三七皂苷對猴子上肢缺血再灌注的臨床應(yīng)用

陳麗玲 劉汝文 劉宗平

（1.云南省昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物學(xué)部，昆明 650031；2.江蘇省揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，揚州 225009）

三七是五加科人參屬，從中提純的有效活性成分三七總皂苷（PNS），是我國傳統(tǒng)的珍貴藥材具。經(jīng)過長期的探索三七皂苷（PNS）具有一定的中樞抑制、抗心律失常、抗心肌缺血、縮小心肌梗塞范圍、抗血小板聚集、阻止鈣離子內(nèi)流、增加腦組織中SOD 的含量、對急性腦缺血的保護(hù)等作用；并且能增加血管血流量和降低其阻力，從而改善微循環(huán)[1]。臨床用于通脈活絡(luò)止血、活血、散瘀、消腫止痛之功效[2]。其藥理機制與抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、保護(hù)組織抗氧化能力、擴張血管、改善微循環(huán)、影響自由基生成等有關(guān)[3]。對肢體缺血-再灌注的損傷及其后遺癥有確切療效。臨床上局部組織器官缺血（ischemia），將會導(dǎo)致實質(zhì)器官的損害，其損傷程度與缺血時間長短及殘存血流量的多少有關(guān)，短期不完全性缺血只引起可逆性損害，然而長時間的完全性缺血或嚴(yán)重缺血會導(dǎo)致梗死[4]。十多年來我們的籠養(yǎng)實驗猴前臂鉗在籠底板15例，缺血高達(dá)6h、水腫后無法伸縮。臨床中利用三七皂甙來改善血循環(huán)，特別在動物臨床上應(yīng)用較少，作者用三七皂苷治療9例猴（獼猴5只，食蟹猴4只）前肢缺血再灌注，常規(guī)治療6例猴（獼猴3只，食蟹猴3只）前肢缺血再灌注，作用效果比較明顯，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

多年籠養(yǎng)實驗獼猴8只、食蟹猴7只SCXK（滇）2008-0001，共15例，前肢從籠底板伸出被卡住，缺血、水腫直徑超過1倍，無法縮回，用電鋸切開后拉出手臂。

藥品：三七皂苷，規(guī)格：0.6g（云南云科藥業(yè)有限公司）批號：060103；青霉素：哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號：C04110416，鹽酸普魯卡因注射液：（江西四環(huán)生物股份有限公司）

國藥準(zhǔn)字H32023582 批號：080623；地塞米松磷酸鈉注射液：（天津金耀氨基酸有限公司）批號：0903031；肝素鈉注射液：（江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司）國藥準(zhǔn)字h32020612 批號：0104030

1.2 方法

拉出手臂，用繃帶扎住近心端，用肝素鈉從遠(yuǎn)心端封閉，10 min慢慢松開繃帶，再用5%葡萄糖100 ml稀釋0.6 g三七皂苷靜脈滴注，連用3 d后，手臂完全恢復(fù)。另一組常規(guī)用藥未加三七皂苷，治療效果比較詳見表1。抽血涂片瑞士染色看用藥前后細(xì)胞凋亡情況。染色及判斷細(xì)胞：用瑞氏染色，凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為3期：Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊[5]，所數(shù)細(xì)胞都屬第Ⅱb期產(chǎn)生凋亡小體細(xì)胞，凋亡率詳見表1。

表1 實驗動物藥效比較表

2 結(jié)果

用SPSS11.0軟件處理統(tǒng)計，結(jié)果詳見表1。從表中可以看出：三七總皂苷（PNS）對缺血-再灌注有明顯的保護(hù)作用，猴前肢主靜、動脈血管的無意阻斷時間超過2 h以上再灌注，用三七皂苷治療9只猴子，4 d治療后治愈5只，死亡1只；常規(guī)治療6只猴子，4 d后治愈2只，死亡2只，剖解見手臂水腫、淤血，潰爛、心肌有部分蒼白梗死區(qū)。治療組總有效率與對照組比較差異顯著（p＜0.05）。用三七皂苷治療的猴子取全血圖片觀察細(xì)胞凋亡核裂解率4%，常規(guī)用藥的凋亡率6%，三七皂苷治療組與常規(guī)組比較（p＞0.05），說明三七對細(xì)胞凋亡有一定保護(hù)作用。

3 討論

資料顯示大鼠腹主動脈阻斷后1 h肢體損傷程度輕，可恢復(fù)，阻斷大于1 h后各種指標(biāo)變化幅度大，骨骼肌細(xì)胞損傷程度嚴(yán)重，可能會影響肢體功能，但經(jīng)三七總皂苷（PNS）治療組再灌注后的損傷比非治療組輕[5]。維持這一反應(yīng)進(jìn)行的底物過氧化氫來源于中性粒細(xì)胞NADPH氧化酶，產(chǎn)生的超氧化物的歧化淋巴中性粒細(xì)胞參與骨骼肌、心臟、小腸、腦、肺等組織器官的缺血再灌注損傷過程[3]，依據(jù)：（l）粒細(xì)胞在缺血再灌注組織中積聚；（2）清除循環(huán)中性粒細(xì)胞可以大大減輕缺血再灌注微血管和實質(zhì)細(xì)胞的功能障礙；（3）防止中性粒細(xì)胞激活和/或淋巴細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的制劑可以有效的減輕缺血再灌注所致組織損傷[3]。激活的中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞釋放的活性氧在缺血再灌注誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞聚集中起作用。毛細(xì)血管后靜脈暴露于外源性過氧化氫或超氧化物可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞粘附，而且超氧化物歧化酶和過氧化氫酶均可抑制缺血再灌注后靜脈內(nèi)的中性粒細(xì)胞粘附。三七皂苷（PNS），具有止血祛淤，止痛活血等多種療效。PNS在靜脈注射后濃度極高，在體內(nèi)具有抗氧化和鈣通道阻滯樣作用。本臨床應(yīng)用證實它對肢體缺血再灌流損傷有明顯保護(hù)作用，減少心、腦梗塞的出現(xiàn)。

[1]周小玲，李永偉，程建祥 三七總皂貳抗大鼠失血性休克及對腸系膜微循環(huán)的影響[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，23（4）：60-61

[2]唐旭東，姜建青，劉寶玉等三七總皂昔對心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的分子機制[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，22（l）：34-38

[3]俞恩珠.三七總皂貳對心腦血管系統(tǒng)的藥理作用[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，10（4）：66-67

[4]肖敏，樊均明 三七總皂苷在腎間質(zhì)纖維化中的藥理作用[J].中國臨床康復(fù)，2006，10（31）：139-141

[5]王東吉，武凡 三七皂甙單體Rb1 對大鼠腦缺血再灌注時腦細(xì)胞凋亡及cPLA2 蛋白表達(dá)的影響[J]中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2007，5（5）：414-417