甜瓜枯萎病不同生理小種的鑒定方法

邵元健 ，周小林 ，包衛(wèi)紅 ，吳雯雯 ，張娟

（1.江蘇南通農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院，226007；2.江蘇南通市農(nóng)業(yè)生物技術重點實驗室；3.江蘇海門市農(nóng)業(yè)科學研究所；4.南通大學）

甜瓜枯萎病由尖鐮刀菌甜瓜專化型（Fusarium oxysporumf.sp.melonis，簡稱FOM）的病原菌侵染所致。該病首次報道于1930年，是在美國紐約發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在在全世界各地均有發(fā)現(xiàn)，但各地分布并不一致[1]。

1 甜瓜枯萎病抗性主基因及生理小種

1976年，Risser等[2]提出命名甜瓜枯萎病生理小種及其對應的抗性基因的標準方法，抗性基因按照發(fā)現(xiàn)的先后編號，而小種則根據(jù)對應的抗性基因進行編號。目前，報道的甜瓜枯萎病的抗性基因主要有3個，生理小種有4個，分別為小種0、1、2和1.2。1973年，Risser報道了兩個抗病基因，分別為Fom1和Fom2。其中，F(xiàn)om1來自品種Doublon，抗甜瓜枯萎病?；蜕硇》N0和2，感生理小種1和1.2；Fom2來自品種CM17187，抗生理小種 0和 1，感生理小種2和1.2。Joobeur等[3]2004年克隆分離得到該基因。Zink等[4]在品種Perlita FR中發(fā)現(xiàn)了第3個抗病基因Fom3，抗生理小種0和2，對生理小種的抗性表現(xiàn)與Fom1表現(xiàn)一樣。另外，生理小種1.2 為害癥狀有兩種，一種是枯萎型（race 1.2w），一種是黃化型 （race 1.2y）。研究發(fā)現(xiàn)甜瓜對 race 1.2的抗性表現(xiàn)為多基因控制[5]。不同寄主對4種生理小種的標準鑒定方法如表1。

2 接種鑒定程序

枯萎病接種方法是采用孢子懸浮液或菌絲體懸浮液進行接種。技術操作規(guī)程如下。

表1 不同寄主對不同小種的抗性表現(xiàn)

2.1 播種與發(fā)芽條件

種子播種在蛭石中，發(fā)芽溫度控制在25～30℃，保持16 h光照，不施用肥料。

2.2 菌種培養(yǎng)

播種3 d后，開始培養(yǎng)菌種，采用V-8液體培養(yǎng)基（200 mL V-8 培養(yǎng)液，800 mL 水，3 g CaCO3），放在搖床中培養(yǎng)，溫度控制在30℃。

2.3 接種時間及接種液準備

一般播種后10 d，即子葉完全展開時開始接種。將培養(yǎng)液用紗布過濾得到孢子接種液，再將孢子濃度調整到1×106個/mL。

2.4 接種方法

將幼苗從蛭石中取出，洗凈根部，在接種液中浸泡5 min，然后移栽到營養(yǎng)缽中，放在涼爽、遮光、高濕的環(huán)境中過夜，以使其盡快恢復生長。

2.5 接種后管理

第二天，將苗放置到培養(yǎng)室中或人工培養(yǎng)室中培養(yǎng)，溫度保持在24℃，光照12 h，培養(yǎng)3周。

2.6 結果鑒定

接種5～7 d后，感病植株開始萎蔫；3周后，植株的抗病性鑒定結果顯現(xiàn)明了?？共≈仓隉o癥狀，而感病品種將死亡。有時，也可以將發(fā)育異常植株的莖切開，以檢查維管束木質部是否變褐，變褐即再次證明植株感病。

[1]Zitter T A.Fusarium wilt of melon,a worldwide problem in temperate and tropical regions[J].Acta Horticulturae,1999∶492:157-160.

[2]Risser G,Banihashemi Z,Davis D W.A proposed nomenclature ofFusarium oxysporumf.sp.melonisraces and resistance genes inCucumismelo[J].Phytopathology,1976,66:1 105-1 106.

[3]Joobeur T,King J J,Nolin S J,et al.The fusarium wilt resistence locus Fom-2 of melon contains a single resistance gene with complex features[J].The Plant Journal,2004,39(3):283-297.

[4]Zink F W,Gubler W D.Inheritance of resistance in muskmelon toFusariumwilt[J].J Amer Soc Hort Sci,1985,110(5):600-604.

[5]Perchepied L,Pitrat M.Polygenic inheritance of partial resistance toFusarium oxysporumf.sp.melonisrace 1.2 in melon[J].Phytopathology,2004,94(12):1 331-1336.