抗著絲點(diǎn)抗體在肝病患者中的檢測(cè)及其意義

馮 霞，閆惠平，劉燕敏，廖慧鈺，張海萍，馬胤雪

（首都醫(yī)科大學(xué)北京佑安醫(yī)院，北京100069）

自1980年首次發(fā)現(xiàn)抗著絲點(diǎn)抗體［1］（anti－centromere antibodies，ACA）ACA是系統(tǒng)性硬化癥局限性的標(biāo)志性抗體。但隨著自身抗體檢測(cè)的普及和檢測(cè)水平的不斷提高，在其他疾病中也可檢出抗著絲點(diǎn)抗體，尤其是近年來(lái)我們發(fā)現(xiàn)在肝功能異常的患者中間常見(jiàn)到ACA陽(yáng)性。為探討抗著絲點(diǎn)抗體在肝功異常患者中檢出情況及這部分患者的臨床及生化特征，收集10000例肝功異?；颊叩难暹M(jìn)行抗著絲點(diǎn)抗體檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 血清采集 收集2004年7月－2008年7月住院肝功能異?；颊?0000例清晨空腹不抗凝血2 ml，離心后吸取血清，20℃冰箱保存。

1.2 間接免疫熒光法 （IFA，德國(guó)Eurolmmun公司試劑）檢測(cè)血清中抗核抗體（ANA）、抗線粒體抗體（AMA）、抗平滑肌抗體（S MA）抗細(xì)胞骨架抗體。采用HEp－2細(xì)胞和5種組織（猴肝臟和心肌組織、大鼠肝、腎和胃組織）的冰凍切片作為抗原，以生物薄片技術(shù)將帶有細(xì)胞和組織的6種切片組成一個(gè)反應(yīng)區(qū)。待檢血清自1∶100起稀釋，與各種組織共同孵育30分鐘，加入異硫氰酸熒光素標(biāo)記的抗體孵育30分鐘，洗片、封片后熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。組織或細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)特征性綠色熒光，血清稀釋度≥1∶100為陽(yáng)性。

1.3 免疫印跡法檢測(cè)抗著絲點(diǎn)抗體 將各種高度純化的各種抗原平行包被于檢測(cè)膜條上，固定后，將膜置室溫孵育槽內(nèi)，加入緩沖液震蕩孵育30分鐘，棄緩沖液，加入稀釋待檢血清，孵育震蕩30分鐘，洗片，加入ALP標(biāo)記的第二抗體，再震蕩洗片，顯色。檢測(cè)膜條上出現(xiàn)藍(lán)紫色條帶為陽(yáng)性，以試劑公司提供的陽(yáng)性條帶位置標(biāo)準(zhǔn)圖判斷結(jié)果。

1.4 應(yīng)用EL ISA法檢測(cè)各種肝炎病毒 （包括HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、CMV、EBV）標(biāo)記物。

1.5 應(yīng)用全自動(dòng)生物化學(xué)分析儀檢測(cè) ALT、AST、TBil、DBil等肝功能指標(biāo)及IgG、IgA、IgM。

1.6 診斷標(biāo)準(zhǔn) PBC的診斷參照2000年美國(guó)肝病學(xué)會(huì)“PBC診斷治療指南”，AIH的診斷參照1999國(guó)際自身免疫性肝炎工作組制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，病毒性肝炎及肝硬化參照2000年病毒性肝炎防治指南。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料正態(tài)分布采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)分布計(jì)量資料以中位數(shù)M表示，采用配對(duì)秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝病患者中抗著絲點(diǎn)抗體的檢出 10000例肝功異常患者血清中檢測(cè)出抗核抗體陽(yáng)性、著絲點(diǎn)型134例，占1.34%。其中男性30例，女性104例，平均年齡55.73±14.16（16－86）。除 ACA以外，部分患者同時(shí)檢出伴有一種或兩種其他自身抗體，主要的比例分布見(jiàn)表1。

表1 ACA陽(yáng)性患者的情況

2.2 臨床診斷

134例ACA陽(yáng)性患者，診斷為硬化型肝病的有83例，包括PBC、PBC和AIH重疊癥、肝炎肝硬化以及原發(fā)性肝癌硬化型。診斷為非硬化型肝病的有51例，包括病毒性乙型肝炎、自身免疫性肝炎、藥物性肝炎和病毒性丙型肝炎等。其分布如表2。134例ACA陽(yáng)性的患者中有83例的臨床診斷為肝硬化或肝硬化基礎(chǔ)上的進(jìn)一步病變，86例ACA大于等于1：320的患者中，有61例患者有肝硬化的表現(xiàn)，合并滴度為1∶320和1∶1000的患者為ACA高滴度組，采用Pearson Chi－square檢驗(yàn)，P＝0.004＜0.05，兩組的差異有顯著性意義，即ACA高滴度組患者肝硬化的發(fā)生率明顯高于低滴度組。

表2 ACA陽(yáng)性患者的臨床診斷情況

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢查 134例患者按照抗著絲點(diǎn)抗體滴度分為2組：低滴度組（滴度1∶100）組和高滴度組（滴度大于等于1∶320）。兩組的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果分別如表3。

3 討論

抗著絲點(diǎn)抗體是系統(tǒng)性硬化癥局限性（CREST綜合征）的診斷特異性抗體［2］。著絲點(diǎn)是細(xì)胞分裂期的重要結(jié)構(gòu)之一，在細(xì)胞分裂前，兩條染色體單體通過(guò)著絲點(diǎn)相連在一起，在細(xì)胞分裂過(guò)程中，紡錘體纖維附著在著絲點(diǎn)包含的著絲粒上，將染色單體向他們相應(yīng)的中心粒方向牽拉，平均分配到兩個(gè)子細(xì)胞中?？怪z點(diǎn)抗體是針對(duì)著絲點(diǎn)結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白而產(chǎn)生的自身抗體，它可分為三種不同的蛋白質(zhì)：著絲點(diǎn)蛋白A（分子量17KD）、著絲點(diǎn)蛋白B（分子量80KD）和著絲點(diǎn)蛋白C（分子量140 KD）［3］，其中主要抗原為著絲點(diǎn)蛋白B，它能與含有各種著絲點(diǎn)抗體的血清起反應(yīng)。采用蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡法）檢測(cè)染色質(zhì)提取物，發(fā)現(xiàn)其主要靶抗原為CENP－A、CENP－B、CENP－C。關(guān)于 ACA的致病機(jī)制目前并不清楚。然而，當(dāng)ACA直接注入真核細(xì)胞時(shí)，對(duì)細(xì)胞分裂有明顯影響，從而提示CENP抗原在細(xì)胞周期中的重要作用。遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)［1］ACA陽(yáng)性患者DQBl第一區(qū)域26位上疏水性亮氨酸殘基被谷氨酸或酪氨酸殘基替代，提示HLADQBl 26位上非亮氨酸殘基是產(chǎn)生ACA的必要條件。

表3 低滴度組和高滴度組生化指標(biāo)比較

近年來(lái)，隨著對(duì)ACA研究的深入進(jìn)行，發(fā)現(xiàn)也出現(xiàn)在PBC、SS、RA等其他的疾病中。王雪松等［4］報(bào)道，ACA陽(yáng)性率在原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）約為12.14%。閆惠平等研究表明［5］，大約50%PBC患者有ANA，以著絲點(diǎn)型、核膜型和核點(diǎn)型多見(jiàn)。本研究中，ACA在肝病患者中的檢出率約為1.34%。女性為主，占76.8%，高滴度的ACA中女性占到89.5%。ACA陽(yáng)性患者多伴有其他自身抗體，以AMA、anti－SMA多見(jiàn)。ACA陽(yáng)性不僅見(jiàn)于PBC，也可見(jiàn)于病毒性肝炎、酒精性肝肝硬化、藥物性肝炎等各種肝病中。但是高滴度的ACA多見(jiàn)于各種原因引起的肝硬化患者。

李玲等［6］報(bào)道，在SS患者，ACA陽(yáng)性組肝損害頻率高于ACA陰性組，差異有顯著性，說(shuō)明ACA與SS合并肝臟損害相關(guān)。我們的研究結(jié)果顯示，在肝病患者中，雖然ALT、AST在ACA高滴度組和ACA低滴度組沒(méi)有明顯的差別，但是ACA高滴度組AST／ALT比值的差別明顯高于ACA低滴度組，而ALB和PA明顯低于低滴度組，說(shuō)明ACA高滴度組肝實(shí)質(zhì)的損傷更為嚴(yán)重。進(jìn)一步分析表明，ACA陽(yáng)性組肝硬化的發(fā)生率較高，提示ACA與肝臟硬化有明顯的相關(guān)性，這一現(xiàn)象還未見(jiàn)報(bào)道。

總之，ACA在肝病患者中并不少見(jiàn)，ACA與肝硬化密切相關(guān)，提示臨床上患者出現(xiàn)ACA，尤其是高滴度的ACA時(shí)，應(yīng)該考慮肝硬化的發(fā)生，予以高度重視。

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［4］王雪松，李永哲.原發(fā)性膽汁性肝硬化自身抗體譜研究進(jìn)展［J］.世界華人消化雜志，2006，14：245.

［5］閆惠平，莊 輝，劉燕敏，等.原發(fā)性膽汁性肝硬化患者的免疫學(xué)特點(diǎn)分析［J］.中華肝臟病雜志，2005，13：12.

［6］李 玲，張 烜，李永哲，等.抗著絲點(diǎn)抗體在干燥綜合癥中的臨床意義［J］.中華內(nèi)科雜志，2004，43：778.