腦心通膠囊對急性腦梗死患者血清VEGF、MDA水平影響的研究1）

何建明，李玉蓉，韋英秀，胡宏波

血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是由兩個亞基間通過二硫鍵連接形成的同源二聚體糖蛋白，其具有促進血管生成、增加血管滲透性、保護神經(jīng)細胞、促進內(nèi)皮細胞增殖等四大生物學特性，在血管發(fā)生和形成過程中起著重要的調(diào)控作用。有研究表明，VEGF在急性腦卒中早期直接參與腦水腫形成的作用［1］。丙二醛（MDA）是反映氧自由基水平的主要觀察指標，其含量水平與腦梗死患者腦損傷的程度密切相關［2］。目前關于急性腦梗死患者血清VEGF與自由基之間關系的研究尚不多見，故本研究通過對急性腦梗死患者血清VEGF和MDA水平的動態(tài)觀察，探討它們在缺血性腦血管病中的作用及腦心通膠囊干預治療對其的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2009年11月—2010年4月來我院神經(jīng)內(nèi)科住院的急性腦梗死患者60例，發(fā)病時間不超過24h。診斷符合全國第四屆腦血管病學術會議制訂的《各類腦血管病診斷標準》，并經(jīng)頭顱CT或MRI證實。所有病例均排除嚴重感染，腫瘤，慢性心、肝、腎功能不全及昏迷者。男40例，女20例，年齡51歲～80歲（63.5歲±4.17歲）。按照2000年全國腦血管病專題研討會腦卒中分型分期，按梗死灶的最大直徑，再分為大面積梗死（＞5cm）18例，中面積梗死（3cm～5cm）23例，小面積梗死（1.6cm～3cm）19例。按中國卒中量表（CCS）評分分為3型：輕型20例、中型23例和重型17例。60例急性腦梗死患者為腦梗死組，隨機分為治療組和對照組，各30例。兩組患者梗死的部位、面積及神經(jīng)功能評分等差異無統(tǒng)計意義（P＞0.05）。另設健康組60名，男35名，女25名，年齡53歲～77歲（64.6±4.24歲）。健康組與腦梗死組年齡、性別分布經(jīng)齊同性檢驗后無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 治療方法 對照組給予抗凝、抗栓及營養(yǎng)神經(jīng)等治療，并配合對癥處理。治療組在此基礎上給予腦心通膠囊（咸陽步長制藥有限公司生產(chǎn)），療程均為14d。

1.3 標本采集及處理 腦梗死患者分別在發(fā)病或入組后的1 d、3d、7d、14d各采血1次，均采晨間空腹肘靜脈血，靜置30 min，3 000r／min離心10min，收集血清，-20℃保存。采用雙抗體夾心ELISA法測定VEGF（試劑盒購自深圳晶美生物制品有限公司），血清MDA水平測定采用硫代巴比妥酸比色法測定（試劑盒購自南京聚力生物醫(yī)學工程研究所）。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0軟件分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗；同組變量間的關系常用Spearman相關分析，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。

表1 腦梗死組與健康組VEGF水平比較（x±s） pg／mL

2 結(jié) 果

2.1 腦梗死組與健康組VEGF水平比較 腦梗死組4個時間點VEGF水平明顯高于健康組（P＜0.01），相應時期內(nèi)腦梗死組外周血VEGF水平均明顯較健康組升高。腦梗死組患者VEGF水平有一波動過程，第1天最低，從第3天至第7天為上升階段，以第7天最高、第14天又有所回降，但仍較健康組高。詳見表1。

2.2 腦梗死組與健康組MDA水平比較 腦梗死組發(fā)病1d、3 d，MDA水平明顯高于對照組（P＜0.01），但在7d及14d，兩組MDA水平無統(tǒng)計學意義。腦梗死組患者MDA水平于發(fā)病前3d明顯升高，以后逐漸恢復正常。詳見表2。

表2 梗死組與健康組MDA水平比較（x±s） U／mL

2.3 梗死灶大小與VEGF、MDA水平之間的關系 發(fā)病3d、14d，患者血清VEGF水平隨著梗死面積增大而升高，檢測結(jié)果大面積梗死組與中面積梗死組明顯高于小面積梗死組，兩者與小面積梗死組比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0．05或P＜0.01）。發(fā)病第3天，患者血清MDA水平隨著梗死面積增大而升高，大面積梗死組與中面積梗死組明顯高于小面積梗死組（P＜0.01）；至病程14d時，3組間MDA檢測指標無明顯差異（P＞0.05）。詳見表3。

表3 腦梗死患者梗死灶大小與VEGF、MDA水平之間的關系（x±s）

2.4 病情嚴重程度與VEGF、MDA水平之間的關系 發(fā)病3 d、14d，腦梗死患者血清VEGF水平隨著病情嚴重程度而呈升高趨勢，檢測結(jié)果重型組與中型組明顯高于輕型組（P＜0．05或P＜0.01）。發(fā)病第3天，患者病情越重，血清MDA水平越高，重型組和中型組與輕組比較有統(tǒng)計學意義；至病程第14天時，MDA檢測結(jié)果在病情輕、中、重組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。詳見表4。

表4 腦梗死患者病情嚴重程度與VEGF、MDA水平之間的關系（x±s）

2.5 治療組與對照組VEGF、MDA水平比較 治療組經(jīng)腦心通膠囊干預治療后患者血清VEGF一直保持在一個相對較高的水平，其中第3、7、14天明顯高于對照組（P＜0.01）；兩組MDA水平在各時間點比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。詳見表5。

表5 治療組與對照組治療后VEGF、MDA水平比較（x±s）

3 討 論

VEGF又稱血管通透因子，是由兩個亞基間通過二硫鍵連接形成的同源二聚體糖蛋白，其主要生物學作用就是誘導內(nèi)皮細胞的增殖，促進血管形成，促進側(cè)支循環(huán)建立，改善腦缺血缺氧［3］。在正常情況下，腦內(nèi)無VEGF表達，而當腦缺血發(fā)生后，低氧作為一種信號直接激活VEGF／VEGF受體（VEGFR）系統(tǒng)，誘導VEGF的表達增高，作用于血管內(nèi)皮細胞的特異受體，誘導內(nèi)皮細胞增殖，促進血管形成［4，5］。在腦梗死發(fā)生早期，VECF在維持和恢復內(nèi)皮細胞的完整性中起到重要作用，而后期VEGF是高度特異的血管內(nèi)皮細胞有絲分裂劑，通過刺激缺氧組織建立有效的側(cè)支循環(huán)或恢復內(nèi)皮的完整性，可促使血管內(nèi)皮再生，抑制血管內(nèi)膜增厚，防止再狹窄，減輕缺血再灌注損傷。本研究發(fā)現(xiàn)，腦梗死組血清VEGF水平明顯高于健康組，而且腦梗死急性期的兩周內(nèi)VEGF變化隨著病程呈動態(tài)變化過程?；颊哐錠EGF濃度呈高表達，從第1天至第7天為上升趨勢，以第7天為最高，第14天開始回降，這表明VEGF對缺氧因素的反應，存在負反饋機制。在缺血性卒中急性期，腦血流減少，迅速上調(diào)VEGF表達，促進缺血半暗帶腦血管新生，隨側(cè)支循環(huán)的建立，腦血供得到改善，VEGF的產(chǎn)生逐漸減少。

自由基在腦缺血缺氧損傷過程中起著關鍵性的作用，MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應的代謝產(chǎn)物，其含量的變化間接地反映了組織中氧化自由基含量的變化，通過測定MDA含量可以估計腦組織中氧自由基水平和脂質(zhì)過氧化反應的強弱，對研究腦組織缺血再灌注損傷有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)，腦梗死患者發(fā)病24h內(nèi)及第3天，MDA水平明顯異常，但在第7天及第14天已逐漸恢復正常。

VEGF和自由基MDA在缺血性腦卒中急性期都有參與腦水腫作用［2，6］。VEGF是通過增加血管的通透性，直接破壞了血腦屏障的完整性，形成腦水腫的，而MDA主要通過攻擊腦內(nèi)細胞膜磷脂中多聚不飽和脂肪酸和脂肪酸不飽和雙鍵，直接造成細胞損傷發(fā)生腦水腫［6，7］。本研究結(jié)果表明，腦梗死患者發(fā)病急性期（第3天）及恢復期的第2周，患者血清VEGF水平與梗死面積及病情嚴重程度具有一定相關性，即隨著梗死面積越大、病情越重，VEGF水平越高；而 MDA水平只有在發(fā)病第3天才與梗死面積及病情嚴重程度具有一定相關性。VEGF、MDA都共同參與了腦梗死急性期血管病理損傷過程，但是它們的損傷機制有所不同。VEGF水平與患者預后密切相關［8］。

本研究結(jié)果還顯示，腦梗死患者急性期經(jīng)腦心通膠囊干預治療后，血清VEGF能保持在一個相對較高的水平，3d～14d各時間段VEGF水平均高于對照組，而兩組MDA濃度無變換。另外，治療組的神經(jīng)功能評分較對照組明顯改善（P＜0.05），腦心通膠囊能促進VEGF的產(chǎn)生和分泌，腦梗死患者臨床癥狀的改善與血清VEGF濃度高低有關。

VEGF、MDA在急性腦梗死患者血清中變化有一定規(guī)律，都在腦梗死的發(fā)展過程中起重要作用，因此動態(tài)檢測VEGF及MDA水平對臨床判斷疾病嚴重程度及預后具有指導意義。VEGF較MDA更適作為評估急性腦卒中患者病情輕重和預后的客觀指標。

［1］ Zhang ZG，Zhang L，Jiang Q，et al.VEGF enhances angiogenesis and promotes blood-brain barrier leakage in the ischemic brain［J］.J Cerebral Blood Flow Metab，2000，106（7）：829-838.

［2］ Heo JH，Han SW，Lee SK.Free radicals as triggers of brain edema formation after stroke［J］.Free Radic Biol Med，2005，39（1）：51-70.

［3］ Stowe AM，Plautz EJ，Eisner-Janowicz I，et al.VEGF protein associates to neurons in remote regions following cortical infarct［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2007，27（1）：76-85.

［4］ Shin YJ，Choi JS，Lee JY，et al.Differential regulation of vascular endothelial growth factor-C and its receptor in the rat hippocampus following transient forebrain ischemia［J］.Acta Neuropathol，2008，116（5）：517-527.

［5］ Sun Y，Jin K，Xie L，et al.VEGF-induced neuroprotection，neurogenesis，and angiogenesis after focal cerebral ischemia［J］.J Clin Invest，2003，111（12）：1843-1851.

［6］ Valable，Samuel.VEGF-induced BBB permeability is associated with an MMP-9activity increase in cerebral ischemia：Both effects decreased by Ang-1［J］.J Cereb Blood Flow Metab，2005，25（11）：1491.

［7］ Shimon A，Tstsushi K.Expression of anti-apoptotic and neuroprotective effects of edaravone following transient focal ischemia in rats［J］.Eur J Pharmacol，2005，516（2）：125-130.

［8］ 潘秋榮.急性腦梗塞治療前后血清VEGF、TGF-β1水平的變化及其臨床意義［J］.放射免疫學雜志，2007，20（6）：595-596.