類風濕關(guān)節(jié)炎患者血清炎性因子、ANCA水平與血管內(nèi)皮損傷標志物的相關(guān)性分析

王艷嬌 李琳蕓 彭長華 江 濤 王昌富

類風濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種以慢性進行性關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯娜硇宰陨砻庖咝约膊　Ｑ軆?nèi)皮損傷是RA關(guān)節(jié)外病變之一，但常為臨床所忽視。血管內(nèi)皮損傷是心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展的重要機制，近年來研究顯示，RA患者具有較高的心血管疾病發(fā)病率與死亡率［1，2］。故關(guān)注RA患者血管內(nèi)皮損傷對于有效預防心血管疾病有重要意義。有研究報道［3，4］，RA患者體內(nèi)長期慢性炎癥反應及自身抗體可能參與血管內(nèi)皮損傷。因此本研究檢測分析活動期和緩解期RA患者炎性細胞因子、中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）、血管內(nèi)皮損傷標志物血清水平變化，以及炎性因子白細胞介素－6（IL－6）、腫瘤壞死因子－α（TNF－α）與血管內(nèi)皮損傷標志物－血管性血友病因子（vWF）、可溶性細胞黏附分子－1（sICAM－1），血管內(nèi)皮黏附分子－1（sVCAM－1）之間的相關(guān)性，進一步論證RA患者血管內(nèi)皮損傷的機制。

1 資料與方法

1.1 檢測對象

RA組106例，其中男16例，女90例，平均年齡50.6歲，為華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬荊州醫(yī)院2010年8月～2011年7月門診和住院病人，符合美國風濕病學會1987年RA診斷標準［5］，并排除高血壓、糖尿病及其它心血管疾病和風濕性疾病，其中處于活動期83例（RA活動組），緩解期23例（RA緩解組）。另選55例體檢健康人群作為對照組，其中男8例，女47例，平均年齡51.2歲，與RA組年齡及性別組成均具有可比性。

1.2 標本采集

抽取受試者清晨空腹靜脈血3ml，分離血清于－70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測方法

采用ELISA檢測炎性因子IL－1β、IL－6、IL－17、TNF－α 及 血 管 損 傷 標 志 物 vWF、sICAM－1、sVCAM－1水平，試劑均為上海西塘生物科技有限公司提供的進口分裝試劑盒，采用酶免疫分析處理系統(tǒng)（BEPⅢ型，SIEMENS公司）；IIF法檢測 ANCA，試劑盒由德國歐蒙醫(yī)學實驗診斷股份公司提供，用熒光顯微鏡（BX51TRF，OLYMPUS公司）觀察結(jié)果。

檢驗操作按照廠家提供的說明書進行。ANCA有兩種熒光模型，胞漿型（cANCA）和核周型（pANCA）。cANCA細胞核無特異性熒光，均勻分布在整個中性粒細胞胞漿中。pANCA位于中性粒細胞核周，顯示光滑的帶狀熒光。

1.4 統(tǒng)計學處理

檢測結(jié)果采用SPSS11.5和ELISA回歸／擬和模型軟件進行統(tǒng)計學分析。用回歸／擬和模型對標準品相對應的濃度和所檢測的吸光度進行擬和優(yōu)度和相關(guān)系數(shù)檢驗，選擇擬合優(yōu)度最大的模型繪制標準曲線，并計算測試樣品相應的濃度。數(shù)據(jù)用均數(shù)和全距表示，計量資料的組間比較用 Wilcoxon Mann－Whitney檢驗，對各組檢測結(jié)果的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析，陽性率的比較用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 RA組和正常對照組各指標檢測結(jié)果

RA 活動組IL－6、TNF－α、vWF、sICAM－1、sVCAM－1水平及ANCA陽性率均高于對照組；RA緩解組IL－6、vWF水平低于RA活動組，vWF、sV－CAM－1水平高于對照組。見表1。

2.2 RA患者血清炎性因子與血管內(nèi)皮損傷標志物水平的相關(guān)性分析

RA活動組的IL－6與sVCAM－1呈顯著正相關(guān)，IL－1β與 vWF、sICAM－1 呈 顯 著 負 相 關(guān)，IL－17與vWF、sVCAM－1呈顯著正相關(guān)；在RA緩解組內(nèi)，IL－1β與vWF呈顯著負相關(guān)。見表2。

表1 各組炎性因子及血管內(nèi)皮損傷標志物指標檢測結(jié)果

表2 RA患者炎性因子與血管內(nèi)皮損傷相關(guān)性（r）

2.3 RA患者ANCA陽性組與ANCA陰性組各血管內(nèi)皮損傷標志物水平比較

ANCA陽性組vWF水平高于ANCA陰性組，見表3。

表3 RA患者ANCA陽性組與ANCA陰性組血管內(nèi)皮損傷標志物水平

3 討 論

血管內(nèi)皮損傷的發(fā)生是一個緩慢的亞臨床狀態(tài)，因缺乏明顯的臨床癥狀，所以在臨床診療中常常被忽視。血管內(nèi)皮細胞損傷后常釋放其獨特內(nèi)容物vWF，并伴有ICAM－1、VCAM－1表達的增加，因此vWF、sICAM－1、sVCAM－1血清濃度升高可作為血管內(nèi)皮細胞損傷的標志［6］。與其它方法如血管造影術(shù)、血流擴張術(shù)、激光多普勒流量技術(shù)等［7］比較，其操作簡單方便，創(chuàng)傷性較小，標本便于保存，因此臨床應用較多。長期隨訪結(jié)果顯示，高水平vWF與RA患者后期罹患心血管疾病相關(guān)［8］，本文結(jié)果顯示RA患者的血管內(nèi)皮損傷血清標志物vWF、sICAM－1、sVCAM－1水平均高于對照組（P＜0.05），其中RA活動組患者vWF水平高于緩解組（P＜0.05），RA緩解組vWF、sVCAM－1水平顯著高于對照組（P＜0.01），提示RA患者存在血管內(nèi)皮損傷，并與RA活動性有關(guān)。

RA患者體內(nèi)多種炎性細胞因子的過度表達，可能參與血管內(nèi)皮細胞損傷。炎性細胞因子損傷血管內(nèi)皮的具體機制不明確，可能是這些炎性因子直接作用于血管內(nèi)皮細胞，誘導血管內(nèi)皮細胞高表達黏附分子，導致大量白細胞的黏附，誘發(fā)白細胞活化與“呼吸爆發(fā)”，產(chǎn)生大量氧自由基和過氧化氫等損傷內(nèi)皮細胞［9］。本文檢測結(jié)果顯示，RA患者炎性因子IL－6、TNF－α均明顯高于對照組（P＜0.05），且活動期IL－6水平高于緩解期（P＜0.05）。進一步分析顯示，RA 患者炎性因子IL－6、IL－1β、IL－17與血管內(nèi)皮損傷標志物vWF、sVCAM－1、sICAM－1有不同程度的相關(guān)性，提示RA患者炎性細胞因子可能參與血管內(nèi)皮細胞損傷。

ANCA是以中性粒細胞主要顆粒成分和單核細胞溶酶體為靶抗原的自身抗體，可能通過直接作用于中性粒細胞，使之出現(xiàn)脫顆粒反應，產(chǎn)生氧自由基、細胞因子和釋放蛋白酶，導致血管內(nèi)皮細胞損傷［10］；ANCA還是刺激單核細胞產(chǎn)生促炎癥細胞因子的強力誘導劑，后者通過募集和激活白細胞，促進白細胞與血管內(nèi)皮細胞的黏附［11］。本研究顯示RA患者活動組ANCA陽性率為32.5%，明顯高于對照組（P＜0.01），可見RA患者具有較高ANCA陽性率。且ANCA陽性RA患者組的vWF水平顯著高于ANCA陰性組（P＜0.01），進一步證實RA患者ANCA陽性與血管內(nèi)皮損傷有關(guān)。

綜上所述，RA患者存在血管內(nèi)皮損傷，患者血清中高水平炎性因子及自身抗體（如ANCA）可能參與血管內(nèi)皮細胞損傷的發(fā)生。因此對于具有高水平炎性因子以及ANCA陽性的RA患者，尤其是活動期患者，應積極采取措施降低炎癥反應及自身抗體水平，及早預防RA患者遠期心血管疾病的發(fā)生。

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