快速融化離心法與虹吸法制備冷沉淀的質(zhì)量評價

蔣燕，陳寶葵，林敏詩

(佛山市順德區(qū)中心血站，廣東佛山528300)

冷沉淀是新鮮冰凍血漿在1～5℃條件下不溶解的白色沉淀物，主要含有第Ⅷ因子、纖維蛋白原、血管性血友病因子等有效成分。冷沉淀制劑中的第Ⅷ因子、纖維蛋白原含量是直接影響治療效果的重要因素，且與制備過程密切相關(guān)。筆者對虹吸法和快速融化離心法制備冷沉淀的質(zhì)量與制備效率進行了比較，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 數(shù)字控制水浴式血漿融化箱(CT-4T.6C型)，大容量冷凍離心機(日立 CR-7)，熱合機(日本泰爾茂)，電子天平(G＆G)，四通道半自動血凝儀(歐家隆Coag-A-Mate.XM)。

1.1.2 耗材與試劑 乏Ⅷ因子血漿，活化劑，氯化鈣溶液，緩沖液，標(biāo)準(zhǔn)人血漿，上述整套試劑均為德國Dade Behring Marburg公司提供。400 ml五聯(lián)采血袋(四川南格爾)。

1.1.3 原料血漿 全血采集后6 h內(nèi)經(jīng)2次離心，分離出新鮮液體血漿，放入－50℃速凍機速凍后，置入－30℃以下的低溫冰箱保存［1］。

1.2 方法

1.2.1 取樣 取原料血漿420袋，分為2組，每組有200 ml原料血漿90袋，100 ml原料血漿120袋，4名成分制備人員連續(xù)2日分別采用虹吸法與快速融化離心法制備冷沉淀。每組實驗均按照30袋200 ml原料血漿、40袋100 ml原料血漿分批浸沒于水浴箱進行融化。

1.2.2 虹吸法制備冷沉淀 將原料血漿浸沒于2～6℃血漿融化箱中融化，另一空轉(zhuǎn)移袋懸掛于水浴箱外。新鮮冰凍血漿融化時，上清血漿隨時被虹吸入轉(zhuǎn)移袋內(nèi)，冷沉淀留在原袋中。待融化至僅有15～30 ml冷沉淀和血漿時，將冷沉淀袋和冷上清袋之間的導(dǎo)管熱合分離［2］。

1.2.3 快速融化離心法制備冷沉淀 將原料血漿浸沒于2～6℃血漿融化箱中完全融化時，批量取出所有血漿于0℃ 2 000×g離心10 min。離心后用分離夾分離袋底沉淀的冷沉淀與血漿，熱合分離冷沉淀袋和冷上清袋之間的導(dǎo)管［2］。

1.2.4 Ⅷ 因子和纖維蛋白原的檢測 每組隨機抽取100 ml原料新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀30袋，嚴格按照血凝儀和試劑操作說明書進行檢測。

1.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［3］

100 ml新鮮冰凍血漿制備冷沉淀:(25±5)ml/袋，Ⅷ因子含量≥40 IU，纖維蛋白原含量≥75 mg，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)者為合格。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，兩總體方差齊同的成組t檢驗和χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法制備冷沉淀的Ⅷ 因子和纖維蛋白原含量比較

快速融化離心法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量為(70.9±8.3)IU，合格率為 100%，高于虹吸法制備冷沉淀的Ⅷ因子含量(45.9±7.6)IU與合格率90%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;兩種方法制備的纖維蛋白原含量及合格率差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 兩種方法制備冷沉淀的Ⅷ因子和纖維蛋白原的含量與合格率比較 n=30

2.2 兩種制備方法工作效率比較

見表2。4名成分制備人員采用快速融化離心法制備300 U冷沉淀較虹吸法快1個小時。即按照一天6.5小時工作時間計算，4名人員采用快速融化離心法可以比虹吸法多制備40 U冷沉淀。

表2 兩種方法制備冷沉淀的工作效率比較

3 討論

本次實驗結(jié)果顯示，快速融化離心法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量均較虹吸法高，前者制備的冷沉淀合格率亦較后者高。與文獻報道結(jié)果一致［4，5］。分析原因:虹吸法在原料新鮮冰凍血漿融化過程中，部分冷沉淀不能形成大的凝聚團塊或絮狀，無法聚集吸附在中央未融化的冰碴上或袋壁上，有部分散在的細小冷沉淀由于虹吸作用直接流到另一冷上清轉(zhuǎn)移空袋中，因此冷沉淀袋內(nèi)的冷沉淀減少，降低了Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量。同時，由于虹吸法制備冷沉淀時，原料血漿融化的速度不一致，部分血漿融化為少量冰碴的時間較為集中，工作人員來不及取出部分冷沉淀袋，致使袋內(nèi)的少量冰碴繼續(xù)融化，甚至完全融化，冷沉淀直接流入冷上清的轉(zhuǎn)移袋內(nèi)，導(dǎo)致冷沉淀量減少，Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量降低，致使冷沉淀合格率降低。而快速融化離心法制備冷沉淀時，原料血漿為全部融化后批量0℃強離心，使冷沉淀凝聚黏附于袋底或袋壁，冷沉淀流失量少，回收率高，因此Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量較高，冷沉淀合格率亦較高。

冷沉淀制備的工作效率直接影響臨床的供應(yīng)量。本次實驗顯示，快速融化離心法的制備效率高于虹吸法。分析原因:融化原料血漿過程中，虹吸法融化剩余適量冰碴的速度不一致，融化過程需要工作人員密切觀察袋內(nèi)的冰碴量以確保血液質(zhì)量;此種制備方法為非批量操作，降低了制備效率。而快速融化離心法需要完全融化原料血漿，工作人員可充分利用融化等待時間，完成上一批冷沉淀的離心分離熱合與貼簽速凍工作;整個制備過程均為批量操作，提高了制備效率。應(yīng)用快速融化離心法，科室可以根據(jù)工作人員數(shù)量優(yōu)化工作流程，進一步提高制備效率。實際工作中我們發(fā)現(xiàn)，200 ml原料血漿與100 ml原料血漿交替融化制備可充分利用原料血漿融化等待的時間，冷沉淀制備效率較高。

Ⅷ因子是不穩(wěn)定因子，隨著時間的延長或制備期間溫度的升高，Ⅷ因子活性會降低［6］。因此，制備過程應(yīng)盡快分離速凍新鮮冰凍原料血漿;原料血漿融化過程應(yīng)嚴格控制恒溫冰水浴;冷沉淀分離貼簽速凍時間應(yīng)盡量縮短，嚴格控制整個冷鏈過程，確保冷沉淀的質(zhì)量。

綜上所述，快速融化離心法制備冷沉淀具有優(yōu)質(zhì)高效的特點，值得推廣使用。

［1］王培華.輸血技術(shù)學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:33－34.

［2］高峰.臨床輸血與檢驗［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:140.

［3］GB18469—2001，全血及成分血質(zhì)量要求［S］.

［4］史艾娟，譚明科.虹吸法與離心法制備冷沉淀的質(zhì)量對比［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17(13):149 －150.

［5］楊玉峰，黃春萍，趙云，等.兩種制備冷沉淀方法的比較［J］.實用醫(yī)技雜志，2007，14(8):1007 －1008.

［6］苗翠英，李蓬，孫波，等.新鮮冰凍血漿中FⅧ:C檢測結(jié)果分析［J］.中國輸血雜志，2002，15(1):34.