替米沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠左心室重構(gòu)的影響

劉 佳 李修英 張 婧 冷吉燕 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院干部病房，吉林 長春 130021)

替米沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠左心室重構(gòu)的影響

劉 佳 李修英 張 婧 冷吉燕 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院干部病房，吉林 長春 130021)

目的 研究替米沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)左心室重構(gòu)的影響。方法 16只12周齡雄性SHR，隨機(jī)分為替米沙坦組和SHR空白對照組，每組8只;另設(shè)同齡Wistar大鼠(WKY)8只為正常對照組。治療組給予替米沙坦10 mg·kg－1·d－1灌胃給藥，飼養(yǎng)8 w后處死動物，測量左心室重量及心肌厚度，計算左心室重量與體重比(LVW/BW);通過Van Gieson染色法觀察左心室心肌膠原纖維變化，對左心室心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和血管周圍膠原面積(PVCA)進(jìn)行分析;電鏡和HE染色觀察左室心肌超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果 與正常對照組WKY大鼠相比，SHR空白對照組的尾動脈收縮壓(SBP)、LVW/BW、左室壁厚度、CVF、PVCA均顯著增高(P＜0.01);與SHR空白對照組相比，替米沙坦組能有效降低SHR的SBP，改善左心室肥厚(P＜0.01)，減少心肌間質(zhì)及心肌小動脈周圍的膠原(P＜0.01)，組織病理及電鏡顯示，替米沙坦治療能顯著改善SHR左心室重構(gòu)。結(jié)論 替米沙坦能有效降低SHR血壓，改善左心室重構(gòu)。

替米沙坦;高血壓;心室重構(gòu)

高血壓的主要危害在于其對重要靶器官如心、腦、腎、視網(wǎng)膜等結(jié)構(gòu)和功能的影響。其中，左心室肥厚是心臟在長期超負(fù)荷下，通過增加室壁厚度來維持室壁應(yīng)力的一種適應(yīng)性反應(yīng)，是高血壓最常見的并發(fā)癥之一〔1〕。高血壓性心室重構(gòu)主要表現(xiàn)為左室肥大和心肌纖維化。心室重構(gòu)使心肌硬度增加、順應(yīng)性下降，導(dǎo)致心肌收縮和舒張功能障礙，與心力衰竭、心律失常等心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。因此，抑制心肌纖維化、預(yù)防和逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)有極其重要的臨床意義。非肽類長效血管緊張素Ⅱ1型受體拮抗劑(AR1B)替米沙坦，不僅用于心衰治療，而且是高血壓治療的一線藥物，并且是高血壓心肌肥厚的首選藥物〔2〕。本文研究替米沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)收縮壓以及左心室結(jié)構(gòu)的影響，探討替米沙坦逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物

健康12周齡雄性SPF級SHR 16只，體重200～220 g;另設(shè)同齡雄性WKY大鼠為正常對照8只，體重(230±6)g;均由吉林大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 藥品和試劑

替米沙坦由德國勃林格殷格翰公司提供(進(jìn)口商品注冊證號：X20010324，商品名：美卡素)。

1.3 方法和指標(biāo)檢測

1.3.1 實驗分組與給藥 將SHR大鼠隨機(jī)分成2組，分別為替米沙坦組及SHR空白對照組，各8只。所有實驗動物均在清潔、通風(fēng)、溫度20℃ ～22℃、相對濕度40% ～70%環(huán)境下單只分籠喂養(yǎng)。治療組以替米沙坦10 mg·kg－1·d－1配成溶液3 ml灌胃，SHR空白對照組和WKY組給予等量蒸餾水灌胃。所有動物均以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，實驗共進(jìn)行8 w。

1.3.2 血壓的測定 采用大鼠尾動脈血壓計于實驗前及實驗8 w末測量大鼠清醒狀態(tài)下的尾動脈收縮壓(SBP)，重復(fù)3次，取平均值。比較3組大鼠不同時間血壓變化。

1.3.3 左心室重量/體重(LVW/BW)測定 治療8 w后，測量兩組大鼠體重(BW)后處死動物，經(jīng)腹腔注射戊巴比妥40 mg/kg麻醉，迅速開胸，取出心臟，沿主動脈根部剪去大血管，冰生理鹽水充分灌洗，濾紙吸干，沿房室交界處去除心房和大血管，緊貼室間隔右側(cè)剪下右心室游離壁，剩余部分稱重，為左心室重量(LVW)。同時測量左室壁厚度，計算LVW/BW。

1.3.4 心肌組織病理及電鏡觀察 動物處死后，用銳利的刀片切取左心室心尖部心內(nèi)膜下小塊心肌，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切片厚度5 μm，HE染色，光鏡下觀察。同時取心尖部心內(nèi)膜下小塊心肌，3%戊二醛固定;然后經(jīng)1%四氧化鋨固定，乙醇梯度脫水，環(huán)氧樹脂包埋劑包埋，超薄組織切片，JEM-1200EX型透射電子顯微鏡下觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)變化。

1.3.5 心肌膠原組織學(xué)測定及定量分析(Van Gieson法) 石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，1%酸性品紅和0.5%的飽和苦味酸染色。心肌細(xì)胞呈黃色，膠原呈紅色。切片裝在Olympus CX40型顯微鏡下觀察，采用CIAS-1000細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)對結(jié)果進(jìn)行分析。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)灰度校正后，隨機(jī)取5個視野計算膠原容積百分比(CVF，%)=膠原面積/全視野面積×100%，血管周圍膠原面積(PVCA，%)為每一標(biāo)本測量5支呈橫切面壁內(nèi)小動脈的周圍膠原面積與管腔面積的比值，取其均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理。多組間比較用ANOVA方差分析，組間比較用q檢驗。

2 結(jié)果

2.1 收縮壓和左心室肥厚的變化

隨機(jī)分組前SHR血壓明顯高于WKY大鼠(P＜0.01)，SHR組與替米沙坦組之間血壓差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。實驗8 w后，WKY組大鼠血壓基本不變，替米沙坦組血壓明顯低于SHR組(P＜0.01)，但仍高于WKY組大鼠血壓。替米沙坦治療8 w后，其LVW/BW和左室壁厚度與SHR組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，但仍高于WKY組大鼠，說明替米沙坦治療8 w后，能在一定程度上抑制SHR左心室。肥厚的增加。見表1。

2.2 膠原容積分?jǐn)?shù)的變化

心肌纖維化主要表現(xiàn)為心肌膠原成分增多，與WKY組比較，SHR對照組的心肌間質(zhì)和血管周圍膠原顯著增加，可見大量膠原纖維聯(lián)結(jié)成網(wǎng)狀包繞心肌組織，其CVF和PVCA均顯著高于WKY組(P＜0.01);與SHR對照組相比，替米沙坦組心肌間質(zhì)和血管周圍膠原均顯著減少，其CVF和PVCA明顯降低(P＜0.01)。見表2。

表1 兩組大鼠尾動脈壓、LVW/BW、左室壁厚度的比較(± s，n=8)

表1 兩組大鼠尾動脈壓、LVW/BW、左室壁厚度的比較(± s，n=8)

與WKY組比較：1)P＜0.01;與SHR對照組比較：2)P＜0.01;下表同

組別 SBP(mmHg)治療前 治療后LVW/BW(mg/kg)左室壁厚度(mm)109.0±2.8 109.6±2.3 2.71±0.05 2.98±0.05 SHR組 176.2±4.31) 191.8±8.51) 4.39±0.051) 4.50±0.041)替米沙坦組 174.5±3.31)149.8±3.51)2)3.27±0.061)2)3.75±0.031)2)WKY組

表2 兩組膠原容積分?jǐn)?shù)的比較(%± s，n=8)

表2 兩組膠原容積分?jǐn)?shù)的比較(%± s，n=8)

3.44±0.19 1.14±0.05 SHR組 5.80±0.041) 1.99±0.061)替米沙坦組 4.44±0.061)2) 1.39±0.051)2)CVF PVCA WKY組組別

2.3 心肌病理學(xué)檢測

2.3.1 兩組心肌的形態(tài)學(xué)改變(光鏡觀察) WKY組心肌細(xì)胞排列整齊，無增粗，細(xì)胞核大小均一，胞質(zhì)染色均勻;SHR對照組心肌排列稀疏、紊亂，肌纖維明顯增粗;治療組可見心肌纖維稍有增粗，排列較整齊緊密，較SHR組稍有改善。

2.3.2 兩組心肌超微結(jié)構(gòu)的比較 SHR對照組與WKY組相比，心肌纖維排列稀疏、紊亂，線粒體結(jié)構(gòu)腫脹、破壞甚至呈空泡狀，Z線增寬模糊，可見細(xì)胞核染色質(zhì)邊聚;替米沙坦組較SHR組好轉(zhuǎn)，多數(shù)肌纖維排列緊密，線粒體結(jié)構(gòu)完整，排列適當(dāng)，細(xì)胞核無邊聚，核間間隙尚可。

3 討論

本實驗結(jié)果說明替米沙坦能有效降低SHR血壓及逆轉(zhuǎn)左室肥厚;替米沙坦能有效抑制SHR心肌纖維化。這與吳進(jìn)壽等〔3〕研究結(jié)論一致。另外，從組織病理學(xué)HE染色及超微結(jié)構(gòu)也可見，替米沙坦組較SHR組有明顯好轉(zhuǎn)。

心肌肥厚是獨立于血壓的心血管疾病主要危險因素之一。高血壓性心室重構(gòu)主要表現(xiàn)為左室肥大和心肌纖維化，在自發(fā)性高血壓大鼠模型中，此病變存在于大鼠模型的整個高血壓階段，并隨鼠齡的增加而逐漸加重〔4〕。心室重構(gòu)是由一系列復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制導(dǎo)致的心肌結(jié)構(gòu)、功能和表型的變化，循環(huán)和局部的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)激活在心室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展過程中起到了重要作用〔5〕，不僅影響血流動力學(xué)，還參與心室重構(gòu)的形成過程。RAS的這種作用主要通過血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)而實現(xiàn)，AngⅡ主要有兩種受體，即AT1和AT2受體〔6〕。AngⅡ通過與其受體結(jié)合進(jìn)而激活 G蛋白、磷脂酶 C(PLC)及第二信使三磷酸肌醇(IP3)、二酰甘油(DAG)、MAPK系統(tǒng)，調(diào)控胞質(zhì)鈣離子濃度與PKC，激活原癌基因c-fos、c-myc，刺激心肌纖維細(xì)胞有絲分裂，促進(jìn)成纖維細(xì)胞膠原合成〔7〕，抑制膠原分解酶基質(zhì)金屬蛋白酶活性及膠原蛋白合成等機(jī)制誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大和間質(zhì)增生，最終導(dǎo)致心室重構(gòu)。但AngⅡ除了經(jīng)典的ACE途徑外，還可來源于局部的糜蛋白酶等各種途徑，在心臟左心室約有80%的AngⅡ是由糜蛋白酶途徑形成，這種心臟局部RAS在心室重構(gòu)中的作用較循環(huán)RAS更為重要，并且不能被 ACEI阻斷〔8〕。替米沙坦作為新一代長效AR1B，脂溶性較強，易與心臟、血管及腎臟等靶器官AT1受體特異性結(jié)合，能減少AT1受體介導(dǎo)AngⅡ引起的心室重構(gòu)，同時反饋性增加AngⅡ與AT2受體的結(jié)合，抑制心肌細(xì)胞分化、增殖，發(fā)揮保護(hù)心臟和改善心功能的作用。

綜上所述，替米沙坦有效降壓同時還有逆轉(zhuǎn)SHR的左室重構(gòu)的作用，此實驗為該藥的臨床運用提供了實驗依據(jù)。

1 Schillaci G，Verdecchia P，Porcellati C，et al.Continuous relation between left ventricular mass and cardiovascular risk in essential hypertension〔J〕.Hypertension，2000;35：580-6.

2 WHO-ISH.Hypertension Guidelines Committee.1999 World Health Organization-International Society of Hypertension guide-lines for the management of hypertension〔J〕.Hypertension，1999;17(1)：151-85.

3 吳進(jìn)壽.自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)心肌壁內(nèi)小動脈重構(gòu)及替米沙坦的干預(yù)作用〔D〕.福建醫(yī)科大學(xué)，2003.

4 余國龍，梁曉秋，謝秀梅，等.高血壓大鼠心臟肥厚過程中心肌細(xì)胞凋亡心肌纖維化動態(tài)觀察〔J〕.高血壓雜志，2001;9(3)：322-5.

5 余江恒，李法琦，胡詠梅，等.替米沙坦對壓力超負(fù)荷性大鼠心室重構(gòu)及心肌營養(yǎng)素-1表達(dá)的影響〔J〕.中國心血管病研究雜志，2005;11(8)：850-3.

6 余江恒.壓力超負(fù)荷性左室肥厚大鼠AngⅡ、AT1R、Cardiotrophin-1與gp130在心肌組織的變化及替米沙坦的干預(yù)影響〔D〕.重慶醫(yī)科大學(xué)，2004.

7 張雅娟，趙玉蘭，董 靜.替米沙坦對異丙腎上腺素所致心肌肥厚大鼠GATA4表達(dá)的影響〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2011;2(1)：10-2.

8 朱偉旺，趙鳳琴.替米沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠左心室重塑的影響〔J〕. 中國心血管病研究，2007;8(6)：600-2.

R544

〕 A 〔

1005-9202(2012)22-4938-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.22.039

吉林省科學(xué)技術(shù)廳資助項目(No.20090473)

冷吉燕(1965-)，女，博士生導(dǎo)師，教授，主要從事老年高血壓、冠心病的臨床及基礎(chǔ)研究。

劉 佳(1984-)，女，醫(yī)師，主要從事老年高血壓機(jī)制及治療相關(guān)研究。

〔2012-01-29收稿 2012-02-10修回〕

(編輯 曲 莉)