冠狀動脈內(nèi)臍血干細(xì)胞移植對冠心病患者室性心律失常的影響

韋方，羅罕，李安杰，周永剛，梁青龍，周松

(1.貴州省人民醫(yī)院心內(nèi)科，貴州貴陽550002;2.武威市人民醫(yī)院內(nèi)科，甘肅武威733000)

近年來，采用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，將促血管生成因子或干細(xì)胞移植到缺血區(qū)域，通過促進(jìn)新生血管形成及側(cè)支循環(huán)的建立和開放達(dá)到所謂“分子搭橋”的治療技術(shù)越來越引起人們的興趣和關(guān)注。目前干細(xì)胞移植治療的疾病已經(jīng)達(dá)80多種，在惡性腫瘤、免疫缺陷、神經(jīng)系統(tǒng)損傷、組織器官修復(fù)、糖尿病、血管疾病及心臟病等的治療上顯示出巨大的潛力［1］。但是干細(xì)胞移植后是否會打破正常心肌的電活動而引起心律失常尚無定論［2］。本文旨在探討冠狀動脈內(nèi)臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植對冠心病患者室性心律失常的影響，為其臨床應(yīng)用提供參考。

1 對象與方法

1.1 病例

選擇2009年1月至2010年12月我科住院患者40例，所有患者經(jīng)冠狀動脈造影證實(shí)為多支血管彌漫病變，均無介入手術(shù)及冠脈搭橋指征。年齡47～72歲(56.4±8.8)歲，男28例，女12例。隨機(jī)分為內(nèi)科藥物治療組(對照組)和干細(xì)胞移植組(實(shí)驗(yàn)組)，實(shí)驗(yàn)組在內(nèi)科藥物治療基礎(chǔ)上選擇左前降支(LAD)為干細(xì)胞移植靶血管。兩組患者年齡、性別、合并高血壓、糖尿病等情況及基礎(chǔ)心功能間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有患者無嚴(yán)重的肝腎功能不全，排除惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病，全部患者知情同意并接受手術(shù)。

兩組患者均規(guī)律服用阿司匹林，ACEI或ARB，β-受體阻滯劑，他汀類，硝酸脂類，利尿劑等，每日服用劑量及次數(shù)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 人臍血單個(gè)核細(xì)胞的提取與制備 所有臍帶血均來自貴州省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，采自無妊娠并發(fā)癥，身體健康，新生兒足月分娩(37～40周)孕婦。均為捐獻(xiàn)者自愿捐獻(xiàn)，且同意用于科學(xué)研究和臨床治療。一次性血袋采集臍血80～120 mL，6 h內(nèi)分離，采用60 g/L羥乙基淀粉沉淀及1.077 g/L Ficoll-Paque密度梯度離心兩步分離法，吸取中間含單個(gè)核細(xì)胞的白膜層，PBS洗2次，全程嚴(yán)格無菌操作，分離好的干細(xì)胞在30 min內(nèi)注入冠狀動脈內(nèi)。1.2.2 臍血單個(gè)核細(xì)胞移植手術(shù) 患者取平臥位，常規(guī)消毒鋪巾，2%利多卡因局部麻醉，橈動脈穿刺建鞘，通過指引導(dǎo)管經(jīng)鋼絲ATM(日本醫(yī)療器械公司泰爾茂Terumo Corp)將非快速交換球囊(overthe-wier，美國強(qiáng)生Cordis公司)超選擇到左前降支，退出鋼絲，4～6 ATM充盈球囊，經(jīng)球囊中央孔將5 mL臍帶血單個(gè)核細(xì)胞緩慢灌注3 min至前降支。全程監(jiān)測心率、血壓、血氧飽和度。

1.2.3 24 h動態(tài)心電圖檢測 術(shù)前，術(shù)后1周，術(shù)后8周行24 h動態(tài)心電圖檢查(采用24 h 12導(dǎo)聯(lián)同步動態(tài)HOLTER型號SDD-12A動態(tài)心電圖分析系統(tǒng)，由長春時(shí)代數(shù)碼有限責(zé)任公司生產(chǎn))。心律失常的判斷按照Lambeth會議標(biāo)準(zhǔn)，評分參照Wang等［3］的評分規(guī)則。具體如下:①0分，無心律失常;②1分，偶發(fā)室性期前收縮(指1 min內(nèi)發(fā)生3次以下的室性期前收縮);③2分，頻發(fā)室性期前收縮(指1 min內(nèi)發(fā)生3次或3次以上的室性期前收縮);④3分，偶發(fā)室速(指1 min內(nèi)發(fā)生3次以下的室速);⑤4分，頻發(fā)室速(指1 min內(nèi)發(fā)生3次或3次以上的室速)或偶發(fā)室顫(指1 min內(nèi)發(fā)生3次以下的室顫);⑥5分，頻發(fā)室顫(指1 min內(nèi)發(fā)生3次或3次以上的室顫)或死亡。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理，計(jì)量資料采用配對t檢驗(yàn);資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示;P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組所有患者均成功完成手術(shù)，平均手術(shù)時(shí)間為(12.6±3.2)min。移植后1周、8周心律失常評分明顯低于對照組及移植前(P ＜0.05、0.01)，移植后8周時(shí)心律失常評分較移植后1周降低(P＜0.05)。

表1 兩組患者心律失常評分比較 ±s，n=20

表1 兩組患者心律失常評分比較 ±s，n=20

與對照組比較，a:P ＜0.05，b:P ＜0.01;移植后8周與1周比較，c:P ＜0.05。

組別 移植前 移植后1周 移植后8周對照組 2.80 ±0.75 2.91 ±0.96 2.87 ±0.73實(shí)驗(yàn)組 2.88 ±1.05 1.67 ±0.71a 1.07 ±0.43b，c

3 討論

心肌梗死后心肌細(xì)胞丟失，損傷的心肌被纖維瘢痕取代，由此而導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)和電重構(gòu)是導(dǎo)致心力衰竭(心衰)進(jìn)展及心律失常的主要因素。常用的藥物治療、介入治療及冠狀動脈旁路移植雖有一定效果，但都不能代替壞死的心肌細(xì)胞，因而療效有限。近年來隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物工程技術(shù)的發(fā)展以及對細(xì)胞研究的深入，大量動物實(shí)驗(yàn)和基礎(chǔ)研究證實(shí)可通過干細(xì)胞移植技術(shù)，使干細(xì)胞在瘢痕組織內(nèi)分化為有功能的心肌細(xì)胞，替代壞死心肌，從而改善心功能［4］。臍血干細(xì)胞因來源豐富，取材方便、幾乎無免疫原性、多向分化潛能、移植成功率高等優(yōu)點(diǎn)，是近年來倍受矚目的理想移植細(xì)胞［5］，因此本研究選擇臍血干細(xì)胞。

惡性心律失常所致的心源性猝死是冠心病最主要的死亡原因，是影響患者生存的主要因素，干細(xì)胞移植后是否有致心律失常作用也是人們所長期關(guān)注的。體外研究表明，胚胎干細(xì)胞在體外培養(yǎng)向心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過程中可記錄到INa電流，可能具有致心律失常作用［6］。但活體動物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證實(shí)干細(xì)胞移植并未增加心律失常發(fā)生率［7］。本研究結(jié)果表明，移植后1周、8周心律失常評分較術(shù)前及對照組明顯降低，而移植后8周時(shí)心律失常評分進(jìn)一步降低，說明臍血干細(xì)胞移植不但沒有增加室性心律失常發(fā)生，反而有助于減少惡性心律失常的發(fā)生，究其原因，可能與干細(xì)胞移植后心功能改善及心肌灌注改善有關(guān)，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

［1］Tse W，Laughlim MJ.Umbilical cord blood transplanta-tion:a new alternative option［J］.Hematology Am Soc Hematol Educ Program，2005(1):377－383.

［2］Menasche P，Hagege AA，Vilquin JT，et al.Autologous skeletal myoblast transplantation for severe postinfarction left ventricular dysfunction［J］.J Am Coll Cardiol，2003，41(7):1078－1083.

［3］Wang GY，Wu S，Pei JM，et al.Kappa-but not delta-opioid receptors mediate effects of ischemic preconditioning on both infarct and arrhythmia in rats［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2001，280(1):H384 －391.

［4］Strauer BE，Brehm M，Zeus T，et al.Repair of infarcted myocardium by autologous intracoronary mononuclear bone marrow cell transplantation in humans ［J］.Circultation，2002，106(15):1913 －1918.

［5］Ma N，Stamm C，Kaminski A，et al.Human cord blood cells induce angiogenesis following myocardial infarction in NOD/scid-mice ［J］.Cardiovasc Res，2005，66(1):45－54.

［6］Satin J，Kehat I，Caspi O，et al.Mechanism of spontaneous excitability in human embryonic stem cell derived cardiomyicytes［J］.J Physiol，2004，559(pt2):479 －496.

［7］史力生.自體骨髓干細(xì)胞心肌移植治療急性心肌梗死過程中電生理特性表達(dá)及對心律失常影響的機(jī)制研究［D］.石家莊:河北醫(yī)科大學(xué)，2006.