川芎茶調(diào)方超微散與其普通散質(zhì)量對(duì)比分析研究

★ 黃何松 于玲玲 王焱 李躍輝 蔡光先 李俊*

（1.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004；2.澳門大學(xué)中華醫(yī)藥研究院 澳門 999078；3.湖南省中醫(yī)藥研究院 長(zhǎng)沙 410006）

川芎茶調(diào)散源于《太平惠民和劑局方》，具有疏風(fēng)止痛的功效，為《中國(guó)藥典》2005版一部所收載。本文通過對(duì)川芎茶調(diào)方超微散與其普通散的粒徑、顯微特征、薄層色譜及其指標(biāo)成分阿魏酸溶出行為的對(duì)比研究，為川芎茶調(diào)方超微散的臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 BFM-T6BI型翻滾式貝利粉碎機(jī)（濟(jì)南倍力粉技術(shù)工程有限公司）；SHIMADZULC-10AT高效液相色譜儀（日本島津），N2000化學(xué)工作站；ZRS-8G智能藥物溶出試驗(yàn)儀（天津大學(xué)無線電生產(chǎn)廠）；依利特Hypersil ODS C18色譜柱（4.6mm×200mm）；winner3001干粉激光粒度測(cè)定儀及激光粒度分析系統(tǒng)（濟(jì)南微納儀器有限公司）。

1.2 試藥 川芎茶調(diào)方超微散與其普通散由湖南省中醫(yī)藥研究院超微工程中心提供（批號(hào)：20080716）；阿魏酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)110773-9910），川芎對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)120918-200406），羌活對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)120935-200405）；甲醇為色譜純，正己烷、苯、乙酸乙酯、乙酸均為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 川芎茶調(diào)方超微散與其普通散的制備

2.1.1 超微散（以下簡(jiǎn)稱CW散）按原方比例稱取方中各藥味，混合粉碎成粗粉，置烘箱中（60℃）干燥10小時(shí)，粉碎成超微粉，備用。

2.1.2 普通散（以下簡(jiǎn)稱PT散）參照《中國(guó)藥典》2005版二部[川芎茶調(diào)散]項(xiàng)下制法，按比例稱取方中各藥味，粉碎成細(xì)粉，過100目篩，混合均勻，備用。

2.2 粒徑測(cè)定 采用Winner3001干粉激光粒度儀測(cè)定CW散的粒徑，結(jié)果表明，CW散的D50為11.66μm，粒徑小于75μm的顆粒累積達(dá)91.3%。

2.3 顯微特征對(duì)比 CW散與PT散顯微特征對(duì)比結(jié)果見表1（圖1）。

表1 顯微特征對(duì)比表

圖1 顯微特征圖

2.4 薄層色譜對(duì)比[1]

分別稱取CW散與PT散各1.5克，加石油醚（60℃-90℃）10mL，密塞，時(shí)時(shí)振搖，浸提4小時(shí)，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取川芎、羌活對(duì)照藥材各0.2克，同法制分別制成對(duì)照藥材溶液。按處方配比稱取除川芎及羌活以外的其它藥味適量，按制法分別制成缺川芎、缺羌活的陰性樣品，同法分別制成缺川芎、缺羌活的陰性樣品溶液。吸取上述三種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，川芎對(duì)照板以正己烷-乙酸乙酯（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。羌活對(duì)照板以正己烷-苯-乙酸乙酯（2：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105℃下烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品色譜中在相應(yīng)位置上無斑點(diǎn)。

2.5 溶出行為對(duì)比

2.5.1 色譜條件[2]色譜柱：Hypersil ODS 5μm色譜柱（4.6mm×200mm）；流速1.0mL/分；以甲醇-2%乙酸溶液（25：75）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為323nm。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對(duì)照品適量，用甲醇-2%乙酸（30：70）溶液配制成每1mL含阿魏酸0.15mg的對(duì)照品溶液。

2.5.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液（0.15mg?mL-1）1、2、3、4、5μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定。將阿魏酸峰面積與進(jìn)樣量進(jìn)行回歸得方程：y=387561x-3999.1（R=0.999），阿魏酸進(jìn)樣量在0.15-0.75μg之間線性關(guān)系良好。

2.5.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2μL，依法測(cè)定，重復(fù)測(cè)定5次，測(cè)得阿魏酸峰面積RSD為1.3%。

2.5.5 溶出度的測(cè)定[3]分別精密稱取CW散與PT散各60克，置溶出杯中，加經(jīng)脫氣處理后的重蒸餾水900mL作為溶出介質(zhì)，參照《中國(guó)藥典》2005版二部溶出度測(cè)定法（漿法），恒溫37.5℃，轉(zhuǎn)速75r/分，分別于5、10、15、25、40、60、120、240分鐘處定位精密吸取5mL溶出液至離心管中（同時(shí)在等溫條件下補(bǔ)充5mL重蒸餾水），離心，將上清液全部轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，再用甲醇-2%乙酸（30：70）溶液溶解并轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）過濾，取續(xù)濾液注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定，計(jì)算得CW散與PT散中阿魏酸在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的溶出量，結(jié)果見表2（圖2）。

表2 阿魏酸累積溶出量

圖2 阿魏酸HPLC圖譜

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取2.5.5項(xiàng)下樣品溶液（10分鐘時(shí)間點(diǎn)）10μL，依法測(cè)定4次，每隔2小時(shí)測(cè)定1次，測(cè)得阿魏酸的峰面積RSD值為2.95%。

2.5.7 累積溶出百分率及溶出曲線 根據(jù)2.5.5項(xiàng)下樣品溶液（240分鐘時(shí)間點(diǎn)）中阿魏酸的溶出量，可假定CW散、PT散在該溶出條件下阿魏酸總?cè)艹隽烤鶠?0mg，計(jì)算得阿魏酸的累積溶出百分率，見表3，繪制溶出曲線（見圖3）。

表3 阿魏酸累積溶出百分率

圖3 阿魏酸溶出曲線

2.5.8 溶出速率比較 將表3中數(shù)據(jù)按Weibull分布模型進(jìn)行擬合。結(jié)果表明，CW散與PT散中阿魏酸體外溶出行為均符合Weibull分布，擬合方程分別為 ：ln[-ln（1-F1）]=0.373lnt1-1.19（r1=0.97）、ln[-ln（1-F2）]=0.51lnt2-2.01（r2=0.98），根據(jù)擬合方程計(jì)算阿魏酸的溶出參數(shù)，見表4。

表4 阿魏酸溶出參數(shù)

3 討論

川芎茶調(diào)方超微散與其普通散中阿魏酸的溶出參數(shù)表明，其溶出行為與溶出曲線相一致：當(dāng)溶出量小于50%時(shí)，超微散中阿魏酸的溶出速率遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過普通散，達(dá)3倍以上；溶出量超過50%后，超微散與普通散中阿魏酸的溶出速度均明顯放緩；隨著溶出量的增加，超微散與普通散中阿魏酸溶出量與溶出速率趨于接近。

中藥的藥效成分通常分布于細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞間質(zhì)，以細(xì)胞內(nèi)為主，中藥經(jīng)超微粉碎后，粒徑變小，細(xì)胞尺寸改變，有利于藥效成分溶出。將超微粉碎技術(shù)應(yīng)用于中藥成方制劑中，能加快其藥效成分的溶出速度，對(duì)于提高藥品質(zhì)量，保證臨床療效具有重要意義。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：340.

[2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：339.

[3]蔡光先，李躍輝，楊永華.生脈超微顆粒與其散劑的體外溶出度研究[J].中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004，19（10）：603-606.