• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    澳洲長鰭鰻4種同工酶的組織特異性研究

    2012-11-17 05:24:08李嫻,朱永安,孟慶磊
    關(guān)鍵詞:鰻鱺同工酶電泳

    澳洲長鰭鰻4種同工酶的組織特異性研究

    運用聚丙烯酰胺垂直梯度凝膠電泳法對澳洲長鰭鰻(Anguillareinhardtii)5種組織(心臟、肝臟、肌肉、眼和腎臟)的4種同工酶[酯酶(EST)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、過氧化物酶(POD)、蘋果酸脫氫酶(MDH)]進(jìn)行了研究,并對其同工酶位點及酶譜進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,澳洲長鰭鰻的4種同工酶具有不同程度的組織特異性。EST檢測到16個位點,多個位點存在等位基因。G6PDH檢測到2個基因位點,其中1個位點存在等位基因。POD有3個位點,Pod-3檢測到2個等位基因。MDH具有s-MDH和m-MDH 2種類型,s-MDH形成2種二聚體;m-MDH形成4種二聚體。這4種同工酶在表型、分布和活性上均表現(xiàn)出明顯的組織特異性,可能與各組織執(zhí)行的生理機能相關(guān)。

    澳洲長鰭鰻(Anguillareinhardtii);同工酶;組織特異性

    中國鰻魚養(yǎng)殖以歐洲鰻鱺和日本鰻鱺為主,總產(chǎn)量居世界第一,約占世界總產(chǎn)量的70%。世界各國養(yǎng)殖的鰻魚苗種只能依靠近海的天然鰻苗資源,目前日本鰻鱺和歐洲鰻鱺苗種捕撈資源嚴(yán)重不足,無法滿足現(xiàn)有養(yǎng)殖規(guī)模[1-3]。澳洲長鰭鰻(Anguillareinhardtis,英文名Australian longfin eel)隸屬鰻鱺科鰻鱺屬,產(chǎn)于澳大利亞東南部、洛德豪島、新喀里多尼亞。因其形體大,俗稱長鰭鰻、龍鰻。該品種生長速度快、性情溫和、易于飼養(yǎng)、味道鮮美,是一種名貴鰻魚,現(xiàn)在國內(nèi)已有少數(shù)單位進(jìn)行養(yǎng)殖和開發(fā),具有良好的養(yǎng)殖開發(fā)前景。如能進(jìn)行推廣,可緩解當(dāng)前日本鰻鱺和歐洲鰻鱺苗種不足的情況。目前對澳洲長鰭鰻的研究很少,本研究采用聚丙烯酰胺垂直梯度凝膠電泳法探討了澳洲長鰭鰻4種同工酶在5種組織中的分布、類型、活性等,以期為澳洲長鰭鰻的種質(zhì)資源鑒定和遺傳結(jié)構(gòu)分析提供有價值的生化指標(biāo)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    試驗用魚取自山東省淡水水產(chǎn)研究所,體長25~45cm,體重376~928g。

    1.2 樣品制備

    取試驗用魚共30尾,剪斷尾動脈和鰓,在流水中放血以減少組織帶血,然后迅速摘取眼睛、心臟、腎臟、肝臟、肌肉等組織,用預(yù)冷的0.8%生理鹽水將各組織沖洗干凈,取適量稱重,放入預(yù)冷的研缽中,用消毒的剪刀剪碎,加入預(yù)冷的0.01mol/L的pH7.4的磷酸緩沖液(組織∶緩沖液=1g∶3ml),冰浴中研磨,研磨成漿后置4℃抽提1~2h,4℃15000r/min離心30min,取上清液,加入等體積的40%的蔗糖溶液,分裝,置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3 電泳及染色

    采用聚丙烯酰胺垂直梯度凝膠電泳法,分離膠濃度(T)為7.0%或7.5%,濃縮膠濃度為4%或3%。電泳緩沖液為Tris-Gly,高離子強度電泳緩沖液(pH8.3)或低離子強度電泳緩沖液(pH8.7)。梯度膠的濃度和緩沖系統(tǒng)見表1,點樣量為20μl,以溴酚藍(lán)作指示劑,電泳在4℃冰箱進(jìn)行。同工酶的染色方法參照文獻(xiàn)[4-7]稍作改進(jìn)。同工酶的命名和分析參照文獻(xiàn)[7-8],以各酶帶的相對遷移率(Rf)從小到大依次命名,即向陽極泳動最快的編為1號,依次順序編為2、3、4、…,同一基因位點的不同等位基因按照從陰極到陽極的順序依次標(biāo)記為a、b、c、…。

    對澳洲長鰭鰻5種組織的4種酶類進(jìn)行多次電泳,篩選出酶譜清晰的結(jié)果進(jìn)行分析。

    表1 用于分析澳洲長鰭鰻同工酶的名稱、編號、緩沖系統(tǒng)和凝膠濃度

    注:TG8.3指Tris-甘氨酸高離子強度電泳緩沖液(pH8.3);TG8.7指Tris-甘氨酸低離子強度電泳緩沖液(pH8.7)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 酯酶(EST)

    L:肝臟(liver);H:心臟(heart);K:腎臟(kidney);M:肌肉(muscle);E:眼睛(eye)

    魚類的酯酶較復(fù)雜,一般認(rèn)為是單體酶或多聚體酶,由多個基因位點編碼[9],多態(tài)現(xiàn)象非常普遍[7]。從澳洲長鰭鰻不同組織的EST電泳圖譜(圖1)可以看出,EST在澳洲長鰭鰻的心臟、肝臟、肌肉、眼和腎臟中都有分布,共有16個位點;肝臟和腎臟EST表達(dá)豐富,肝臟有12條酶帶,腎臟有13條酶帶,心臟和眼中表達(dá)次之,心臟8條酶帶,眼中7條酶帶,肌肉中表達(dá)最弱,有7條酶帶。Est-9和Est-10這2個位點在5種組織中都表達(dá),且都有2個等位基因,Est-6在肝臟中有2種基因型aa、bb,在腎臟中只有1種基因型aa。

    2.2 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)

    G6PDH為二聚體酶[10],由G6pdh-1、G6pdh-2這2個基因座位編碼。澳洲長鰭鰻的G6PDH在肝臟和腎臟中表達(dá),G6pdh-1在肝臟表達(dá)很弱,腎臟表達(dá)較明顯,且表現(xiàn)出2種基因型,G6pdh-2在肝臟表達(dá)量較大,腎臟表達(dá)很弱(圖2),組織差異性顯著。

    L:肝臟(liver);H:心臟(heart);S:脾臟(spleen);K:腎臟(kidney);M:肌肉(muscle);E:眼睛(eye)

    2.3 過氧化物酶(POD)

    POD是一類清除細(xì)胞內(nèi)H2O2的同工酶,具體為幾聚體還未有定論,有學(xué)者認(rèn)為是二聚體酶[9,11]。澳洲長鰭鰻的POD有3個位點,分別為Pod-1、Pod-2、Pod-3,其中Pod-1和Pod-2只在心臟中表達(dá),Pod-3在5個組織中都表達(dá),有2個等位基因(圖3)。

    2.4 蘋果酸脫氫酶(MDH)

    硬骨魚的蘋果酸脫氫酶為二聚體,存在有相互不形成異聚體的上清液型(s-MDH)和線粒體型(m-MDH)2部分,均是由2基因編碼的二聚體[12]。澳洲長鰭鰻的MDH也具有s-MDH和m-MDH 2種類型(圖4),s-MDH形成2種二聚體,s-Mdh1在心臟和腎臟中表達(dá),s-Mdh2在心臟和肌肉中表達(dá);m-MDH形成4種二聚體,m-Mdh1僅在肝臟中表達(dá),m-Mdh2在心臟和肝臟中表達(dá),m-Mdh3在心臟、肝臟、眼、腎臟中都表達(dá),m-Mdh4僅在眼中表達(dá),澳洲長鰭鰻的MDH在不同組織中的表達(dá)差異顯著。

    L:肝臟(liver);H:心臟(heart);K:腎臟(kidney);M:肌肉(muscle);E:眼睛(eye)

    L:肝臟(liver);H:心臟(heart);K:腎臟(kidney);M:肌肉(muscle);E:眼睛(eye)

    3 討論

    3.1澳洲長鰭鰻不同組織同工酶表達(dá)的特異性及其與功能的關(guān)系

    EST屬于水解酶類,能催化酯鍵水解,對于脂類代謝和生物膜的結(jié)構(gòu)與功能具有一定作用[13]。一般認(rèn)為在硬骨魚類中EST是單體或二聚體,由多個位點編碼,多態(tài)現(xiàn)象非常普遍。澳洲長鰭鰻腎臟和肝臟中EST的含量比較豐富,這和赤點石斑魚、暗紋東方鲀、青海湖裸鯉等魚類的EST表達(dá)類似[9,14-15],可能與肝、腎組織脂類代謝和機體的解毒作用密切相關(guān)。同時,從澳洲長鰭鰻EST的表達(dá)酶譜上看,與其他已報道的魚類相比,澳洲長鰭鰻EST表達(dá)量大,且酶帶很多,這可能與澳洲長鰭鰻體內(nèi)脂肪含量豐富、脂類代謝旺盛相關(guān)。龍華等[16]曾報導(dǎo)過歐洲鰻和日本鰻肝臟、心臟和肌肉中的EST酶譜;與澳洲長鰭鰻相比,歐洲鰻和日本鰻這3種組織中的EST表達(dá)不及澳洲長鰭鰻EST表達(dá)豐富,3種鰻魚的EST表達(dá)有顯著區(qū)別,因此,肝臟、心臟的EST表達(dá)酶譜可用于鑒別澳洲長鰭鰻、歐洲鰻和日本鰻。

    隨著科技的迅猛發(fā)展和科技產(chǎn)品在生活領(lǐng)域的深入,一些新興的“科技疾病”已經(jīng)悄然出現(xiàn)在疾病譜之中。如:夏季的“空調(diào)病”,智能手機所帶來的“手機拇指病”等。近年來,“加濕性肺炎”這個新興的科技疾病走入了人們的視線,“加濕性肺炎”并非專業(yè)醫(yī)學(xué)名詞,也并非單指肺炎,與加濕器也無必然聯(lián)系,而是因加濕器使用不當(dāng)造成的呼吸道系統(tǒng)的一系列疾病。包括上呼吸道感染、支氣管炎、哮喘、肺炎等。孕、產(chǎn)婦是一特殊群體,在現(xiàn)今社會受到了家屬的“盲目關(guān)心”,而家屬醫(yī)學(xué)知識的匱乏或不良的使用方式,可能在無意中損害了孕婦的身體健康。

    G6PDH為二聚體酶,是糖代謝中磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶,該途徑產(chǎn)生的NAPDH能被細(xì)胞廣泛用來驅(qū)使還原性厭氧途徑,為生物合成提供動力,如脂肪酸、固醇類物質(zhì)的合成等,產(chǎn)生的磷酸戊糖參與核酸代謝[17]。澳洲長鰭鰻的G6PDH在肝臟和腎臟中表達(dá),肝臟中G6pdh-2表達(dá)量較大,腎臟中G6PDH表達(dá)很弱,但G6pdh-1表現(xiàn)出多態(tài)性,其他組織未見表達(dá)或表達(dá)太弱,現(xiàn)使用的檢測方法無法檢出,澳洲長鰭鰻G6PDH的表達(dá)組織差異性顯著。澳洲長鰭鰻G6PDH的表達(dá)情況與與已報道的鱸魚、虹鱒等魚類表達(dá)類似[10,12],都是肝臟中活性最強,這應(yīng)與肝臟的功能密切相關(guān)。

    POD是一類清除細(xì)胞內(nèi)H2O2的同工酶,其主要功能是清除氨基酸分解代謝及糖醛酸合成代謝等過程中形成的過氧化物。動物的甲狀腺細(xì)胞、具有吞噬功能的白細(xì)胞等含有豐富的過氧化物酶,因此在血流豐富、白細(xì)胞及吞噬細(xì)胞含量較多的心臟、肝臟、腎臟中同工酶POD的表達(dá)較強,而肌肉中表達(dá)較弱或無表達(dá)[9]。澳洲長鰭鰻的POD由3個基因座位編碼,心臟中表達(dá)最為強烈且Pod-1、Pod-2、Pod-3都有表達(dá),腎臟中POD活性也比較強,Pod-3在各種組織中均存在,可能在細(xì)胞中執(zhí)行最基本的功能。澳洲長鰭鰻的POD表達(dá)和已報導(dǎo)的暗紋東方鲀的POD表達(dá)[18]很類似。

    MDH是糖代謝三羧酸循環(huán)過程中的重要酶類,在細(xì)胞中的功能主要是使蘋果酸脫氫參與糖酵解后的有氧代謝[19]。因此,MDH在心臟、肝臟等有氧代謝旺盛的組織中染色較深。從圖4可知,澳洲長鰭鰻肝臟和心臟中POD活性較強,腎臟次之,肌肉和眼中活性較弱,這與肝臟和腎臟有氧代謝旺盛密切相關(guān)。

    3.2 澳洲長鰭鰻同工酶的表達(dá)具有明顯的組織特異性

    綜上所述,通過澳洲長鰭鰻的4種同工酶研究可以看出,澳洲長鰭鰻這4種同工酶的表達(dá)在不同組織間差異性顯著,且這種表達(dá)上的特異性是與各組織的功能相一致的;同時,通過與已報導(dǎo)的日本鰻和歐洲鰻同工酶譜比較,發(fā)現(xiàn)肝臟、心臟的EST表達(dá)酶譜可用于鑒別澳洲長鰭鰻、歐洲鰻和日本鰻。

    [1]樊海平.我國鰻鱺養(yǎng)殖業(yè)的現(xiàn)狀與發(fā)展對策(上)[J].科學(xué)養(yǎng)魚,2006,(2):1-2.

    [2]樊海平.我國鰻鱺養(yǎng)殖業(yè)的現(xiàn)狀與發(fā)展對策(下)[J].科學(xué)養(yǎng)魚,2006,(3):1-2.

    [3]汪珊珊.2009年江西省鰻魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀分析[J].江西水產(chǎn)科技,2010,(2):2-5.

    [4]周延清,楊清香,張改娜,等.生物遺傳標(biāo)記與應(yīng)用[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2008:47-69.

    [5]Manchenko G P(華子純,鄭偉娟譯).酶的凝膠電泳檢測手冊[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2008:49-290.

    [6]郭堯君.蛋白質(zhì)電泳實驗技術(shù)[M].北京:科學(xué)出版社,1999:70-78.

    [7]胡書能,萬賢國.同工酶技術(shù)及其應(yīng)用[M].長沙:湖南科學(xué)技術(shù)出版社,1985:70-85.

    [8]熊全沫.魚類同工酶譜分析(上)[J].遺傳,1992,14(2):41-44.

    [9]熊全沫.魚類同工酶譜分析(下)[J].遺傳,1992,14(3):47-48.

    [10]徐 成,王可玲,尤 鋒,等.鱸魚群體生化遺傳學(xué)研究Ⅰ.同工酶的生化遺傳分析[J].海洋與湖沼,2001,32(1):42-48.

    [11]姜建國,熊全沫,姚汝華.草魚同工酶的組織分布及遺傳結(jié)構(gòu)分析[J].華南理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),1997,25(12):105-110.

    [12]龐艷紅,孫中武,尹洪濱,等.5個虹鱒群體的生化遺傳分析[J].水產(chǎn)學(xué)報,2007,31(4):539-544.

    [13]王 強,沈俊寶.白鰱的同工酶研究[J].遺傳,1991,13(3):22-23.

    [14]區(qū)又君,齊旭東,李加兒,等.波紋唇魚不同組織5種同工酶表達(dá)的差異[J].南方水產(chǎn),2009,5(2):51-55.

    [15]鄧思平,劉楚吾.赤點石斑魚4種同工酶的組織分布及基因位點分析[J].浙江海洋學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版),2004,23(2):103-106.

    [16]龍 華,鄧 華,鄒世平.歐洲鰻與日本鰻的同工酶鑒別研究[J].湖北農(nóng)學(xué)院學(xué)報,2000,20(1):68-71.

    [17]李太武,蘇秀榕.中國對蝦和日本對蝦6種同工酶的比較研究[J].海洋學(xué)報,1997,19(2):85-88.

    [18]劉玲玲,李悅民,陸佩洪,等.暗紋東方鲀同工酶生化表現(xiàn)型的研究[J].遺傳,1998,20(2):23-26.

    [19]管丹東,李明云,葉帥東,等.岱衢族大黃魚不同組織的同工酶譜[J].寧波大學(xué)學(xué)報(理工版),2008,21(1):34-38.

    Q55;Q959.46+9

    A

    1673-1409(2012)06-S014-04

    2012-04-10

    山東省科技攻關(guān)計劃項目(2009GG2GG09027);山東省農(nóng)業(yè)良種工程項目;水產(chǎn)種質(zhì)資源平臺運行服務(wù)項目。

    李 嫻(1979-),女,安徽蚌埠人,碩士,助理研究員,主要從事水產(chǎn)動物遺傳育種研究。

    10.3969/j.issn.1673-1409(S).2012.06.004

    猜你喜歡
    鰻鱺同工酶電泳
    菌源同工酶分析揭示菌源DPP4同工酶是潛在的抗2型糖尿病靶點
    遺傳(2023年8期)2023-08-25 06:59:00
    缺糖基轉(zhuǎn)鐵蛋白與線粒體同工酶在酒精性肝病中的臨床應(yīng)用
    泥鰍魚
    泥鰍魚
    輔助陽極在輕微型廂式車身電泳涂裝中的應(yīng)用
    神秘的鰻鱺
    PPG第四屆電泳涂料研討會在長沙成功舉辦
    上海建材(2017年4期)2017-04-06 07:32:03
    改良的Tricine-SDS-PAGE電泳檢測胸腺肽分子量
    TBBPA對美洲鰻鱺谷胱甘肽代謝相關(guān)指標(biāo)的影響
    茶葉多酚氧化酶及其同工酶的研究進(jìn)展
    茶葉通訊(2014年2期)2014-02-27 07:55:39
    人妻一区二区av| 国产亚洲一区二区精品| av片东京热男人的天堂| 亚洲国产精品专区欧美| 国产成人91sexporn| 爱豆传媒免费全集在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲综合色惰| 成人国产av品久久久| 久久精品国产亚洲av涩爱| 秋霞伦理黄片| 人妻 亚洲 视频| 内地一区二区视频在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 午夜老司机福利剧场| av电影中文网址| 少妇人妻精品综合一区二区| 香蕉精品网在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产在线视频一区二区| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产亚洲最大av| 丝袜脚勾引网站| av在线老鸭窝| 久久99一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 大香蕉97超碰在线| 国产在线一区二区三区精| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲精品,欧美精品| 免费av中文字幕在线| 99久国产av精品国产电影| 十八禁高潮呻吟视频| 五月开心婷婷网| 大香蕉久久成人网| 制服人妻中文乱码| 亚洲五月色婷婷综合| 免费人成在线观看视频色| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久这里只有精品19| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲精品456在线播放app| 一区二区三区精品91| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 国产成人精品久久久久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 中文字幕人妻熟女乱码| av免费在线看不卡| 多毛熟女@视频| 日本av手机在线免费观看| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品久久久久久精品电影小说| 欧美3d第一页| 91成人精品电影| 亚洲精华国产精华液的使用体验| freevideosex欧美| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 午夜精品国产一区二区电影| 免费高清在线观看日韩| 亚洲成国产人片在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 伊人久久国产一区二区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲综合精品二区| 成年动漫av网址| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲综合色网址| 99久国产av精品国产电影| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 1024视频免费在线观看| 制服人妻中文乱码| 丝袜在线中文字幕| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日本爱情动作片www.在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| www.av在线官网国产| 国产一区二区在线观看日韩| 嫩草影院入口| 丝瓜视频免费看黄片| 免费看光身美女| 精品熟女少妇av免费看| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜久久久在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 香蕉精品网在线| 久久这里有精品视频免费| 免费观看在线日韩| 精品国产乱码久久久久久小说| 色吧在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 人妻少妇偷人精品九色| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲,欧美,日韩| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 一级毛片电影观看| 热re99久久国产66热| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一级爰片在线观看| 国产av一区二区精品久久| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日韩精品有码人妻一区| 国产亚洲最大av| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 成年女人在线观看亚洲视频| 黄色一级大片看看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 我的女老师完整版在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国内精品宾馆在线| 中文字幕免费在线视频6| 少妇的逼水好多| 老司机影院毛片| 亚洲熟女精品中文字幕| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇 在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 大香蕉久久网| 国产精品偷伦视频观看了| 高清黄色对白视频在线免费看| 成人毛片60女人毛片免费| 欧美97在线视频| 五月天丁香电影| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 9色porny在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产日韩欧美视频二区| 老熟女久久久| 另类亚洲欧美激情| 九九在线视频观看精品| 久久99蜜桃精品久久| 一级a做视频免费观看| av国产久精品久网站免费入址| 麻豆乱淫一区二区| 国产色婷婷99| 在线天堂中文资源库| 久久免费观看电影| av免费在线看不卡| 亚洲色图综合在线观看| 少妇熟女欧美另类| 日韩电影二区| 最新的欧美精品一区二区| 天美传媒精品一区二区| tube8黄色片| 久久久久久久久久久久大奶| 最近中文字幕高清免费大全6| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | av天堂久久9| 香蕉精品网在线| 亚洲成人av在线免费| 熟女av电影| 999精品在线视频| 国产淫语在线视频| 九九在线视频观看精品| 精品国产乱码久久久久久小说| 丰满乱子伦码专区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 熟女av电影| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 99热网站在线观看| av卡一久久| 如何舔出高潮| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 一区二区av电影网| 久久青草综合色| 超碰97精品在线观看| 久久av网站| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产av国产精品国产| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美精品一区二区免费开放| 精品久久久精品久久久| a级片在线免费高清观看视频| 五月伊人婷婷丁香| 在现免费观看毛片| 欧美日本中文国产一区发布| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美成人午夜免费资源| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 丝袜喷水一区| 亚洲精品自拍成人| 咕卡用的链子| 国产av一区二区精品久久| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美人与性动交α欧美软件 | 亚洲精品色激情综合| 国产精品国产三级国产专区5o| 少妇高潮的动态图| 一级片'在线观看视频| 性色av一级| 人体艺术视频欧美日本| 综合色丁香网| 精品亚洲成国产av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 下体分泌物呈黄色| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲中文av在线| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成人影院久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 18禁国产床啪视频网站| 午夜av观看不卡| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品一区蜜桃| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲av男天堂| 大片免费播放器 马上看| 老女人水多毛片| 亚洲成色77777| 一级毛片 在线播放| 9191精品国产免费久久| 欧美 日韩 精品 国产| 久久精品人人爽人人爽视色| av片东京热男人的天堂| 精品久久久精品久久久| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲av.av天堂| www日本在线高清视频| 久久狼人影院| 91国产中文字幕| 天堂8中文在线网| 999精品在线视频| 赤兔流量卡办理| 欧美xxⅹ黑人| 大片电影免费在线观看免费| 国产1区2区3区精品| 国产精品一二三区在线看| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久精品94久久精品| 亚洲国产色片| 男人添女人高潮全过程视频| 一级,二级,三级黄色视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲精品456在线播放app| 国产探花极品一区二区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩精品有码人妻一区| 久久 成人 亚洲| 久热久热在线精品观看| av黄色大香蕉| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 90打野战视频偷拍视频| 国产一区二区在线观看av| 日韩欧美精品免费久久| 在线观看人妻少妇| 精品熟女少妇av免费看| 有码 亚洲区| 少妇 在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品一国产av| 美女内射精品一级片tv| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 七月丁香在线播放| 少妇人妻精品综合一区二区| 精品熟女少妇av免费看| 99九九在线精品视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 一区二区av电影网| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产精品久久久久成人av| 99国产精品免费福利视频| 国产男女内射视频| videos熟女内射| 国产 一区精品| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品蜜桃在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| av电影中文网址| 一级爰片在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 国产亚洲最大av| 另类精品久久| 国产在线视频一区二区| 草草在线视频免费看| 午夜福利影视在线免费观看| 精品一区二区三卡| 男女啪啪激烈高潮av片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产一级毛片在线| 90打野战视频偷拍视频| 大码成人一级视频| 亚洲人与动物交配视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 日韩伦理黄色片| 我要看黄色一级片免费的| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲,欧美精品.| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲综合色网址| 国产 精品1| a级片在线免费高清观看视频| 69精品国产乱码久久久| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲图色成人| 在线看a的网站| 中国国产av一级| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 中文字幕人妻丝袜制服| 多毛熟女@视频| 国产成人欧美| 欧美日韩综合久久久久久| 在线观看三级黄色| 99热全是精品| 伦理电影大哥的女人| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 51国产日韩欧美| 免费大片黄手机在线观看| 日韩大片免费观看网站| av线在线观看网站| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产成人精品久久久久久| videossex国产| av有码第一页| xxxhd国产人妻xxx| 国产在线视频一区二区| 免费大片18禁| 成人午夜精彩视频在线观看| 免费av中文字幕在线| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 欧美亚洲日本最大视频资源| a级毛片在线看网站| 一本大道久久a久久精品| 国产成人精品在线电影| 亚洲,一卡二卡三卡| 人妻一区二区av| www.熟女人妻精品国产 | 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 久热这里只有精品99| 亚洲精品乱久久久久久| 在线观看一区二区三区激情| 日韩三级伦理在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲综合色惰| 久久久久久久大尺度免费视频| 两性夫妻黄色片 | 最近中文字幕2019免费版| 亚洲 欧美一区二区三区| 中国美白少妇内射xxxbb| av一本久久久久| 久久婷婷青草| 少妇的逼好多水| 国产色婷婷99| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲美女黄色视频免费看| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 全区人妻精品视频| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久久久久久人人人人人人| av电影中文网址| 亚洲人成77777在线视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲性久久影院| www.熟女人妻精品国产 | 精品第一国产精品| 人妻一区二区av| 日韩中文字幕视频在线看片| 精品人妻一区二区三区麻豆| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| av在线app专区| 亚洲欧洲国产日韩| 国产乱人偷精品视频| 精品久久久久久电影网| 国产在线一区二区三区精| 少妇人妻 视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 视频区图区小说| 中文字幕免费在线视频6| 国产熟女午夜一区二区三区| 中文字幕免费在线视频6| 免费在线观看黄色视频的| 成年av动漫网址| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 午夜精品国产一区二区电影| 日韩制服骚丝袜av| 国产深夜福利视频在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品人妻久久久影院| 日韩视频在线欧美| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久久久久久成人| 久久久久久久精品精品| 日本黄色日本黄色录像| 毛片一级片免费看久久久久| 全区人妻精品视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 伊人亚洲综合成人网| 一二三四在线观看免费中文在 | 久久精品国产综合久久久 | 狂野欧美激情性bbbbbb| 91国产中文字幕| 美女视频免费永久观看网站| 精品国产一区二区久久| 91成人精品电影| 黑人高潮一二区| 精品视频人人做人人爽| 久久ye,这里只有精品| 亚洲国产精品999| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日本黄大片高清| 熟女人妻精品中文字幕| 久久99蜜桃精品久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 视频区图区小说| 涩涩av久久男人的天堂| 久久久国产一区二区| av视频免费观看在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲色图综合在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲综合精品二区| 久久久久久久久久久久大奶| 久久精品久久久久久久性| 五月伊人婷婷丁香| 新久久久久国产一级毛片| 十分钟在线观看高清视频www| 日本欧美视频一区| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲性久久影院| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 免费高清在线观看日韩| 国产老妇伦熟女老妇高清| 视频在线观看一区二区三区| 欧美 日韩 精品 国产| 日本wwww免费看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产精品三级大全| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 美女国产高潮福利片在线看| 国产又色又爽无遮挡免| 香蕉国产在线看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 午夜免费观看性视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 18禁观看日本| 亚洲av国产av综合av卡| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品一二三区在线看| 男的添女的下面高潮视频| 久久影院123| 亚洲精品456在线播放app| 日韩一本色道免费dvd| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 一二三四中文在线观看免费高清| 日韩视频在线欧美| 色婷婷av一区二区三区视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 精品福利永久在线观看| 久久午夜福利片| 不卡视频在线观看欧美| 夫妻午夜视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 香蕉精品网在线| 国产黄频视频在线观看| 丝袜脚勾引网站| 久久人妻熟女aⅴ| 久久97久久精品| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 老女人水多毛片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 晚上一个人看的免费电影| 日日撸夜夜添| 久久婷婷青草| 有码 亚洲区| 国产淫语在线视频| 欧美性感艳星| 人体艺术视频欧美日本| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 免费少妇av软件| 中国国产av一级| 亚洲成色77777| 亚洲国产精品成人久久小说| 91国产中文字幕| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲国产日韩一区二区| 一本久久精品| 欧美日韩成人在线一区二区| av线在线观看网站| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲精品美女久久av网站| 日韩欧美精品免费久久| 午夜日本视频在线| av线在线观看网站| 丰满乱子伦码专区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 在现免费观看毛片| 午夜av观看不卡| 午夜福利视频在线观看免费| 中国国产av一级| 老司机影院毛片| 最近2019中文字幕mv第一页| 欧美bdsm另类| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 免费大片18禁| av.在线天堂| 三级国产精品片| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 大陆偷拍与自拍| 国产 精品1| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 免费人成在线观看视频色| 亚洲精品久久午夜乱码| 寂寞人妻少妇视频99o| 性色av一级| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久久欧美国产精品| 久久 成人 亚洲| 亚洲av欧美aⅴ国产| 黄色 视频免费看| 亚洲伊人久久精品综合| 午夜免费观看性视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品一区二区免费观看| 国产午夜精品一二区理论片| 久久午夜福利片| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产乱人偷精品视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 免费av不卡在线播放| 99热6这里只有精品| 亚洲综合色惰| 亚洲国产精品999| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产黄频视频在线观看| av在线老鸭窝| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 欧美3d第一页| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 捣出白浆h1v1| 在线 av 中文字幕| 日韩中字成人| 久久久精品免费免费高清| 亚洲成人手机| 亚洲精品自拍成人| av在线app专区| 免费大片18禁| 久久99一区二区三区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国国产精品蜜臀av免费| 国产高清不卡午夜福利| 韩国高清视频一区二区三区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲国产精品一区三区| 女人久久www免费人成看片| 婷婷色综合www| 美女大奶头黄色视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 这个男人来自地球电影免费观看 | 日韩大片免费观看网站| 国产淫语在线视频| 久久影院123| av有码第一页| 婷婷色综合www| 久久免费观看电影| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲国产av影院在线观看| 韩国精品一区二区三区 | 久久久国产欧美日韩av| 久久久久久伊人网av| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产午夜精品一二区理论片| 搡老乐熟女国产| 国产在线视频一区二区| 成人无遮挡网站| 欧美精品一区二区大全| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 九草在线视频观看| 亚洲精品国产av成人精品| 国产福利在线免费观看视频| 一边摸一边做爽爽视频免费|