高效液相色譜法測(cè)定喜炎平注射液中穿心蓮內(nèi)酯的含量

張玉霖 張又枝 陳 莉

（咸寧學(xué)院藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100）

喜炎平注射液可抗病毒且廣譜抗菌，在臨床上廣泛用于治療支氣管炎、病毒性肺炎、扁桃體炎、小兒急性熱性疾病以及細(xì)菌性痢疾等疾病[1-3]，主要成分是由穿心蓮內(nèi)酯通過(guò)磺化反應(yīng)制得的穿心蓮內(nèi)酯總磺化物[4,5]，磺化反應(yīng)不完全或者磺化物分解可產(chǎn)生穿心蓮內(nèi)酯，穿心蓮內(nèi)酯也具有穿心蓮抗炎、抗菌、抗病毒等功效，但其含量多少可反映喜炎平注射液的整體質(zhì)量，目前未見喜炎平注射液中穿心蓮內(nèi)酯測(cè)定方法的報(bào)道，為了進(jìn)一步完善這類注射液的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，我們建立了HPLC法測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯的含量，現(xiàn)介紹如下。

1 儀器與試藥

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津），SPD20A 型紫外檢測(cè)器，N2000型色譜數(shù)據(jù)工作站，F(xiàn)A2004電子分析天平，SK2200H超聲儀。穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)：110797-200307，中國(guó)藥品生物制品檢定所），喜炎平注射液（江西青峰藥業(yè)有限公司），甲醇為色譜純 ，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱： Eurospher 100～5 C18（250 mm× 4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（90:10）；檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm；流速：lmL/min；柱溫：室溫。色譜圖見圖1。

圖1

2.2 線性關(guān)系

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品49.68mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解適量，超聲5min，用甲醇并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1、2、4、6、8、10mL分別置于 l0mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述色譜件，分別取20μL進(jìn)樣，以峰面積 y對(duì)對(duì)照品進(jìn)樣量（μg/mL ）作線性回歸。結(jié)果回歸方程（n=6）為：Y=11967.8x+ 324621，r2= 0.9996。

線性范圍為：24.84μg/mL～248.4μg/mL。

2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密量取2.00mL同一批號(hào)樣品（批號(hào)：20100531）6份，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法，測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯的含量，RSD為 0.87%。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的第 1份溶液，室溫下在 0、0.5、1、2、3h測(cè)定，結(jié)果表明，本品的供試品溶液在室溫 3h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD=0.77%，n=5。

2.5 精密度試驗(yàn)

取濃度為124.2μg/mL的穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果 RSD為 0.84%。

2.6 加樣回收實(shí)驗(yàn)

精密量取喜炎平注射液2.00 mL，分別置10mL量瓶中，再分別精密加入對(duì)照品溶液，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，照樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.7 樣品測(cè)定

精密量取本品2.00mL，于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，按上述色譜條件，取20μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 喜炎平注射液測(cè)定結(jié)果表（n=5）

3 討 論

本研究采用高效液相色譜法測(cè)定，檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相的組成均參照《中國(guó)藥典》[6]穿心蓮項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，采用比較常用的甲醇-水作為流動(dòng)相?？疾炝瞬煌鲃?dòng)相配比的分離情況，其中甲醇-水（90∶10）時(shí)所得色譜圖中峰形和分離度都比較滿意。該方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，為藥品質(zhì)量控制提供了一定的參考。有研究[5]表明，以穿心蓮內(nèi)酯為表征性參比物質(zhì)，通過(guò)校正因子，可實(shí)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯磺化物對(duì)照品量值的準(zhǔn)確傳遞。在該色譜條件下，能否實(shí)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯磺化物對(duì)照品量值的準(zhǔn)確傳遞，從而在穿心蓮內(nèi)酯磺化物對(duì)照品不易獲得的情況下以穿心蓮內(nèi)酯為對(duì)照品間接測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯磺化物的量，還需要進(jìn)一步考察。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果表（n=5）

[1]李艷梅,王雪梅.喜炎平治療病毒性上呼吸道感染等312例[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2004,14(4):244-245.

[2]陳銀喜,宋宗武,陳銀珍,等.喜炎平治療小兒毛細(xì)支氣管炎 50例[J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,14(5):14.

[3]何永勝.喜炎平注射液治療小兒急性腹瀉病療效觀察[J].實(shí)用醫(yī)技,2007,l4(5):587.

[4]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).中藥成方制劑[S].19冊(cè),1998:129.

[5]鄒曉麗,于翠翠,許卉,等.喜炎平中穿心蓮內(nèi)酯磺化物 E含量測(cè)定對(duì)照品量值傳遞方法研究[J].藥物分析雜志,2010,30(1):134-137.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:189.