2 862例臨床患者T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果分析

趙雯，張子寧，王亞男，匡榮梅，傅雅靜，姜擁軍，耿文清，陳燕，尚紅

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，衛(wèi)生部艾滋病免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽 1 1 0 0 0 1）

T淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在人體細(xì)胞免疫中發(fā)揮核心作用［1~5］。依據(jù)表面標(biāo)志物的不同，T淋巴細(xì)胞可分為不同的T淋巴細(xì)胞亞群，包括 CD4+CD3+T（CD4+T）細(xì)胞和 CD8+CD3+T（CD8+T）細(xì)胞。不同疾病可導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生不同程度的改變，如與正常值進(jìn)行比較，可以客觀地反映機(jī)體的免疫狀況，判斷患者的病情進(jìn)展以及評(píng)價(jià)療效［6~8］。

T細(xì)胞亞群檢測(cè)在疾病的輔助診斷療效分析具有重要意義，以往研究多偏重于艾滋病、肝病等慢性傳染性疾病，具體分析多種疾病的異常變化情況目前尚未見報(bào)道。本研究對(duì)中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2010年3月至2011年2月2 862例臨床患者T淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果進(jìn)行分析，研究異常結(jié)果在不同疾病中的分布，為臨床明確T淋巴細(xì)胞亞群在不同疾病中的診斷價(jià)值提供參考?，F(xiàn)對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果，按照科室及臨床診斷分組，總結(jié)分析如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象：2010年3月至2011年2月首次來我院檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群的2 862例患者的全血樣本。

1.1.2 試劑和儀器：試劑均購至BD Biosciences公司，包括CD4/CD8/CD3三色試劑、TruCount絕對(duì)計(jì)數(shù)管、10×免洗溶血素。BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀。

1.2 方法

將20 μL CD4/CD8/CD3 TriTEST試劑加入CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)管中，采用反向加樣的方法加入50 μL抗凝血，室溫避光15 min，加入免洗溶血素450 μL，室溫避光15 min，應(yīng)用BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀，F(xiàn)ACS MULTISET軟件檢測(cè)并進(jìn)行自動(dòng)分析，計(jì)算CD4+、CD8+、CD3+T淋巴細(xì)胞數(shù)量及相應(yīng)比值等。依據(jù)正常值參考范圍（CD4+T 細(xì)胞：（410~1590）/μL，CD8+T 細(xì)胞：（190~1 140）/μL），判定正常結(jié)果為1 864例（65.1%），異常結(jié)果為998例（34.9%）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，組間率的比較采用Pearson χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 全部T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)科室分布

2 862例患者中，體檢中心/慢性病院和腎臟內(nèi)科檢測(cè)最多，分別達(dá)到659例（占檢測(cè)總數(shù)的23.0%）和657（23.0%）例；呼吸內(nèi)科、風(fēng)濕免疫科檢測(cè)例數(shù)分別為 323例（11.3%）和243（8.5%）例；腫瘤/放療、兒科、急診/重癥/著門/干診、皮膚科、感染/傳染科和血液內(nèi)科，分別達(dá)到 199（7.0%）、184（6.4%）、167（5.8%）、156（5.5%）、123（4.3%）和 98（3.4%）例；除上述外其他科室為53例（1.9%），合計(jì)2 862例，見表1。

表1 根據(jù)科室分組T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)異常值病例數(shù)Tab.1 The cases of outliers of T-lymphocyte subsets classified based on departments

2.2 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)異常結(jié)果科室分布

T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)異常結(jié)果共998例，異常結(jié)果在各科室之間具有顯著性差異（χ2=317，P<0.05）。根據(jù)科室分布由高到低依次為腎臟內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、風(fēng)濕免疫科、兒科、體檢中心/慢性病院、急診/重癥/著門/干診、腫瘤/放療、血液內(nèi)科、感染/傳染科、皮膚科和其他科室。其中腎臟內(nèi)科的異常值病例數(shù)量最多，為184例（約占異常值總數(shù)的18.4%）；呼吸內(nèi)科151例（15.1%）；風(fēng)濕免疫科124例（12.4%）；兒科 103例（10.3%）；體檢中心/慢性病院82例（8.2%）；急診/重癥/著門/干診 80例（8.0%）；腫瘤/放療 78例（7.8%）；血液內(nèi)科65例（6.5%）；感染/傳染科64例（6.4%）；皮膚科 50例（5.0%）；其他科室 17例（1.7%），見表1。

各科室T淋巴細(xì)胞亞群異常值的數(shù)量占其科室檢測(cè)數(shù)量的比率也各不相同。各科室異常值比率最高的為血液內(nèi)科，占66%；其次異常值比率較高的科室為兒科、感染/傳染科、風(fēng)濕免疫科、急診/重癥/著門/干診和呼吸內(nèi)科，異常值比率分別為56%、52%、51%、48%和 47%；腫瘤/放療、皮膚科、腎臟內(nèi)科異常值比率分別為39%、32%和28%；體檢中心/慢性病院異常值比率較低占其科室檢測(cè)總數(shù)的12%；其他科室檢測(cè)的異常值占其科室檢測(cè)總數(shù)的32%，見表 1。

2．3 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)異常結(jié)果臨床診斷分析

根據(jù)各科室開具的臨床診斷信息，我們對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)異常值進(jìn)行分組，其中體檢中心和慢性病院開具的化驗(yàn)單缺失診斷信息，排除在外，剩余2 207例病例，其中異常值為919例病例，不同診斷之間的異常值結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=110，P<0.05）。各種診斷疾病異常值的例數(shù)由高到低分別為呼吸系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、腫瘤、不明原因發(fā)熱、血液系統(tǒng)疾病、皮膚病、感染性疾病和其他診斷，其中呼吸系統(tǒng)疾病病例中T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)異常值最多，244例（占異常值總數(shù)的26.6%）；泌尿系統(tǒng)疾病199例（21.7%）；免疫系統(tǒng)病116例（12.6%）；腫瘤109例（11.9%）；不明原因發(fā)熱102例（11.1%）；血液系統(tǒng)疾病51例（5.5%）；皮膚病40例（4.4%）；感染性疾病 35例（3.8%）；其他診斷23例（2.5%），見表2。

表2 根據(jù)診斷分組T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)異常值病例數(shù)Tab.2 The cases of outliers of T-lymphocyte subsets classified based on disease diagnosis

2.4 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)異常結(jié)果分類分析

T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果，依據(jù)CD4+、CD8+T細(xì)胞數(shù)量分別變化分為9類，其中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞均正常，屬于正常值，此外沒有發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞高CD8+T細(xì)胞低的病例，因此將異常結(jié)果進(jìn)一步分為7類，以CD4+T細(xì)胞低伴CD8+T細(xì)胞正常和CD4+T細(xì)胞低伴CD8+T細(xì)胞低最多（表1和表2）。我們對(duì)這兩種最常見的異常結(jié)果分析如下：根據(jù)科室分組，CD4+T細(xì)胞低伴CD8+T細(xì)胞正常結(jié)果以腫瘤/放療、風(fēng)濕免疫科和感染/傳染科排在前三位，分別為60.3%、53.2%和46.9%；CD4+T細(xì)胞低伴CD8+T細(xì)胞低結(jié)果以血液內(nèi)科、急診/重癥/著門/干診和呼吸內(nèi)科百分含量排在前三位，分別為53.8%、46.3%和43.0%。根據(jù)診斷分組，CD4+T細(xì)胞低伴CD8+T細(xì)胞正常結(jié)果以免疫系統(tǒng)疾病、腫瘤和不明原因發(fā)熱排在前三位，分別為56.0%、56.0%和39.2%；CD4+T細(xì)胞低伴CD8+T細(xì)胞低結(jié)果以血液系統(tǒng)疾病、不明原因發(fā)熱和呼吸系統(tǒng)疾病百分含量排在前三位，分別為52.9%、36.3%和34.4%。此外，兒科異常值中以是CD4+T高CD8+T高最多，為46.6%。

3 討論

T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化對(duì)患者免疫狀態(tài)的評(píng)估及疾病診斷具有重要意義，本研究通過2 862例病例，分析各種疾病異常值的比率，為臨床診斷和治療提供重要參考［6~8］。

人體成熟T淋巴細(xì)胞亞群根據(jù)其表型不同，可分為CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞（簡稱CD4+T細(xì)胞）和CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞（簡稱CD8+T細(xì)胞）；根據(jù)功能不同，T淋巴細(xì)胞亞群可分為輔助性T細(xì)胞（Th）、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Tc）、介導(dǎo)遲發(fā)型超敏反應(yīng)T細(xì)胞（TDTH）以及抑制性T淋巴細(xì)胞（Ts）。CD4+T細(xì)胞主要行使Th細(xì)胞的功能，而CD8+T細(xì)胞主要行使Tc細(xì)胞的功能，因此根據(jù)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的數(shù)量，可初步評(píng)估機(jī)體免疫狀態(tài)。

本研究中根據(jù)科室分組發(fā)現(xiàn)腎臟內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、風(fēng)濕免疫科異常值最多，根據(jù)疾病診斷分組發(fā)現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病異常值最多。

目前T淋巴細(xì)胞亞群研究熱點(diǎn)主要集中于各種傳染性肝炎的研究，結(jié)果顯示在慢性肝炎感染者中 CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群下降 CD8+T 細(xì)胞上升［9，10］，而在重型肝炎感染者中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞數(shù)量均下降［11，12］。我們根據(jù)異常值分組發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞下降CD8+T細(xì)胞上升或者兩者均下降屬于最常見的淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量異常，根據(jù)診斷分組主要分布在呼吸系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病、感染性疾病、腫瘤、免疫系統(tǒng)性疾?。欢鶕?jù)科室分組則主要分布在腎臟內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、風(fēng)濕免疫、腫瘤/移植、感染/傳染等科室。提示我們一些感染性疾病、腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病均會(huì)引起T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的異常，主要是CD4+T細(xì)胞數(shù)量的下降，臨床醫(yī)生在遇到此類疾病時(shí)應(yīng)該考慮檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群，用以輔助疾病的診斷和治療。

我們?cè)诟鶕?jù)疾病種類分組分析的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)紅斑狼瘡、白血病等免疫疾病CD4+T細(xì)胞異常值比例較高，提示以上疾病的診斷及預(yù)后評(píng)估等應(yīng)注意T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)情況，可能對(duì)于疾病的診斷和輔助治療有幫助。

我們通過對(duì)兒科103例異常T細(xì)胞亞群病例分析發(fā)現(xiàn)，以CD4+T細(xì)胞升高伴CD8+T細(xì)胞升高最多，共48例（占兒科異常檢測(cè)結(jié)果46.6%）。朱麗華等人主編的實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)中，白細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn)成人的參考范圍為（4.0~10.0）×109/L，而初生兒為（15.0~20.0）×109/L，6個(gè)月至 2歲嬰兒為（11.0~12.0）×109/L，兒童與成人的白細(xì)胞數(shù)量相差很多，提示兒童T淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值高于正常成人。由于我國目前并無不同年齡段兒童的T淋巴細(xì)胞亞群正常值范圍，國外也尚無相關(guān)資料可查詢，因此在解讀兒科患者T細(xì)胞亞群結(jié)果時(shí)，更應(yīng)結(jié)合其動(dòng)態(tài)變化等，而不能僅根據(jù)成人的正常值范圍進(jìn)行判斷兒科患者的結(jié)果是否異常。

本研究的局限為：研究中所有的診斷僅僅為初步診斷，不是最終診斷，只能初步判定疾病狀態(tài)下T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化，不能夠精確顯示疾病狀態(tài)下其改變的情況，最終診斷可能會(huì)改變，因此分析的診斷標(biāo)準(zhǔn)存在一定的誤差。

［1］Qiu S，Du Y，Duan X，et al.Cytotoxic T lymphocytes mediate chronic inflammation of the nasal mucosa of patients with atypical allergic rhinitis［J］.N Am J Med Sci，2011，3（8）：378-383.

［2］Salsman VS，Chow KK，Shaffer DR，et al.Crosstalk between medulloblastoma cells and endothelium triggers a strong chemotactic signal recruiting T lymphocytes to the tumor microenvironment［J］.PLoS One，2011，6（5）：e20267.

［3］Bantug GR，Cekinovic D，Bradford R，et al.CD8+T lymphocytes control murine cytomegalovirus replication in the central nervous system of newborn animals［J］.J Immunol，2008，181（3）：2111-2123.

［4］Jiang XB，Wang ZD，Zhu Y，et al.Inhibition of CD8+T lymphocytes attenuates respiratory syncytial virus-enhanced allergic inflammation［J］.Respiration，2009，77（1）：76-84.

［5］Igietseme JU，He Q，Joseph K，et al.Role of T lymphocytes in the pathogenesis of Chlamydia disease［J］.J Infect Dis，2009，200（6）：926-934.

［6］Kress-Bennett JM，Ehrlich GD，Bruno A，et al.Preliminary study：Treatment with intramuscular interferon beta-1a results in increased levels of IL-12Rβ2+and decreased levels of IL23R+CD4+T-Lymphocytes in multiple sclerosis［J］.BMC Neurol，2011，11：155.

［7］Rodrigues CM，Matias BF，Murta EF，et al.The role of T lymphocytes in cancer patients undergoing immunotherapy with autologous dendritic cells［J］.Clin Med Insights Oncol，2011，5：107-115.

［8］Srinivasula S，Lempicki RA，Adelsberger JW，et al.Differential effects of HIV viral load and CD4 count on proliferation of naive and memory CD4 and CD8 T lymphocytes ［J］.Blood，2011，118（2）：262-270.

［9］Li J，Han Y，Jin K，et al.Dynamic changes of cytotoxic T lymphocytes（CTLs），natural killer（NK）cells，and natural killer T（NKT）cells in patients with acute hepatitis B infection［J］.Virol J，2011，8：199.

［10］沈書旭，劉英，關(guān)琪，等.HCV感染者外周血CD4~+T細(xì)胞計(jì)數(shù)與病毒載量的相關(guān)性分析［J］.沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，11（4）：213-214.

［11］吳叢霞，陳琳，丁淑芬.T細(xì)胞亞群與病毒性重型肝炎轉(zhuǎn)歸關(guān)系分析［J］.南通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008，28（2）：128-129.

［12］高洪波，許敏，胡肖兵，等.重型肝炎患者淋巴細(xì)胞亞群的變化及其意義［J］.臨床肝膽病雜志，2006，22（3）：175-176.