骨橋蛋白在浸潤性乳腺癌中的表達及臨床意義

張曉娟 朱 燕 楊其昌 劉宏斌 沈 屹

乳腺癌是1種嚴重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率呈現(xiàn)上升及年輕化趨勢，因此其早期診斷和各種治療方法一直是人們研究的焦點。OPN蛋白是近年來發(fā)現(xiàn)的1種分泌型鈣結合磷酸化糖蛋白，不但參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，而且可能在腫瘤淋巴結轉移中發(fā)揮重要作用。有關OPN和c-erbB-2蛋白的表達與浸潤性乳腺癌相關性研究尚少見報道。我們應用免疫組織化學方法，分別檢測87例浸潤性乳腺癌、癌旁組織及20例乳腺良性病變組織的0PN和c-erbB-2蛋白的表達，觀察兩者在浸潤性乳腺癌中的臨床應用價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

87例乳腺癌標本均來自南通大學第二附屬醫(yī)院2006年1月～2007年12月手術標本。所有患者均為女性，年齡37～83歲，平均年齡53.8歲，腫瘤平均直徑3.58 cm。術前均未進行放療或化療，均經HE染色及本院2位主治以上病理醫(yī)師診斷。87例中浸潤性導管癌47例，其中Ⅰ級12例、Ⅱ級17例、Ⅲ級18例;浸潤性小葉癌18例;髓樣癌12例;其他類型包括黏液腺癌、神經內分泌癌、化生性癌等10例。同時選取20例乳腺良性病變組織標本對比。

1.2 方法

采用免疫組織化學EnVision法。OPN單克隆抗體及乳腺癌試劑盒均購自福州邁新公司。所有標本均在癌灶中央及正常組織交界處常規(guī)取材，10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，行HE及免疫組織化學染色。并用已知陽性切片作陽性對照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗和二抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

采用雙盲法觀察每張切片。OPN染色以癌細胞胞質中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性著色。具體觀察方法:高倍鏡下(×200)隨機選擇5個視野，每個視野計數(shù)200個癌細胞，共1000個細胞。①按陽性細胞數(shù)占細胞總數(shù)的比例計分:無陽性細胞計0分，＜25%計1分，＞25%計2分。②按陽性細胞顯色強度計分:無顯色計0分，細胞質內淺黃色顆粒計1分，棕黃色顆粒計2分，棕褐色顆粒計3分。①+②≥3記為陽性，否則為陰性。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用Stata10.0軟件分析，各組間率采用χ2檢驗，P＜0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 OPN在乳腺組織中的表達

OPN在乳腺良性病變及癌旁組織中幾乎無表達，在浸潤性乳腺癌中OPN陽性率51.7%(45/87)，兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 OPN表達在乳腺癌中的表達

在浸潤性導管癌、浸潤性小葉癌、髓樣癌及其他類型癌中 OPN 陽性率分別為 61.7%(29/47)、38.9%(7/18)、41.7%(5/12)、40.0%(4/10)，不同類型癌組織中OPN陽性表達無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。浸潤性導管癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級陽性率分別為33.3%(4/12)、58.8%(10/17)、83.3%(15/18)，表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。乳腺癌伴腋窩淋巴結轉移者，OPN蛋白表達陽性率65.9%(27/41)，統(tǒng)計結果顯示OPN表達在有無淋巴結轉移者中差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。c-erbB-2蛋白過表達的乳腺癌OPN蛋白表達高于c-erbB-2蛋白陰性者，差異有統(tǒng)計學意義。癌組織中OPN表達與患者年齡、腫瘤大小、組織學類型及ER、PR表達差異均無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 OPN表達與乳腺癌各臨床病理特征的關系(例，%)

3 討論

骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)是1種帶負電荷、具有親水性的酸性多功能分泌型鈣結合磷酸化糖蛋白，可表達于人類不同組織中，如骨、腎、肺、肝、膀胱、胰腺、乳腺、睪丸、腦和骨髓等，可由骨細胞、神經細胞、腔上皮細胞、內皮細胞、血管平滑肌細胞、活化的T細胞及巨噬細胞等分泌。OPN在許多人類腫瘤如肝癌、胃癌、宮頸癌［1～3］組織中表達增高。OPN通過與其主要受體整合素和CD44的相互作用，在腫瘤細胞的移行、浸潤、促進腫瘤血管的形成、抑制凋亡等多個環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要的作用［4］。姜斌等［5］用免疫組織化學方法檢測人非小細胞肺癌的OPN的表達，結果表明非小細胞肺癌中OPN的表達水平較正常肺組織及其他良性肺腫瘤表達明顯升高，且OPN的表達與淋巴結轉移和臨床分期密切相關。余洋等［6］研究50例膀胱尿路上皮癌中OPN表達，顯示OPN隨腫瘤病理分級、臨床分期的增高而明顯增加，并且在初發(fā)組和復發(fā)組中、單發(fā)組與多發(fā)組中的比較，都具有顯著差異。本組研究結果中，浸潤性乳腺癌OPN陽性率51.7%，而正常乳腺及良性病變組織中幾乎無表達，提示OPN可能通過同樣的作用途徑促進乳腺細胞異常增生和惡性轉化。

本組實驗中，OPN表達與浸潤性乳腺癌組織學類型無相關性，而與浸潤性導管癌的組織學分級密切相關，Ⅲ級導管癌OPN表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ級導管癌，但在Ⅰ級、Ⅱ級之間無顯著差異。表明OPN的表達不僅反映了乳腺癌細胞的增殖活性，還與腫瘤的進展密切相關。OPN在淋巴結有、無轉移組陽性表達率分別是65.9%和39.1%，顯示OPN陽性表達的乳腺癌細胞具有更強的侵襲、轉移能力，OPN的表達對判斷乳腺癌的預后具有重要的臨床意義。與陳軍等［7］研究結果相近。c-erbB-2過表達者中70%癌組織同時表達OPN蛋白，且淋巴結轉移率遠高于二者同時陰性者。cerbB-2及OPN都是與腫瘤侵襲和轉移密切相關的基因，其作用機制各不相同但又存在著復雜的聯(lián)系。

正常人循環(huán)血液中也存在一定水平的OPN。Singhal等［8］比較了轉移性乳腺癌患者、處于無病生存期的原發(fā)性乳腺癌患者及健康志愿者血漿OPN水平，發(fā)現(xiàn)OPN表達上調提示預后不良。Bramwell等［9］連續(xù)測定158例轉移性乳腺癌患者血漿OPN水平，前瞻性分析顯示OPN濃度越高，患者無瘤生存期及總生存期越短，且易發(fā)生體內臟器轉移。因此，對乳腺癌患者定期復查血液OPN水平非常必要。

骨橋蛋白OPN在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉歸中具有重要作用，對OPN及其抑制劑的研究可能為腫瘤治療帶來新的前景。但是，目前對于OPN自身及其作用機制仍有許多問題尚不明了，有待進一步證實。

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［5］姜 斌，劉 峰，龔圣濟，等.骨橋蛋白在小細胞肺癌中的表達〔J〕.上海交通大學學報(醫(yī)學版)，2007，26(11):1287.

［6］余 洋，李明明，師宏斌，等.骨橋蛋白和環(huán)氧化酶-2在膀胱尿路上皮癌中的表達及臨床意義〔J〕.寧夏醫(yī)學雜志，2010，32(5):430.

［7］陳 軍，覃思繁.骨橋蛋白與MMP-9在乳腺癌組織中的表達及意義〔J〕.實用癌癥雜志，2008，23(4):339.

［8］Singhal H，Bautista D S，Tonkin K S，et al.Elevated plasma osteopontin in me tastatic breast cancer associated with increased tumor burden and decreased survival〔J〕.Clin Cancer Res，1997，3(4):605.

［9］Bramwell V H，Doig G S，Tuck A B，et al.Serial plasma osteopontin levels have prognostic value in metastatic breast cancer〔J〕.Clin Cance Res，2006，12(11):3337.