體表潰爛綜合征的指狀擬舟蟲以及紅鰭東方純冬季室內(nèi)越冬時(shí)的體表潰爛綜合征的水滴偽康纖蟲和貪食邁阿密蟲［4－5］。

通過調(diào)查我們發(fā)現(xiàn)，丹東河豚魚養(yǎng)殖場所用水源，主要是入圍海水，海水周圍即人類生活區(qū)，養(yǎng)殖用水從蓄水池流入魚池，未進(jìn)行過濾消毒等處理便使用，冬季室內(nèi)越冬期間養(yǎng)殖水中大量海洋尾絲蟲滋生，從而造成越冬期間河豚魚體表潰爛綜合征。因此在養(yǎng)殖過程中，保持良好的養(yǎng)殖環(huán)境尤其是良好水質(zhì)很重要。

［1］竇海鴿，劉彥，王亞軍.河豚養(yǎng)殖中幾種常見疾病及防治技術(shù)［J］.北京水產(chǎn)，2004，5（3）：26－28.

［2］姜長波.中國北方河豚魚養(yǎng)殖現(xiàn)狀與展望［J］.河北漁業(yè)，2001（5）：36－48，42.

［3］李福江，王潔，從裕泉，等.大菱鲆盾纖毛蟲病防治措施［J］.齊魯漁業(yè)，2005：22（10）：28.

［4］宋京輝，張?jiān)?大菱鲆盾纖毛蟲防治新技術(shù)［J］.科學(xué)養(yǎng)魚，2005（1）：49－50.

［5］宋微波，朱明壯，陳子桂，等.海水養(yǎng)殖水體中危害性纖毛蟲.原生動(dòng)物研究I.盾纖目習(xí)見類群的口器結(jié)構(gòu)及鑒別特征［J］.青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，30（2）：207－216.