馬齒莧化學(xué)成分的分離與鑒定Δ

高紅梅，趙阿娜，于秀華（.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春307；.長春市中心醫(yī)院，長春3005）

馬齒莧化學(xué)成分的分離與鑒定Δ

高紅梅1＊，趙阿娜2，于秀華1（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春130117；2.長春市中心醫(yī)院，長春130051）

目的：對馬齒莧的化學(xué)成分進(jìn)行分離與鑒定。方法：采用大孔吸附樹脂柱、硅膠柱及制備高效液相色譜等色譜方法分離化合物，并通過核磁共振波譜和電噴霧質(zhì)譜、無畸變極化轉(zhuǎn)移增強譜、1H-1H-COSY譜、異核多量子關(guān)系譜、多鍵碳?xì)潢P(guān)系譜等譜學(xué)技術(shù)確定分離出的化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從馬齒莧提取物中分離得到5個化合物，分別為丁香苷（1）、十三烷酸（2）、9，12-十八碳二烯酸（3）、11，14，17－二十碳三烯酸（4）、二十六烷酸（5），均為首次從該植物中分離得到。結(jié)論：本試驗結(jié)果可為馬齒莧的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

馬齒莧；化學(xué)成分；分離；結(jié)構(gòu)鑒定

馬齒莧為馬齒莧科馬齒莧屬植物馬齒莧Portulaca oleracea L.的干燥地上部分[1]，又名馬舌菜、馬齒草、馬莧、五行草等，臨床多用煎湯內(nèi)服或并用鮮品搗汁外敷，用于治療熱毒血痢、癰腫疔瘡、濕疹、丹毒、蛇蟲咬傷、便血、痔血、崩漏下血等病癥。馬齒莧始載于《蜀本草》，稱“主尸腳（人腳無論冬夏常拆裂）、陰腫”；《本草拾遺》稱其“止消渴”；《本草綱目》稱其“散血消腫，利腸滑胎，解毒通淋，治產(chǎn)后虛汗”，是臨床常用的中藥之一[2，3]。喬竹穩(wěn)等[4]從馬齒莧中分離得到甾醇及其苷類化合物；劉冊家等[5]從馬齒莧中分離得到氨基酸及腺嘌呤等化合物；另有文獻(xiàn)報道馬齒莧中具有黃酮類[6]、萜類[7]、香豆素類[8]化合物?，F(xiàn)代藥理實驗表明，馬齒莧具有抗真菌、抗病毒、降低高血脂癥家兔全血黏度及血漿黏度、抗氧化、延緩衰老等作用[9]；李湘力等[10]用馬齒莧治療蜂毒過敏；此外，朱華斌[11]用馬齒莧洗液治療藥物過敏性濕疹取得很好效果。本試驗中，筆者對馬齒莧的化學(xué)成分進(jìn)行了分離與鑒定，以為馬齒莧的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

XT5顯微熔點測定儀（北京科儀電光儀器廠）；500M超導(dǎo)核磁共振波譜（NMR）儀（瑞士Bruker Biospin公司）；高效液相色譜（HPLC）儀、19091J-433毛細(xì)管氣相色譜（GC）儀（美國Agilent公司）；IonSpec HiRes電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）儀（美國Finnigan公司）；CHNS-O元素分析儀（意大利Thermoquest Italia S.p.A.公司）；ELSD 2000檢測器（美國Alltech公司）。

馬齒莧藥材于2009年8月正值種子成熟時期采收于吉林省吉林市左家鎮(zhèn)田間，洗凈泥土，用沸水略燙后晾干，經(jīng)長春中醫(yī)學(xué)院鑒定教研室劉琦教授鑒定為馬齒莧科植物馬齒莧P.oleracea L.的干燥地上部分。AB-8型大孔吸附樹脂（南開大學(xué)化工廠）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 樣品提取與分離

取馬齒莧干燥地上部分，粉碎后以正己烷為溶劑加熱回流提取3次（2、2、1h），合并提取液，減壓濃縮，得正己烷提取物。藥渣揮散正己烷，加水煎煮提取2次（2、1h），濾過，合并提取液，濃縮為每1mL水含0.5g生藥的溶液，緩慢加入乙醇，并調(diào)節(jié)醇濃度為70%，靜置24h，抽濾，減壓回收乙醇，水浴揮散殘留乙醇至無醇味并濃縮，通過經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹脂柱，依次用水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇洗脫，分別收集洗脫液，減壓濃縮，得各部位浸膏。

將10%乙醇洗脫物經(jīng)硅膠柱色譜、三氯甲烷-甲醇（4∶1，V/V）洗脫，切割硅膠色譜柱，每段約2cm，經(jīng)甲醇連續(xù)回流提取，用薄層色譜（TLC）指導(dǎo)合并相同餾分，蒸干得粗提物。再經(jīng)制備型HPLC分離，流動相為甲醇-水（48∶52，V/V），得化合物1。

將正己烷提取物經(jīng)硅膠柱色譜、石油醚（60～90℃）洗脫，得樣品A。樣品A用石油醚純化后，加入甲醇及鹽酸進(jìn)行甲酯化，得供試品溶液，再經(jīng)GC-MS聯(lián)用技術(shù)分離鑒定，得化合物2～5。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1的鑒定

白色針狀結(jié)晶（甲醇），mp 190～192℃，易溶于甲醇、乙醇，難溶于三氯甲烷、乙醚、石油醚；紫外吸收光譜在220nm及265nm波長處有最大吸收峰；Molish反應(yīng)呈陽性，溴水加成反應(yīng)使溴水褪色，5%三氯化鐵反應(yīng)呈陰性；ESI-高分辨率質(zhì)譜（HRMS）（m/z）：395.1302[M+Na]+，767.2688[2M+Na]+；1H-NMR（300MHz，DMSO）δ：6.71（2H，s，C13-H，C5-H），6.45（1H，d，C7-H），4.89（1H，d，C1′-H），4.27（1H，t，C9-OH），4.09（2H，t，C9-H），3.75（6H，s，C10-H，C11-H）；13C-NMR（300MHz，DMSO）δ：153.6（C2，C6），134.7（C1），133.5（C4），131.0（C8），129.3（C7），105.3（C3，C5），103.4（C1′），78.0（C3′），77.4（C5′），75.2（C2′），70.8（C4′），62.3（C9），61.2（C6′），57.2（OCH3）。

1H+D2O-NMR譜顯示，δ4.27ppm（1H）處質(zhì)子信號消失，δ 4.89ppm處光譜峰不消失，且呈現(xiàn)雙峰，偶合常數(shù)為4.5Hz。1H-1HCOSY譜顯示，δ6.45與δ6.32、δ4.09相關(guān)；δ4.2與δ4.89、δ 3.6相關(guān)。無畸變極化轉(zhuǎn)移增強譜（DEPT譜）顯示，CH3：δ57.2（OCH3）；CH2：δ62.3（C9），δ61.2（C6′）；CH：δ131.0（C8），δ129.3（C7），δ105.3（C3，C5），δ78.0（C3′），δ77.4（C5′），δ75.0（C2′），δ70.8（C4′）。

綜合上述信息并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[5～7]，鑒定化合物1為丁香苷（Syringin）。該化合物為首次從該植物中分離得到?；衔?的結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 化合物1的結(jié)構(gòu)式Fig 1Structural formula of compound 1

3.2 化合物2、3、4、5的鑒定

采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)。色譜柱：HP-5毛細(xì)管色譜柱（30.0m×250.00μm×0.25μm）；載氣：氮氣；流量：2mL·min－1；分流比：10∶1；質(zhì)量掃描范圍（m/z）：100～500amu；氣化室溫度：250℃；程序升溫：初始溫度為60℃，保持2min，以5℃·min－1升至280℃；電離方式：電轟擊電離（EI）；離子源溫度：220℃；電子能量：70eV；連接桿溫度：200℃?；衔?、3、4、5的鑒定結(jié)果見表1。

表1 化合物2、3、4、5的鑒定結(jié)果Tab 1Identification of compound 2，3，4，5

4 討論

筆者對馬齒莧進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中得到5個化合物——丁香苷、十三烷酸、9，12-十八碳二烯酸、11，14，17-二十碳三烯酸、二十六烷酸，均為首次從該植物中分離發(fā)現(xiàn)。

結(jié)合文獻(xiàn)，筆者在對馬齒莧化學(xué)成分研究過程中選擇了水煎煮提取法，避免葉綠素類成分的混雜，并用大孔吸附樹脂有效地去除了鉀、鈉等無機鹽類成分的干擾，為馬齒莧化學(xué)成分的分離純化創(chuàng)造了良好條件。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：46-47.

[2] 宋立人.現(xiàn)代中藥學(xué)大詞典[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：263.

[3] 張 文，張金蓮.馬齒莧中的微量元素分析[J].微量元素與健康研究，2004，21（3）：19.

[4] 喬竹穩(wěn)，姚旭穎，單喜臣，等.馬齒莧化學(xué)成分研究[J].齊齊哈爾大學(xué)學(xué)報，2012，28（1）：58.

[5] 劉冊家，劉細(xì)雨，向 蘭，等.馬齒莧化學(xué)成分研究[J].中藥材，2009，32（11）：1689.

[6] 楊子娟，鄭毅男，向 蘭，等.馬齒莧的化學(xué)成分研究[J].中藥材，2007，30（10）：64.

[7] SEO Y，SHIN J，LEE BJ，et al.Two biophenolic gly-cosides from Portulaca oleracea[J].Kor Chem Soc，2003，47（1）：43.

[8] 向 蘭，郭東曉，鞠 瑞，等.馬齒莧的化學(xué)成分研究[A].第六屆全國藥用植物與植物藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C].北京：中國植物學(xué)會，2006：204.

[9] 杜士明，蔡 華，梁 俊，等.馬齒莧藥理研究進(jìn)展及開發(fā)思路[J].中國藥房，2007，18（27）：2145.

[10] 李湘力，黃鳴清，李萬瑤.馬齒莧治療蜂毒過敏反應(yīng)的實驗研究[J].海峽藥學(xué)，2007，19（6）：39.

[11] 朱華斌.馬齒莧洗液治療藥物過敏性濕疹效果好[J].中華護(hù)理雜志，2007，2（4）：83.

Isolation and Identification of Chemical Constituents from Portulaca oleracea

GAO Hong-mei，YU Xiu-hua（Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China）
ZHAO A-na（Changchun Central Hospital，Changchun 130051，China）

OBJECTIVE：To isolate and identify the chemical component of chemical constituents from Portulaca oleracea.METHODS：The chemical constituents were isolated by macroporous resin column，silica gel column and HPLC，and their structures were elucidated by NMR，ESI-MS，DEPT，1H-1H-COSY，HMQC and HMBC.RESULTS：5compounds were isolated from the extracts of P.oleracea，such as syringin（1），tridecanoic acid（2），9，12-octadecadienoic acid（3），11，14，17-eicosatrienoic acid（4），hexacosanoic acid（5）.They were isolated from P.oleracea for the first time.CONCLUSION：The study can provide reference for further development and application of P.oleracea.

Portulaca oleracea；Chemical component；Isolation；Structural identification

R284.1；R917

A

1001-0408（2012）47-4480-02

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2012.47.24

Δ吉林省科技發(fā)展計劃項目（吉科合字第990558-6號）

＊講師，博士研究生。研究方向：中藥有效成分及新藥研發(fā)。電話：0431-86172211。E-mail：690278770@qq.com

2012-04-11

2012-06-12）