高效液相色譜法測(cè)定桃花前列康丸中綠原酸的含量

高琳琪 崔紅彬

（1 虞城縣食品藥品檢驗(yàn)所，河南 虞城 476300；2 商丘市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 商丘 476000）

桃花前列康丸是由桃仁、紅花、延胡索、金銀花、薏苡仁、鱉甲、丹參、懷牛膝等26味藥材加工制成的醫(yī)院制劑，具有解毒化瘀、通淋止疼之功效，主治前列腺炎、前列腺增生、睪丸炎、附睪炎、尿道炎、性病后遺癥等[1]。綠原酸為金銀花的主要有效成分，綠原酸具有抗菌、消炎、止血作用，對(duì)治療前列腺炎起重要作用?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未收載含量測(cè)定項(xiàng)目，不能有效的控制藥品質(zhì)量。本文以綠原酸為指標(biāo)成分，建立了測(cè)定桃花前列康丸中綠原酸的高效液相測(cè)定法，為該制劑的質(zhì)量控制提供了客觀的含量評(píng)價(jià)方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilengt 1260高效液相色譜儀，AUW-220D電子分析天平DSQ10260超聲儀。

1.2 試藥

圖1 高效液相色譜圖

綠原酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110753-200212）；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。桃花前列康丸由市中醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果[2]

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色譜柱（4.6×100mm）

流動(dòng)相：乙腈：0.4%磷酸（17∶83）為流動(dòng)相；流速0.6mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；進(jìn)樣量10μL；柱溫：30℃，理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。

2.2 線性關(guān)系考察

取綠原酸對(duì)照品約10mg，精密稱(chēng)定，置50mL棕色量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為備用溶液（10℃以下保存）。精密取上述備用液2mL，置10mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，即得。按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣1、2、4、6、8、10、12、14、16μL，記錄綠原酸對(duì)照品峰面積值，以峰面積積分值（Y）對(duì)對(duì)照品濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=5442.12716X-33.94086 r=0.9996。結(jié)果表明，綠原酸對(duì)照品在0.04256～0.6810μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.3 供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備

取本品約8.0g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250W，頻率35kHz）30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密取續(xù)濾液5mL，置25mL棕色量瓶中加入50%甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。另取缺金銀花的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.4 干擾試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10μL，按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，陰性樣品無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.5 精密度試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL，記錄綠原酸峰面積，RSD=0.32%（n=6），表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，分別在0、2、4、8、12、16h進(jìn)樣測(cè)定，RSD=0.89%，供試品溶液在16h內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取6份已知含量為0.0847mg/g的樣品約5.0g，精密稱(chēng)定，分別置1～6號(hào)錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液2mL，按照“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備溶液，按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 3批樣品中綠原酸的含量

2.8 樣品測(cè)定

取3批樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，各進(jìn)樣10μL，按外標(biāo)法計(jì)算綠原酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討 論

3.1 提取溶劑的選擇

發(fā)現(xiàn)以50%甲醇為溶劑測(cè)定含量，比用甲醇為溶劑所得的含量高[3]。

3.2 流動(dòng)相選擇

本試驗(yàn)曾用甲醇-0.4%磷酸溶液（15∶85），為流動(dòng)相[4]，主成份峰出峰效果較差，而采用乙腈-0.4%磷酸（17∶83）為流動(dòng)相，色譜峰顯示，綠原酸與相鄰的組分分離度＞1.5，具有較好的分離效果，且理論板數(shù)較高

3.3 桃花前列康丸是由桃仁、紅花、延胡索、金銀花、薏苡仁、鱉甲、丹參、懷牛膝等26味藥材加工制成的醫(yī)院制劑，組分復(fù)雜，質(zhì)量難以控制，綠原酸對(duì)其療效具有重要作用，本試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，具有較強(qiáng)的專(zhuān)屬性，回收率好，能夠更有效的控制該制劑質(zhì)量的質(zhì)量。

[1]河南省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

[3]張?jiān)?徐照輝.高效液相色譜法測(cè)定抗感口服液中綠原酸的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2007,24(S1):631-633.

[4]莫文電,韋建橋,石天松.高效液相色譜法測(cè)定痔炎消膠囊中綠原酸的含量[J].中國(guó)藥師,2008,6(11):661-663.